张耀新
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗HEVORF2单链可变区抗体的筛选和鉴定
- 2000年
- 目的 :筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒 (HEV)开放读码框架 2 (ORF2 )的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法 :以大肠杆菌表达的重组 HEV ORF2多肽做为固相包被抗原 ,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过 4轮“吸附 -洗脱 -扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (EL ISA )、DNA序列分析鉴定 ,获得抗原结合活性较强的抗 -HEV ORF2单链可变区抗体 ,并以间接酶标法用该抗体对戊型肝炎患者石蜡包埋肝组织中的 HEV ORF2抗原进行免疫组织化学鉴定。结果 :筛选到的抗 - HEV ORF2的单链可变区抗体基因。酶切和序列分析表明 ,该抗体基因由 795 bp组成 :EL ISA和免疫组织化学结果显示 ,抗 - HEV ORF2人源化噬菌体单链可变区抗体能与重组 HEVORF2抗原特异性结合 ,并能够特异性识别戊型肝炎患者肝组织中的 HEV抗原。结论 :此法筛选的噬菌体单链可变区抗体亲和性较好 ,特异性强 ,较单克隆抗体制备方法简便 ,周期短 ,为进一步研究应用奠定了基础。
- 倪勤成军钟彦伟王松山施双双董菁夏小兵张耀新翟琦
- 关键词：戊型肝炎病毒单链可变区抗体噬菌体
- 大鼠肝再生相关基因LRRP1的克隆化被引量：11
- 2002年
- 目的:利用抑制性消减杂交技术构建大鼠肝脏部分切除术后差异表达基因的cDNA文库,并通过同源引物反转录PCR的方法克隆大鼠肝再生相关基因LRRP1的全长序列.方法:分别提取肝脏部分切除术后24h以及对照大鼠肝脏mRNA,以之为模板合成cDNA,称为测试和驱动.酶切消化后将测试分成两组,分别与不同的接头连接,分别与驱动进行杂交,然后混合两份杂交液,加入过量的驱动不经变性进行第二次杂交即消减杂交.之后进行两次PCR扩增,将产物克隆入质粒载体,构建差显文库,测序后以生物信息学技术进行序列同源性比较.通过同源引物反转录PCR的方法克隆基因全序列,并用软件分析其蛋白结构.结果:成功构建大鼠肝脏部分切除术后的cDNA差显文库,消减效果良好.将所得的部分基因进行测序分析,选择一个未知序列,通过同源引物反转录PCR的方法克隆到大鼠肝再生相关基因LRRP1的全长序列,并初步分析了其蛋白结构.结论:确定了大鼠肝再生相关蛋白LRRP1的基因序列,并证明其在大鼠肝再生过程中高度表达.
- 王刚刘妍牟劲松洪源邵得志张耀新李莉成军
- 关键词：肝再生肝切除术PCR技术
