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碱性蛋白酶水解对藜麦分离蛋白结构、聚集行为及凝胶性的影响
2025年
【目的】研究碱性蛋白酶对藜麦分离蛋白结构、理化性质及聚集行为的影响,并探究碱性蛋白酶水解对藜麦分离蛋白凝胶性的作用。【方法】通过碱提酸沉法于4℃下提取藜麦分离蛋白,使用碱性蛋白酶在不同酶底比条件下对藜麦分离蛋白进行处理。分析藜麦分离蛋白的组成、粒径、Zeta电位、溶解度、表面疏水性(S0-ANS)的变化及其与蛋白热聚集体的ThT荧光强度、形貌的关联性。进一步提高蛋白浓度,将藜麦分离蛋白加热制成凝胶,通过对凝胶的微观结构、质构及凝胶中蛋白质二级结构的分析,探讨酶水解处理与聚集行为和凝胶性之间的关系,揭示酶水解促进凝胶性改变的原因。【结果】随着酶底比(E/S)的上升,藜麦分离蛋白溶液(2%,w/v)的蛋白粒径逐渐减小,其电负性呈现先上升后下降的趋势,藜麦分离蛋白的表面疏水性逐渐上升。同时,藜麦分离蛋白聚集体的Th T荧光强度在酶底比为0—0.08%时呈现上升趋势,而当酶底比继续升高(0.08%—0.14%)则下降。通过透射电子显微镜(TEM)观察,在酶底比为0.05%和0.08%时分别形成了较短的纤维(145—306 nm)和较长的纤维(217—406 nm),继续增大酶底比则纤维的长度缩短并且无定型聚集增加。另外,藜麦分离蛋白的不同聚集行为对其凝胶性有显著影响(P<0.05)。在有纤维聚集体形成的条件下,藜麦分离蛋白凝胶具有更高的硬度、储能模量以及更致密的凝胶网络结构。与短纤维相比,长纤维的形成对凝胶硬度、储能模量及凝胶网络的增强效果更加明显。此外,碱性蛋白酶水解显著影响藜麦蛋白凝胶中蛋白质的二级结构,β-折叠和无规则卷曲含量随酶底比的增加呈现出先上升后下降的趋势。【结论】限制性碱性蛋白酶水解有助于藜麦分离蛋白形成有序的纤维聚集体,进而改善其凝胶性。当E/S为0.08%时,藜麦分离蛋白热诱导形成的纤维最长,蛋白
冯潇魏建锋付丽霄武朝升杨玉玲汤晓智
关键词:蛋白质二级结构
脉冲电场辅助碱性蛋白酶处理对卵白蛋白致敏性的影响
2024年
卵白蛋白(OVA)是引起鸡蛋过敏的一种主要过敏原。脉冲电场(pulsed-electric field,PEF)是一种对OVA诱导的过敏反应有改善作用的非热物理加工新技术。本研究基于BALB/c小鼠模型,通过体质量、体成分、过敏症状、组织病理学、抗体水平和炎症介质释放水平系统评价PEF辅助碱性蛋白酶(AL)处理对OVA诱导的过敏反应的影响。结果表明:PEF辅助AL处理通过改善OVA诱导的过敏反应使小鼠机体消瘦,瘦肉和自由水含量下降的问题,显著抑制了OVA的致敏性。临床症状的结果表明:PEF辅助AL处理改善因过敏反应引起的脏器肥大和血管渗透性增大的问题,同时显著改善因过敏反应导致的体温下降的问题。组织病理学的结果表明:PEF辅助AL处理显著改善了脾脏和肺部炎症浸润的问题,使其形貌更趋近于对照组。血清学结果表明,与OVA组相比,HOVA-PP'组与特异性IgE和IgG1的结合水平分别降低68.87%和31.20%,说明PEF辅助AL处理显著降低过敏原与特异性抗体的结合水平。此外,PEF辅助AL处理显著降低组胺和肥大细胞蛋白酶-1(mouse mast cell protease-1,mMCP-1)的浓度至51.97 ng/mL和51.97 pg/mL,调控IL-4和IFN-γ的释放水平,促进Th1和Th2-型细胞之间的平衡,进而改善OVA诱导的过敏反应。
李银丽丁婕董柳孙娜林松毅
关键词:卵白蛋白脉冲电场碱性蛋白酶动物模型过敏反应
碱性及复合蛋白酶复配水解对脱脂牛乳致敏性的影响
2024年
牛乳中致敏蛋白在一定程度上限制了其在婴幼儿配方奶粉中的使用。以脱脂牛乳为原料,以水解度、脱脂牛乳IgG抑制率、过敏患者血清IgE抑制率为指标,研究碱性、复合蛋白酶复配处理对其致敏性的影响。结果表明,复配酶的酶活与底物比(E/S)为6000 U/g,碱性蛋白酶与复合蛋白酶质量比为3∶1,酶解时间60 min时,脱脂牛乳的水解度为9.21%,对脱脂牛乳IgG及过敏患者血清IgE抗体抑制率分别为86.94%与43.46%,显著高于单一蛋白酶(P<0.05)的处理效果。研究结果为以脱脂牛乳为婴幼儿奶粉基料的开发提供了重要参考。
钱冠林孙敬杨慧梁肖娜岳喜庆郑艳
关键词:致敏性ELISA
Investigating the functionality of enzymatically(transglutaminase and alcalase)treated almond protein isolate
2022年
The effects of partial hydrolysis on the functional properties of almond protein isolate(API)were investigated by treating the isolate with alcalase enzyme(2.4U/g)and a subsequent polymerization of API was studied using the enzyme,transglutaminase(121U/g).The result obtained showed that partial hydrolysis could induce structural changes in almond protein,mainly reflecting at the molecular weight,duration of hydrolysis,and the active site of the enzymes.On comparing the two enzymes’ability to react on API,enzyme alcalase resulted in producing hydrolysates with the highest protein solubility of 89.38%,surface hydrophobicity of 62.68,and foaming expansion of 31%at the 60th minute of hydrolysis and produced lower molecular weight peptides.Although alcalase API hydrolysates improved the protein’s functionality,the enzyme failed to increase the substrate’s emulsion and foaming stabilities.On the other hand,transglutaminase enzyme produced higher molecular weight peptides and excelled in enhancing the stability of emulsion and foam along with the elevation of%degree of hydrolysis.
