张强
- 作品数：87 被引量：339H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省科技重大专项计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生天文地球更多>>
- 绵羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测方法的建立
- 2016年
- 为建立快速检测绵羊痘病毒(SPPV)快速检测方法基因的方法,本研究参照SPPV ORF068基因设计并合成一对特异性引物和一条MGB探针,经条件优化,建立了SPPV TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测SPPV,而对羊口疮病毒和猪水疱病病毒等扩增结果均为阴性;而且检出下限为10拷贝/μL;组内组间重复性试验的变异系数均小于3%。上述结果显示本研究建立的TaqMan-MGB qPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,能够对SPPV进行快速准确的检测。
- 李杨于少雄颜新敏吴国华李健叶奕优赵志荀朱海霞张志东张强
- 关键词：绵羊痘病毒荧光定量PCRTAQMAN-MGB探针
- 山羊痘病毒L1蛋白的原核表达及其功能分析被引量：2
- 2014年
- 为了探究山羊痘病毒L1蛋白在病毒感染Vero细胞过程中的作用,将山羊痘病毒L1蛋白基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物。表达的目的蛋白经镍亲和柱纯化后免疫家兔制备了抗血清,通过蛋白封闭试验和血清抑制试验研究了纯化蛋白及其抗血清对山羊痘病毒感染的抑制作用。结果显示,成功表达了山羊痘病毒的L1蛋白,表达产物为48ku左右的重组蛋白,它能被山羊抗山羊痘病毒阳性血清识别。加入L1蛋白封闭,可使山羊痘病毒感染细胞的病变时间推迟12h,病毒与L1蛋白抗血清作用后效价下降了87.8%。结果表明,L1蛋白可能是山羊痘病毒的受体结合蛋白,并能在病毒侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用。
- 高顺平吴国华颜新敏赵志荀于少雄朱海霞李健张强
- 关键词：山羊痘病毒L1蛋白原核表达受体结合蛋白
- 绵羊CD58基因的克隆与原核表达被引量：3
- 2010年
- 通过对猪、绵羊CD58mRNA序列比对,设计出绵羊CD58的特异性引物,应用反转录PCR技术从绵羊淋巴细胞mRNA中扩增出绵羊CD58基因,将该基因克隆到原核表达载体pGEX4-1中进行原核表达.结果表明:克隆出的绵羊CD58cDNA长807bp,其中包含了开放式阅读框;该基因在大肠杆菌中进行表达,SDS-PAGE电泳在53ku处能观察到特异表达的融合蛋白,产物通过Western-blot检测证实,可以被CD58单克隆抗体识别.
- 芦晓立颜新敏吴国华叶奕优李健朱海霞王建科赵志荀崔力凡朱彩珠张强
- 关键词：绵羊基因克隆原核表达
- GeXP多重基因表达分析系统及其应用被引量：2
- 2013年
- 介绍了GeXP多重基因表达分析系统图的基本原理,重点阐述了该系统在多重基因表达分析和病毒检测方面的应用,并对该系统在病毒检测方面的应用前景进行了展望。
- 卢昌吴国华颜新敏赵志荀李应国聂福平张强
- 关键词：RT-PCR基因表达分析病毒检测
- 绵羊痘病毒E3L基因在Vero细胞中的表达
- 2014年
- 为了构建组成型表达绵羊痘病毒E3蛋白的真核表达载体,并检测E3蛋白在Vero细胞中瞬时表达的情况,将绵羊痘病毒E3L基因亚克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-E3L,经酶切和测序鉴定正确后转染至Vero细胞,利用Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)对E3蛋白的表达水平进行鉴定。结果显示,转染后第48小时可检测到E3L基因高水平的表达。这一研究结果为进一步研究绵羊痘病毒E3蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 于少雄颜新敏赵志荀吴国华叶奕优卢昌王曼吴娜朱海霞李健张强
- 关键词：绵羊痘病毒VERO细胞真核表达
- 小尾寒羊β2微球蛋白的表达及其二级结构预测分析
- 2020年
- 为研究小尾寒羊绵羊白细胞抗原Ⅰ(Ovis aries leukocyte antigen classⅠ,OLAⅠ)轻链四聚体前体链β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)的结构和功能,根据GenBank中公布的绵羊β2m基因设计特异性引物,提取小尾寒羊全血中的RNA并运用RT-PCR方法扩增绵羊β2m基因,将扩增的绵羊β2m基因克隆到pMD18-T载体,筛选出阳性克隆菌pMD18T-OLAⅠ-β2m,经双酶切后与表达载体pET-28a(+)连接,再转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中构建pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m重组表达菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况;运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β2m蛋白的二级结构。