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猪IL-2成熟蛋白在昆虫细胞中的表达及生物学活性鉴定被引量：2: 2010年; 以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增猪IL-2成熟蛋白基因。将猪IL-2成熟蛋白基因定向克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含猪IL-2基因的重组质粒rBacmid-IL2,转染昆虫细胞。间接免疫荧光试验表明重组猪IL-2在Sf9昆虫细胞中获得了表达,SDS-PAGE可检测到相对分子质量为20000的重组蛋白,Western-blot证实该重组蛋白可与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应,重组猪IL-2经纯化后能明显促进猪T淋巴细胞转化。结果表明,重组猪IL-2在昆虫细胞中得到表达,表达的重组蛋白具有一定生物学活性,为进一步开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。; 陈红英郭小参崔保安王彦彬张红英方剑玉; 关键词：昆虫细胞生物学活性

麻鸭IL-18成熟蛋白基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性检测: 引言与目的：白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是近年来新发现的一种重要的细胞免疫调节因子,具有多种生物学功能。在禽类,Schneider 等(2000)首次获得 ChIL-18 cDNA,并在大肠...; 管倩崔保安陈红英杨明凡魏战勇郭小参; 关键词：IL-18 亚克隆生物学活性油乳苗; 文献传递

复合RT-PCR检测猪乙脑病毒和猪流感病毒方法的建立被引量：10: 2008年; 根据GenBank上已发表的猪乙脑病毒(JEV)的E基因序列和猪流感病毒(SIV)的NP基因序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了JEV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了JEV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,利用一次RT-PCR反应,即可同时扩增JEV的349 bp和SIV 155 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)核酸扩增结果为阴性,对JEV和SIV的最低检出量分别为100和10 pg的cDNA.该方法适合对JEV和SIV的联合检测和鉴别诊断.; 吕晓丽崔保安陈红英魏战勇王东方郭小参; 关键词：复合RT-PCR 猪流感病毒

蜂素信号肽介导猪干扰素-γ在杆状病毒中分泌表达及抗病毒活性检测被引量：5: 2010年; 应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟的猪干扰素-γ基因插入供体质粒pFastBacTM1polyhedrin启动子控制下的多克隆位点,引入昆虫细胞可识别的蜂素信号肽(Honeybee melittin signal peptide)取代猪干扰素-γ原有信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭载体质粒,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组蛋白通过SDS-PAGE、间接免疫荧光、Western-blot证明在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得分泌表达。通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性是1.38×106U/mL。; 王彦彬魏战勇陈红英王建举郭小参崔保安; 关键词：干扰素杆状病毒抗病毒活性

麻鸭γ-干扰素基因的克隆与序列分析被引量：1: 2007年; 应用RT-PCR技术,直接从成年麻鸭脾淋巴细胞提取的总RNA中扩增出麻鸭γ-干扰素基因(duIFN-γ),并克隆、测序。测序结果表明,麻鸭IFN-γ全序列大小为515 bp,包含一个完整阅读框(495 bp),编码164个氨基酸残基,推导的氨基酸有3个潜在的N-糖基化位点,有5个与二硫键形成有关的半胱氨酸。麻鸭IFN-γ基因序列与AF087134、AF100929、AJ012254的序列完全一致,而与北京鸭(AY166850)核苷酸同源性为99.6%,有2个碱基差异,为非同义突变,氨基酸同源性为98.8%。麻鸭IFN-γ基因与鸡、火鸡和鹌鹑IFN-γ基因核苷酸序列同源性分别为77.2%、78.0%、78.8%,氨基酸序列同源性均67.1%,而与人、狒狒、猪、牛、绵羊、犬、猫IFN-γ核苷酸序列同源性为39.7%～42.1%,氨基酸序列同源性在28.0%～31.7%之间。; 陈红英崔保安赵丽崔沛郑兰兰王东方郭小参; 关键词：IFN-Γ 基因克隆

猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建被引量：2: 2009年; 参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序。测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%。将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2。本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。; 郭小参崔保安陈红英王彦彬方剑玉吕晓丽王东方; 关键词：克隆杆状病毒

猪圆环病毒PCR检测方法的建立被引量：1: 2009年; 本研究建立了检测猪圆环病毒的PCR方法,并对该方法进行了标准化研究。该方法具有快速、敏感、特异性强等特点,从PCV2感染的细胞中可最低扩增到0.1 ng的DNA,且对其它病原微生物如PRV、PPV不能检出。可对病料、血清提取DNA进行检测,所有程序在5 h内得出结果。该方法可用于PCV2感染猪的快速诊断,引种检疫,分子流行病学调查。; 王东方魏战勇崔保安陈红英郭小参吕晓丽管倩; 关键词：PCR 猪圆环病毒

淮南猪IL-2全基因的克隆与遗传进化分析被引量：4: 2008年; 参照GenBank发表的猪IL-2cDNA基因序列,设计1对引物,将河南地方品种淮南猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-T Easy载体上并测序。测序结果显示,克隆的HuainanPIL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465bp,编码154个氨基酸,分子量为17.4 kDa,等电点为5.27,疏水氨基酸38.3%,亲水氨基酸42.0%,碱性氨基酸11%,酸性氨基酸23%。此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、狗、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%,82.6%,28.2%,80.6%,29.6%,83.4%,81.3%,82.0%,61.5%。; 郭小参崔保安陈红英杨明凡管倩吕晓丽王东方; 关键词：白细胞介素-2 基因克隆遗传进化分析

淮南猪IL-2基因的克隆及在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达: 白细胞介素2(Interleukin-2，IL-2)主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类细胞因子，在机体免疫应答中起重要作用。其最重要的功能是诱导T淋巴细胞增殖(从G0期到S期)和分化，并且具有刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞...; 郭小参; 关键词：白细胞介素2 大肠杆菌昆虫杆状病毒; 文献传递

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