Sharanya GaneshDian Widya NingtyasSangeeta Prakash
关键词:ALCALASETRANSGLUTAMINASE
碱性蛋白酶控制酶解诱导大豆分离蛋白纳米颗粒的形成机制被引量:6
2022年
以大豆分离蛋白(soy protein isolate,SPI)为原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解处理(0~24 h),探究SPI的结构变化规律,发现碱性蛋白酶控制酶解可诱导SPI自组装形成系列分布均匀(多相分散系数<0.3)、粒径可控(90~200 nm)且具有不同表面特性的大豆蛋白纳米颗粒(soy protein nanoparticles,SPNs),其中水解度(degree of hydrolysis,DH)及亚基解离/降解是影响SPNs形成的关键性因素。酶解初期(10~30 min,DH约3%),SPI中β-伴大豆球蛋白(7S)组分α与α’亚基的部分降解有利于两亲性结构的释放,提高蛋白表面疏水性,降低临界聚集浓度,形成包含相对完整的7S及大豆球蛋白(11S)亚基的I类纳米颗粒(SPNs-DH 3%)。随着酶解时间的延长(1~2 h),α与α’亚基的进一步降解促进了疏水性β亚基与B亚基的暴露,增强的疏水相互作用导致体系浊度增加,其中可溶性聚集体向不溶性疏水聚集的转化使得蛋白表面疏水性急剧下降,形成以A亚基及部分β亚基为主导的II类亲水型纳米颗粒(SPNs-DH 5%)。酶解后期(4~24 h),A亚基的进一步降解则产生更多亲水性多肽,不利于纳米颗粒的形成。进而探究SPNs的形成机制,圆二色光谱结构表明,SPNs的形成与蛋白α-螺旋和无规卷曲结构向β-折叠转化有关。两类SPNs的整体结构均由疏水相互作用维持,而氢键和二硫键分别参与颗粒表面与内部结构的形成。与SPNs-DH 3%相比,SPNs-DH 5%中形成了更多由二硫键与氢键稳定的折叠结构。此外,由于酶解过程中不断释放抗氧化肽段,其所形成SPNs的抗氧化性较原始SPI均有所提升。
钟敏常方圆赵谋明周非白
关键词:碱性蛋白酶大豆分离蛋白水解度自组装
Heat-denatured and alcalase-hydrolyzed protein films/coatings containing marjoram essential oil and thyme extract
2022年
In this study,heat-denatured and alcalase-hydrolyzed whey and soy protein films/coatings containing marjoram essential oil(MEO)and thyme extract(TE)were investigated comparatively in terms of physicochemical and functional properties.Heat-denaturated high protein solutions produced self-standing,smooth,transparent and viscoelastic films in the presence of glycerol.Enzymatic hydrolysis provided transparency,elasticity and extensibility to the films of low protein solutions.The addition of MEO and TE triggered hardness and brittleness especially in hydrolyzed high protein films and remarkably changed film color,thickness and viscosity possibly affecting surface adherence of films.Heat denatured films exhibited higher water vapor permeability(WVP)than alcalase-hydrolyzed ones.The lowest hardness was obtained in hydrolyzed low protein films with considerable adhesiveness.Hydrolyzed protein solutions coated to cheese provided better protection against moisture loss and MEO added films caused elevated hardening of cheese.MEO and TE incorporated in film matrices were seemed to suppress mycelial growth and sporulation of Aspergillus niger.This study presented valuable new findings on functional protein films produced by enzymatic hydrolysis as an alternative to heat treatment.
