徐江英
- 作品数：8 被引量：53H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军第二军医大学南京军医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省科技厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 叠氮钠、过氧化氢对SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶的影响被引量：2
- 2004年
- 过度氧化应激是诱发许多神经退变病的重要因素。叠氮钠(NaN3)是线粒体有氧呼吸链细胞色素c氧化酶(COX)的特异性抑制剂,过氧化氢(H2O2)释放氧自由基造成氧化损伤,两者都可以用于氧化应激情况下神经元损伤模型的建立。硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)特异性的还原氧化型的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRx),调节细胞中氧化还原的平衡。现以不同浓度NaN3或H2O2处理人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),建立损伤模型。通过MTT法、形态学方法检测SH-SY5Y细胞损伤程度。同时,通过Western blot定量法、免疫细胞化学法,检测损伤的SH-SY5Y细胞中TR含量的改变,观察TR在胞内的分布。实验表明,NaN3、H2O2均以浓度依赖方式损伤SH-SY5Y细胞;TR分布于SH-SY5Y细胞的胞浆,表明TR是一种分泌蛋白,损伤后分布无明显变化。但一定浓度的NaN3作用后3h,胞内TR水平显著降低,即神经系统内呼吸链受损可抑制TR的表达,为神经退变病的防治提供了新的思路。
- 张婷婷高静杨晓荷许琳徐江英
- 关键词：叠氮钠过氧化氢SH-SY5Y细胞硫氧还蛋白还原酶神经退行性疾病
- 爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2AcDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2002年
- 目的 :克隆爱泼斯坦 巴尔病毒 (EBV)潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)基因 ,进一步研究其基因工程疫苗。方法 :用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出EBVB95 8株LMP2A全部编码蛋白的基因 ,并克隆至载体pGEM T中 ,通过α 插入失活、PCR及EcoRⅠ、SmaⅠ限制性内切酶双酶切等鉴定重组质粒 ;采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列。结果 :克隆出LMP2A第 1个外显子到第 8个外显子的全部编码蛋白的cDNA ,测序结果与EB病毒B95 8原型株LMP2AcDNA作同源比较 ,完全一致。结论 :本实验克隆了LMP2A基因的全部编码蛋白的cDNA全长片段。
- 彭光勇姚堃许琳徐江英谢芳艺
- 关键词：爱泼斯坦-巴尔病毒克隆
- 透析袋电洗脱法在蛋白质回收和纯化中的应用被引量：23
- 2003年
- 将初步纯化后的已构建的人脑硫氧还蛋白还原酶基因PET HBTR表达产物进行SDS PAGE电泳 ,分离纯化目的蛋白 ,免疫动物制备抗体。SDS PAGE电泳鉴定确证该抗体具有很高的纯度 ,抗体滴度可达 1∶10 0 0。改进后的透析袋电洗脱法较适合在大批量蛋白纯化之前进行少量蛋白的纯化 。
- 黄轶华超徐江英卢是玥许琳
- 关键词：蛋白质回收纯化
- 人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。
- 徐江英许琳戴荣华超卢是月彭光勇
- 关键词：硫氧还蛋白还原酶大肠杆菌克隆CDNA
- 叠氮钠损伤的神经元内硫氧还蛋白mRNA水平的变化被引量：11
- 2002年
