张杰
- 作品数：109 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 一种A型口蹄疫病毒抗体的可视化快速检测试剂盒及其应用
- 本发明提供了一种A型口蹄疫病毒抗体的可视化快速检测试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明提供的试剂盒包括包被酶标板、洗涤液、样品稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、标准阳性血清和标准阴性血清，所述包被酶标板以A型口蹄疫病...
- 陈豪泰张永光孙跃峰祁林林张杰潘丽
- 文献传递
- 绵羊腺病毒287作为基因传递载体的应用前景
- 2011年
- 绵羊腺病毒287(OAdV287)具有独特的基因组结构,全长29 576bp。基因组最大的特点是有很高的A/T含量(66.4%)和缺少典型的E1区,以及含有一段较长的冗余片段。已识别出其基因组中有3个外源基因插入区,理论上最多可容纳6.3kb的外源DNA。OAdV287的纤维和五邻体结构结构独特,衣壳蛋白上缺少可识别的整合蛋白结合域。OAdV287能感染一系列人和动物的细胞系,但是不能在非绵羊源细胞内成功复制。OAdV287载体可以避免人腺病毒的免疫干扰,具有很高的转染效率。目前,OAdV287已成为研究最热的动物源腺病毒载体之一。
- 谷元兴王猛刘文倩张杰刘永生
- 关键词：基因组结构基因载体
- 一种快速显色一步法检测美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征的RT-LAMP试剂盒
- 本发明提供一种快速显色一步法检测美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征的RT‑LAMP试剂盒，该试剂盒包含有6条RT‑LAMP引物。本发明的试剂盒在不延长原有1小时反应时间的条件下，实现了将荧光染料直接加入反应管的一步操作，不...
- 张杰刘永生丁耀忠马炳陈豪泰贾怀杰邵军军潘丽常惠芸张永光
- 文献传递
- 猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立
- 2024年
- 【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET30a-PCV3-Cap。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,获得具有良好抗原性的重组Cap蛋白。基于纯化的重组Cap蛋白建立间接ELISA方法,确定最佳抗原包被浓度、待检血清最佳稀释比例、酶标抗体稀释比例和阴阳性临界值,对间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性、相关性和符合率进行分析,并对2018-2022年采自川东北地区猪场的351份临床猪血清进行检测,分析该区域PCV3流行情况。【结果】试验成功构建pET30a-PCV3-Cap重组表达载体,实现重组Cap蛋白(1-197位氨基酸)的原核截短表达,蛋白大小约为26 ku,可与PCV3阳性猪血清发生特异性反应;确定最佳抗原包被浓度为1 ng/μL,待检血清最佳稀释比例为1∶100,酶标抗体稀释比例为1∶60000,阴阳性临界值D_(450 nm)为0.684;建立的间接ELISA方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪细小病毒1型(PPV1)阳性猪血清均不发生交叉反应,敏感度达1∶1600,批内变异系数和批间变异系数均<10%,与病毒中和试验(VNT)结果呈正相关,与Western blotting方法的阳性符合率为95.8%;2018-2022年川东北地区的351份猪血清样品阳性率为7.12%。【结论】本研究成功截短表达了PCV3四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PCV3间接ELISA方法,为PCV3的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。
- 欧云文潘琴汪洋代军飞任绍科张洋翟佳佳张杰
- 关键词：CAP蛋白截短表达ELISA
- 一种C型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法
- 本发明公开一种C型口蹄疫亚单位基因工程疫苗及其制备方法。本发明的C型口蹄疫亚单位疫苗的主要组成为由C型口蹄疫的结构蛋白VP1和VP3按蛋白含量1∶1构成的混合物，其中的C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP1和VP3为C型口蹄疫病...
- 刘永生张杰丁耀忠陈豪泰马丽娜周建华
- A、O和C型口蹄疫病毒的试剂盒及使用方法
- 本发明公开一种检测牛和猪以及相关牛和猪的产品是否感染A、O或C型口蹄疫病毒的试剂盒，以及这种试剂盒的使用方法。本发明的试剂盒中至少有三对用于扩增A型口蹄疫目的基因的引物、扩增C型口蹄疫目的基因的引物和用于扩增O型口蹄疫目...
- 刘永生张杰丁耀忠陈豪泰马丽娜周建华
- 文献传递
- 一种南非2型口蹄疫病毒VP3基因的原核可溶性表达方法
- 本发明公开了一种南非2型口蹄疫病毒VP3基因的原核可溶性表达方法，根据南非2型口蹄疫病毒基因序列，在FMDV SAT2的VP3蛋白编码基因上游直接偶联SUMO促溶表达标签编码基因，然后在SUMO的上游引入6个His标签编...
- 马维民何继军李国秀丁耀忠张杰李茜汪洋李苗苗马炳代军飞刘永生张维兵李小云
- 文献传递
- 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，试剂盒中包括用于扩增美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因的两对引物，并提供了检测试剂盒的使用方法。本发明的有益效果为：本发...
- 刘永生丁耀忠张杰周建华陈豪泰马丽娜
- 文献传递
- 抗牛成熟叠朊蛋白的单克隆抗体mab－bomDpl－9及其应用
- 本发明公开采用基因工程制备抗牛成熟叠朊蛋白(mature Dpl，mDpl)的单抗mab－bomDpl－9，以及这种单抗的制备方法和用途。其中Mab－bomDpl－9的制备方法是：以纯化的大肠杆菌表达的重组型中国黄牛mD...
- 刘永生张杰陈豪泰马丽娜
- 文献传递
- 非洲猪瘟病毒多基因家族MGF360-13L基因功能的初步研究被引量：3
- 2022年
- 旨在初步探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)多基因家族MGF360-13L基因的功能。使用生物信息学软件对MGF360-13L基因进行分析;构建真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L并转染至293T细胞进行表达;利用同源重组方法构建基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,以相同的感染复数(MOI=0.01)在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中感染基因缺失毒株和亲本毒株(ASFV CN/GS/2018)后,利用红细胞吸附试验(HAD)计算病毒滴度并绘制体外生长曲线;以MOI=1将ASFV-ΔMGF360-13L和ASFV CN/GS/2018分别感染猪骨髓巨噬细胞(BMDM),利用qPCR和ELISA测定细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果表明,MGF360-13L基因在ASFV基因Ⅱ型中相对保守,编码蛋白属于非分泌型、无跨膜区、亲水性好;构建的真核表达质粒pVAX1-MGF360-13L被293T细胞表达;成功获得MGF360-13L单基因缺失毒株ASFV-ΔMGF360-13L,与ASFV CN/GS/2018相比,其体外复制没有显著性差异;在ASFV-ΔMGF360-13L感染BMDM后,IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子在转录和分泌水平都显著高于ASFV CN/GS/2018。本研究成功制备了ASFV的MGF360-13L基因缺失毒株,并证实了MGF360-13L基因作为ASFV复制非必需基因具有抑制炎性因子表达的功能,这为进一步注释ASFV MGF360-13L基因功能提供了线索。
- 陈达年马旭升代军飞汪洋李茜白衡毛甜甜刘永生丁龙陈昊翰陈思言饶宇飞贾宁张杰郑海学郑海学
- 关键词：ASFV炎性因子