PCR扩增结果显示,目的基因大小为357 bp,与理论值相符,扩增片段成功克隆到pMD18-T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切筛选及测序,成功获得阳性克隆菌株pMD18-T-OLAⅠ-β2m,插入的目的片段大小为357 bp。阳性克隆菌株与表达载体pET-28a(+)经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后获得pET-28a(+)-OLAⅠ-β2m重组表达菌,经IPTG诱导表达,Western blotting检测目的蛋白大小为17.3 ku,目的蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达,经洗涤、变性、纯化、初步获得SDS-PAGE纯化的OLAⅠ-β2m蛋白;PORTER在线软件预测OLAⅠ-β2m蛋白的二级结构元件α-螺旋(Hh)、β-折叠(Ee)和无规则卷曲(Cc)分别占22.03%、22.03%和55.93%。本研究成功构建了小尾寒羊β2m基因的pET-28a(+)重组表达体系,运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β2m的二级结构,为下一步绵羊OLAⅠ类分子四聚体的构建奠定基础。
- 王战红赵志荀吴国华朱学亮黄彩云祁斌亮赵芳燕张志东张强
- 关键词：Β2微球蛋白小尾寒羊主要组织相容性复合体包涵体
- 一组绵羊OLA Ⅰ蛋白与绵羊痘病毒多肽的复性组装被引量：3
- 2022年
- 本研究旨在体外组装小尾寒羊OLA Ⅰ蛋白与绵羊痘病毒多肽复合物,筛选绵羊痘病毒CTL表位肽。首先克隆小尾寒羊OLA Ⅰ重链基因胞外区OLA Ⅰα-BSP和轻链基因OLA Ⅰ-β2m,将获得的轻、重链基因分别插入原核表达载体pET-28a(+)并转化至BL21(DE3)细胞进行诱导表达,收集菌体超声破碎,过镍柱纯化获得一定纯度的OLA Ⅰ重链和轻链β2m包涵体蛋白,稀释复性法将获得的轻、重链包涵体蛋白与绵羊痘病毒多肽PV4按摩尔比为1︰1︰1的比例进行共复性,分子筛层析验证复性情况,ELISPOT试验评价OLA Ⅰ分子限制性多肽引起的T细胞免疫应答。结果表明,克隆获得的重、轻链基因正确表达,大小分别为36.3 kDa和16.7 kDa,分子筛和SDS-PAGE结果表明,绵羊痘病毒多肽PV4与OLA Ⅰ分子稳定结合,ELISPOT试验确定该多肽可刺激引起T细胞免疫应答。本研究建立了小尾寒羊OLA Ⅰ分子轻、重链的原核表达体系,实现该轻、重链与绵羊痘病毒多肽PV4的复性,确定了1个绵羊痘病毒CTL表位肽,为下一步解析该复合物的结构及对羊痘CTL表位筛选提供思路。
- 王战红赵志荀吴国华邓阳朱国强赵芳燕卢曾军张强
- 关键词：绵羊痘病毒分子筛CTL表位
- 山羊痘病毒结构蛋白P32基因的表达被引量：1
- 2007年
- 将山羊痘病毒结构蛋白P32基因从重组质粒pMD-P32中亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,用构建的重组表达质粒pGEX-P32转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG诱导表达,细菌裂解物经SDS-PAGE检测到分子量约为58 ku的目的蛋白,与预期的产物大小一致.Western-blotting表明该重组蛋白可被山羊痘阳性血清所识别.
- 张强马维民吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠吴润刘湘涛才学鹏
- 关键词：羊痘病毒P32基因原核表达
- 一例绵羊痘的PCR诊断被引量：1
- 2008年
- 采取临床疑似患绵羊痘病绵羊的皮肤、肺脏等组织病料,提取DNA,用建立的多重PCR方法进行检测,两对引物均从病料中扩增出了与预期片段大小一致的两条带。PCR检测快速,便捷,可在基层兽医实验室推广应用。
- 董建斌董建华颜新敏吴国华李健朱海霞朱彩珠张强
- 关键词：绵羊痘PCR
- 绵羊痘病毒固原株的分离与鉴定被引量：3
- 2015年
- 取发病绵羊的皮肤痘疹研磨制成病料样品悬液,将该悬液感染未免疫的健康绵羊,同时接种原代绵羊羔羊睾丸(LT)细胞,盲传5代后,转接Vero细胞,进行间接免疫荧光试验和PCR鉴定。样品悬液感染未免疫的健康绵羊后出现绵羊痘的典型发病症状,经过LT细胞传代后转接Vero细胞,出现了特征性细胞病变;间接免疫荧光试验和PCR均检测出病毒存在。PCR产物的核酸序列测定结果显示,分离毒株的RPO30基因与已发表的绵羊痘病毒毒株的相应基因的同源性在99%以上。上述结果表明,本研究从宁夏固原市疑似绵羊痘病毒感染的绵羊体内成功分离到1株绵羊痘病毒,并将其命名为绵羊痘病毒固原株。
- 王曼叶奕优赵志荀吴国华颜新敏朱学亮李应国朱海霞李健张强
- 关键词：绵羊痘病毒间接免疫荧光试验PCR