- 氧化应激与许多神经退变病有关,而线粒体损伤是氧化应激加剧的重要原因。本文通过细胞活性检测(MTT法)、形态学观察,分析NaN_3对原代培养神经元的损伤作用,并通过RT-PCR半定量检测NaN_3损伤后神经元内疏氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)mRNA水平的改变,以阐明这一重要的氧还调节蛋白在神经元损伤过程中的作用。实验表明NaN_3以浓度和时间依赖方式损伤神经元,降低Trx表达水平。提示:神经元内呼吸链受损引起Trx表达减少,从而减弱神经元内氧还调节功能,最终引起神经元损伤、死亡。
- 秦艳张婷婷赵蕾吴海卫许琳徐江英卢是月
- 关键词：叠氮钠硫氧还蛋白氧化应激
- 猪脑硫氧还蛋白还原酶基因片断的序列分析被引量：3
- 2000年
- 目的 :在猪脑细胞中分离并克隆硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因片段 ,以人脑TR基因片段为参照比较分析 ,探讨选择猪作为研究TR基因功能实验动物模型的可能性。方法 :(1)进行逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR) ,获得TR基因cDNA ;(2 )插入pGEM T载体 ,转化至大肠杆菌 ;(3)筛选并鉴定阳性克隆 ,纯化重组子并测序 ;(4 )将测序结果与人脑TR基因序列比较。结果 :(1)获得了一个 6 0 6bp大小的猪脑细胞TR基因片段 ,含有 196个氨基酸。(2 )猪脑TR基因片段序列与基因库中的人脑TR基因序列有 88%同源性 ;(3)猪脑TR氨基酸序列中有 18个氨基酸与人脑TR不同 ,同源性为 90 %。结论 :猪与人TR基因的同源性较大 ,选择猪作为研究TR功能的实验动物有一定的可能性。
- 徐江英许琳秦艳高静李建成
- 关键词：硫氧还蛋白还原酶克隆基因猪脑
- EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒的制备及表达被引量：3
- 2002年
- 目的 :构建EB病毒潜伏期膜蛋白 2A重组腺病毒 ,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗。方法 :利用RT PCR扩增出EB病毒B95 8株潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因 ,并克隆至pGEM T载体中。并将LMP2AcDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX1CW ,选择正确的克隆pAX1CW LMP2A与Ad5DNA 末端肽复合体共转染 2 93细胞 ,通过同源重组获得复制缺陷型的重组腺病毒。提取重组腺病毒转染的 2 93细胞DNA ,通过酶切初步鉴定。选择阳性克隆感染CV1细胞 ,通过流式细胞仪和激光共聚集显微镜分析LMP2A蛋白表达情况。结果 :挑选同源重组 17个克隆中有 9个为阳性克隆 ,扩增到的病毒滴度为 2 3× 10 8pfu/ml。用MOI =10 0的重组腺病毒感染CV1细胞 ,48h后在激光共聚焦显微镜下可见LMP2A蛋白表达于CV1细胞膜上 ,经流式细胞仪检测LMP2A蛋白表达阳性细胞数为 94 4 %。结论 :重组腺病毒能有效地介导LMP2A基因的表达 ,为进一步研究该基因功能及其工程疫苗打下了基础。
- 彭光勇姚堃许琳徐江英谢芳艺
- 关键词：EB病毒腺病毒载体基因转移潜伏期RT-PCR法
- H_2O_2诱导的线粒体损伤神经元内硫氧还蛋白mRNA水平的变化被引量：8
- 2004年
- 线粒体缺陷和氧化应激参与了神经退行性疾病的发病机制。叠氮钠(NaN_3)是线粒体细胞色素C氧化酶(COX)的特异性抑制剂,能诱导线粒体缺陷。本实验通过细胞活性检测(MTT法),形态学观察,分析H_2O_2对原代培养的正常神经元及NaN_3诱导的线粒体缺陷神经元的损伤作用的差异。并通过RT-PCR半定量法检测H_2O_2损伤后两类神经元内硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)mRNA水平的变化,以阐明细胞内这一重要氧化还原调节蛋白在神经元损伤时的作用机制。实验表明,在正常神经元内,H_2O_2的损伤对Trx表达量的改变似乎不明显;而线粒体缺陷神经元内Trx的表达量下降,且对于H_2O_2的损伤具有浓度、时间依赖性。提示:在线粒体功能缺陷神经元中,Trx似乎发挥更重要的作用。
- 邹明高静张婷婷许琳徐江英卢是月
- 关键词：叠氮钠硫氧还蛋白半定量RT-PCR线粒体缺陷神经元
