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抗人红细胞-汉滩病毒核衣壳截短蛋白双功能蛋白的构建及表达: 2001年; 为了构建及表达抗人红细胞单链抗体 -汉滩病毒核衣壳截短抗原双功能蛋白 ,用于肾综合征出血热病人血清中抗HFRSV抗体的快速检测 ,我们将抗人红细胞的鼠单克隆抗体重、轻链可变区基因及汉滩病毒S基因片段N端部分基因克隆在同一个表达载体中 ,构建成分泌型双功能抗体表达载体pRBC -SN ,转化大肠杆菌XL -Blue,IPTG诱导表达。经ELISA测定 ,证明表达的双功能蛋白 ,具有抗人RBC和结合抗HFRSV抗体的双重功能。结果提示 ,表达的双功能蛋白具有双重活性 ,用于血清学快速检测 ,还需作进一步改构。; 操敏唐家琪李光富王长军李先富潘秀珍; 关键词：单链抗体肾综合征出血热汉坦病毒

绿色荧光蛋白基因与乙肝病毒e抗原基因在家蚕细胞中的表达被引量：1: 1997年; 用绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｅ抗原基因融合，构建了家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）重组转移载体ｐＢｍＧＨｅ，使融合基因处于多角体基因（ｐｌｈ）启动子控制之下。共转染后得到的重组病毒ｒＢｍＧＨｅ能在家蚕细胞中表达约５０ｋＤａ的ＧＦＰ／ＨＢＶｅ融合蛋白。被感染的细胞在紫外光下发射出美丽的绿色荧光。用ＥＬＩＳＡ检测，ＨＢｅＡｇ抗原活性滴度达到１１２８００。这种既能发射绿色荧光又具有抗原活性的双功能融合蛋白为研制一种新型的发光免疫诊断试剂开辟了一条新路。; 邓小昭刁振宇吴鸿银何亮张林元李光富胡建红黄永秀; 关键词：GFP BMNPV 融合蛋白

重组病毒－家蚕细胞系统表达人α_1－干扰素的纯化研究: 1996年; 用重组家蚕核多角体病毒（ｒＢｍＮＰＶ－ＩＦＮ－α）感染家蚕细胞，经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析柱及单克隆抗体亲和层析，从细胞培养液中分离纯化α－干扰素，纯化倍数为１０１０，比活性为５．８７×１０８ＩＵ／ｍｇ蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电冰呈单一条带，并用激光解离电离飞行质谱分析测定其分子量为２０４６５Ｄ，毛细管电泳鉴定纯度为９９．１％。表达产物Ｎ端１５个氨基酸分析结果与ＩＦＮ－α１ｃＤＮＡ推导的序列相同。; 邓小昭刁勇刁振宇李光富陈华标张林元; 关键词：Α-干扰素纯化重组病毒

人α_1－干扰素基因真核表达载体的构建及其活性被引量：1: 1996年; 选用与ＨｕＩＦＮ－α１基因及其信号肽相应的引物，采用ＰＣＲ技术，从中国人血白细胞染色体中分离带有信号肽ＩＦＮ－α１基因片段，分别克隆到质粒Ｍ１３ｍｐ１９和Ｍ１３ｍｐ１８中，通过序列分析进行鉴定，然后克隆到家蚕多角体病毒（１３０ｍｂｙｘｍｏｒｉＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ）载体ＰＢＦ５的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ之间，用合成的相应寡核苷酸片段为引物进行双链测序，鉴定为阳性重组转移载体后，将其ＤＮＡ和ＢｍＮＰＶ基因组ＤＮＡ共转染家蚕细胞，筛选出重组病毒，再将其感染家蚕细胞，测得细胞培养上清中ＩＦＮ活性为１．０×１０６ＩＵ／ｍｌ。; 李光富邓小昭张林元刁振宇陈华标柴建华; 关键词：BMNPV 基因表达 Α-干扰素

抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达被引量：2: 2000年; 从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞 3F5中提取总 RNA,逆转录成 c DNA,用合成的寡核苷酸引物通过 PCR扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因 ,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列 ,采用 PCR拼接法构建单链抗体基因 ,并插入原核表达载体 PEt- 2 8a,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经 IPTG诱导后表达 .序列分析表明所克隆的 VL、VH分别属于鼠 Ig Kappa轻链 IV亚组和 Ig重链亚组 .VH、VL基因均含正确的框架结构 ,构建的单链抗体基因全长 750 bp,在原核系统中的表达产物经 SDS- PAGE分析相对分子量约为 2 80 0 0 .; 操敏唐家琪李光富王长军潘秀珍李先富; 关键词：单链抗体基因基因工程 RBC

重组人α2b型干扰素的纯化与鉴定被引量：3: 1997年; 采用超声波裂解菌体 ,硫酸铵沉淀 ,酸化处理 ,再经离子交换层析和单克隆抗体亲合层析 ,使表达产物纯化了 10 2 9倍 ,比活性达 2 .14× 10 8IU/ mg蛋白 ,SDS- PAGE呈单一条带 ,HPL C纯度 >95% ,回收率达 59.1%。表达产物 N端 2 5个氨基酸序列分析结果与 IFN- α2 b c DNA推导的序列相符合。; 陈华标邓小昭李光富刁振宇张林元; 关键词：干扰素蛋白质纯化

