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应用Bac-to-Bac系统高效表达人类错配修复基因hMLH1及其错义突变体: 2017年; 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中实现人类错配修复基因h MLH1及其错义突变体的高效表达。方法分别用Bam HI和Not I双酶切构建于pc DNA载体中的全长野生型h MLH1基因及T117M和V384D错义突变型DNA片段,回收后定向克隆至p Fast Bac1转座载体中,经酶切鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,提取重组Bacmid,反复感染Sf9昆虫细胞,用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定目的蛋白的表达。结果提取转染72h后的Sf9细胞总蛋白,用7%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见分子量为85k Da清晰的蛋白条带,经Western blot方法证实该条带为h MLH1基因的表达产物。结论利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中大量表达出h MLH1野生型和T117M及V384D错义突变体蛋白,为进一步开展体外错配修复实验奠定了良好的基础。; 郭嘉义张燕满耕孝朱明星黄卫东; 关键词：HMLH1基因

醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞生长及人类错配修复基因1甲基化水平的影响: 2014年; 目的研究醋酸棉酚（GAA）对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响和对人类错配修复基因1（hMLHl）甲基化水平的影响，初步探讨其抗肿瘤机理。方法应用MTT法检测GAA对Tca8113细胞生长的影响；应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nMSP）检测Tca8113细胞在GAA作用48、72h后hMLHl基因甲基化状态的改变情况。结果MTT检测显示，作用24～72h，GAA对Tca8113细胞生长具有抑制作用；nMSP检测显示，以终浓度30、15μmol·L-1的GAA作用于Tca8113细胞48、72h后，hMLH1基因甲基化条带的平均光度值降低，与未经药物处理组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GAA能抑制舌鳞癌细胞的生长，并能降低hMLH1基因的甲基化水平。GAA去甲基化作用可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一。; 付帅吴勇彭庆芳陈文飞; 关键词：TCA8113细胞棉酚甲基化

化疗对肺癌人类错配修复基因hMLH1和hMSH2表达的影响: 2011年; 引言DNA错配修复系统是生物在进化过程中形成的一套纠正体内DNA损伤的体系,可以及时有效地纠正因各种体内外因素导致的基因错配。研究发现DNA错配修复基因中的hM-LH1和hMSH2介入了一些肿瘤的发生与发展[1]。; 聂慧玲李英赵心宇綦霞; 关键词：肺癌化疗 HMLH1 HMSH2

人类错配修复基因hMLH1和hMSH2错义突变真核表达载体的构建及表达被引量：2: 2010年; 目的构建人类错配修复基因hMLH1和hMSH2错义突变真核表达载体并检测它们在瞬时转染细胞中的蛋白表达。方法重组pcDNA3.1-hMLH1-wt和pcDNA3.1-hMSH2-wt质粒为模板,用定点诱变的方法分别构建hMLH1基因和hMSH2基因错义突变真核表达载体,将诱变前后的重组质粒瞬时转染至HCT-116细胞(hMLH1基因缺陷型)或LoVo细胞(hMSH2基因缺陷型)中,免疫印迹法和免疫荧光法分别检测这两种基因在各自的转染细胞中的蛋白表达。结果测序证实,定点突变成功,构建出hMLH1基因错义突变pcDNA3.1-hMLH1-T117M和pcDNA3.1-hMLH1-V384D真核表达载体以及hMSH2基因错义突变pcDNA3.1-hMSH2-L390F、pcDNA3.1-hMSH2-Q419K和pcDNA3.1-hMSH2-Q629R真核表达载体。结果表明转染后,除hMLH1-T117M突变体蛋白表达缺失外,其余的野生型及突变型真核表达载体在转染细胞中均能表达相应的蛋白。结论成功构建了在人的肿瘤细胞系中能有效表达的两种hMLH1基因错义突变和三种hMSH2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究这些错义突变的病因学作用和功能意义奠定了实验基础。; 黄卫东郭嘉义; 关键词：HMLH1 定点突变真核表达载体转染蛋白表达

人类错配修复基因hMSH2及p27在结直肠癌及癌旁组织中的表达及意义被引量：1: 2009年; 目的探讨人类错配修复基因hMSH2和p27在结直肠癌及癌旁组织中的表达及其意义。方法以免疫组化方法检测54例结直肠癌组织中hMSH2和p27蛋白的表达。结果结直肠癌组织中hMSH2蛋白的阳性表达率为70.4%,显著高于癌旁组织的38.9%(P<0.05);p27蛋白的阳性表达率为40.7%,显著低于癌旁组织的75.9%(P<0.01)。结直肠癌癌组织中hMSH2蛋白的表达与肿瘤临床病理特征无相关性;p27蛋白的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期相关。hMSH2和p27蛋白在结直肠癌组织中的表达呈负相关。结论hMSH2表达异常和抑癌基因p27表达下调可能与结直肠癌的发生有关。; 李佽陈志英刘莉刘都礼; 关键词：结直肠肿瘤 HMSH2 周期素依赖激酶抑制剂P27

人类错配修复基因hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义被引量：1: 2007年; 目的探讨人类错配修复基因hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组织化学SP法对56例肺癌组织中hMSH2及p53的表达进行检测。结果56例肺癌组织中hMSH2阳性表达率为28.6%,分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者(P<0.01),有淋巴结转移者hMSH2阳性率低于无淋巴结转移者(P<0.05),不同病理组织学类型之间hMSH2表达差异无统计学意义(P>0.05);56例肺癌组织中,p53阳性率为51.8%,分化程度低者p53阳性率高于分化程度高者(P<0.05),有淋巴结转移者p53阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.01),不同病理组织学类型之间p53阳性率差异无统计学意义(P>0.05);hMSH2阴性表达者的p53阳性率高于hMSH2阳性表达者(P<0.05)。结论hMSH2基因的缺陷及p53的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关。; 庹新兰白明陈琼霞; 关键词：肺癌错配修复基因 HMSH2 P53

人类错配修复基因突变在肿瘤发生中的作用研究新进展被引量：1: 2001年; 近年来 ,相继有 6种人类错配修复基因被分离克隆并定位 ,进一步的研究表明人类错配修复基因的变异在肿瘤发生中有重要的作用 ,尤其是在 HNPCC肿瘤发生中 ,起到了主要作用。而这些基因的变异不仅仅是原先所知的结构突变 ,如点突变、移码突变、错义突变等 ,还包括了启动子过甲基化造成的基因不表达。; 刘晓蓉; 关键词：人类错配修复基因过甲基化肿瘤发生基因突变

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