重组病毒/家蚕细胞系统稳定高效表达HBeAg基因的研究被引量：3: 1998年; 以 HBe Ag(乙型肝炎病毒 e抗原 )基因置换家蚕核多角体病毒 (Bm NPV)中多角体蛋白基因编码序列 ,获得高效表达 HBe Ag的重组病毒 r Bm HBe。在重组病毒复制过程中 ,家蚕 Bm N细胞的病理变化与野生型病毒的感染相同 ,但不能形成多角体。重组病毒的复制为典型的一步生长曲线 ,感染后 2 4 h～ 36h,病毒效价递增并达到最高。感染后 2 4 h,培养液中可检测到表达产物HBe Ag,72 h达到高峰。病毒感染复数的改变对 HBe Ag表达的影响是时限性的。低感染复数时HBe Ag产量较高。细胞接种密度及病毒接种时间对 HBe Ag的表达有较大的影响 ,最适的细胞接种密度为 3.2～ 6.4× 1 0 5 细胞 /瓶 ,在细胞指数生长前期 (48h～ 60 h)接种重组病毒 ,对于获得较高的重组病毒复制效价和 HBe Ag的产量都是有利的。在采用最佳技术参数组合的条件下 ,ELISA法检测细胞培养液中 HBe Ag滴度可达 1∶ 32 0 0 0。以上研究结果有助于在生产中高效稳定地制备HBe Ag,以满足供应配套乙肝 HBe Ag/抗; 邓小昭何亮刁振宇张林元李光富; 关键词：核多角体病毒 E抗原 HBV

噬菌体表面表达抗汉坦病毒衣壳蛋白单链抗体的研究被引量：1: 2000年; The expression vector of anti Hantavirus(HV) capsid protein scFv was constructed by DNA recombination and PCR technique,and expressed in E.coli . The expressed scFv was fused with the phage GeneⅢ protein, and located on the surface of phage.The sequencing of scFv demonstrated that the sequence of scFv is consistent with that of cloned antibody variable region from F3 strain hybridom against HV capsid protein.The expressed scFv was proved to be able to bind HV antigen by ELISA.; 李光富唐家琪陈宇萍王琰操敏李先富潘秀珍; 关键词：单链抗体肾综合征出血热病毒

RT-PCR结合限制性片段长度多态性分析对我国汉坦病毒进行基因分型的研究被引量：2: 1999年; 用电脑软件分析ＨＦＲＳＶ囊膜糖蛋白编码基因的Ｍ节段，寻找不同型别间病毒株Ｍ节段的限制性内切酶酶切位点的差异。结果发现，ＨＴＮ型７６１１８株和ＳＥＯ型Ｒ２２株Ｍ节段１１９９～１４９７间的酶切位点，可用于进行限制性内切酶基因多态性分析，以确定ＨＦＲＳＶ的型别。根据上述结果，合成一对引物，建立ＲＴ／ＰＣＲ方法，分别用Ｒｓａｌ、Ｔａｑ１和ＨｉｎｄＩＩＩ３种内切酶对扩增片段进行酶切分型。用此方法分析了从我国不同地区、不同宿主分离的毒株１９株，及国际标准毒株１株。结果表明，９株可定为ＨＴＮ型，８株可定为ＳＥＯ型，３株无法确定其型别。此２０个毒株曾用血清学方法分型，仅１１株分型成功。分型成功率ＲＴＰＣＲ／ＲＦＬＰ法与血清学方法分别为８５％和５５％，前者比后者高３０％。; 唐家琪魏春宝陆承平操敏王长军潘秀珍朱进李光富; 关键词：肾综合征出血热 HFRSV 基因分型 RFLP

汉滩病毒S基因全长和截短片段在大肠杆菌中表达及其初步应用被引量：3: 1999年; 目的体外克隆表达汉滩病毒全长及部分核蛋白编码基因，筛选病毒核蛋白在人体体液应答中的主要抗原决定簇区，以期获得高质量核蛋白抗原，为研制新型肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）基因工程诊断试剂奠定基础。方法利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶酶切的方法分离汉滩病毒７６－１１８Ｓ基因全长及部分氨基端编码基因（Ｓ、ＳＡ、ＳＢ、ＳＣ和ＳＤ），分别将各编码基因克隆入Ｔ７原核表达载体，在大肠杆菌中表达；免疫印迹试验（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓ）分析重组抗原活性。结果完整和截短核蛋白皆得到有效表达，相对分子质量分别为５００００（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＳｐｒｏｔｅｉｎ，ｒＳ）、４５００（ｒＳＡ）、２２０００（ｒＳＢ）、２５０００（ｒＳＣ）和２７０００（ｒＳＤ），Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明截短核蛋白（ｒＳＢ、ｒＳＣ和ｒＳＤ）具有较好的抗原活性；粗提抗原Ｄｏｔｂｌｏｔ方法检测ＨＦＲＳ患者血清结果与ＩＦＡ法一致；重组小片段抗原与抗汉滩病毒单克隆抗体５Ｈ５及Ｈ７可发生特异性反应。结论汉滩病毒核蛋白的氨基端含有一主要抗原决定簇区；原核表达的截短核蛋白在ＨＦＲＳ的血清学诊断中具有一定的价值。; 王长军唐家琪操敏李光富潘秀珍李先富; 关键词：汉滩病毒肾综合征出血热大肠杆菌

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李光富

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