Ozgür TarhanRana Sen
关键词:WHEYSOY
基于Alcalase2.4FG碱性蛋白酶的玉米抗疲劳肽制备被引量:1
2021年
以玉米蛋白粉为原料,利用Alcalase2.4FG碱性蛋白酶进行水解,制备玉米抗疲劳肽,考察底物浓度、[E]/[S]、酶解温度、酶解时间和酶解pH对酶解所得玉米抗疲劳肽活性的影响,通过清除羟基自由基的能力对活性进行检测,确定利用Alcalase2.4FG碱性蛋白酶制备玉米抗疲劳肽最佳的酶解工艺条件。结果表明:当底物浓度2%、[E]/[S]为4%、温度为55℃,pH值为9.0,时间45 min,在此条件下得到的玉米抗疲劳肽清除羟基自由基的能力最高,达到83.6%。
童雅婷熊煜丽黄映梅郭晶晶杜国丰
关键词:羟基自由基酶解清除率
碱性蛋白酶降解鲢鱼肌原纤维蛋白的组学分析被引量:6
2021年
探究腐败菌引起水产品腐败变质的机理,揭示地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶降解白鲢鱼肌原纤维蛋白的途径及机制。采用双向凝胶电泳体系分别研究4℃和25℃条件下碱性蛋白酶对白鲢鱼肌原纤维蛋白的降解情况。结果表明:随着酶处理时间的增加,蛋白图谱中蛋白点的数量呈先增加后减少的趋势。通过PDQuest软件找出75个差异蛋白点,其中4℃组有45个,25℃组有30个。对割胶成功的24个蛋白点进行质谱鉴定,结果显示为肌动蛋白、肌球蛋白重链等。利用GO功能注释,对这24个蛋白质进行生物信息学分析,从细胞组成、分子功能和生物过程层面上推测碱性蛋白酶降解肌原纤维蛋白的途径为:首先破坏肌原纤维骨架结构,肌动球蛋白解体为肌动蛋白和肌球蛋白,随后肌球蛋白及肌动蛋白进一步被分解为其它产物,如肌球蛋白重链等。
刘瑞李睿智王嵬仪淑敏励建荣李学鹏徐永霞
关键词:双向电泳肌原纤维蛋白降解机制生物信息学
碱性蛋白酶限制性酶解对蓝圆鲹分离蛋白功能特性的影响被引量:6
2021年
以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶对其进行限制性酶解,研究水解度(degree of hydrolysis,DH)对分离蛋白酶解产物溶解性、持油力、乳化性与起泡性等功能特性的影响。结果表明,碱性蛋白酶酶解产物的相对分子质量显著下降。酶解可有效提高分离蛋白的溶解性,其溶解度随DH增加而增加。与对照组相比,分离蛋白经酶解后,产物乳化性与起泡性均显著提高,并呈现先升高后降低的趋势。不同DH酶解产物在pH值为4.0时的乳化性和起泡性最低;当pH值为10.0时,DH5(DH=5%)的乳化性最高((100.9±0.7)m2/g);当pH值为7.0时,DH5起泡性最高((227.3±3.8)%)。除DH20外,其他组的持油力均有显著提高,其中DH5的持油力最高,达3.50 g/g(油/蛋白)。结果表明,一定程度的水解可以显著提高蓝圆鲹分离蛋白的功能特性。本研究为鱼蛋白在食品蛋白配料中的应用提供了一定理论参考。
孙乐常刘伟峰林怡晨赵阿云张凌晶翁凌曹敏杰
关键词:蓝圆鲹分离蛋白功能特性
基于Alcalase酶解技术调控豌豆蛋白抗氧化肽的致敏位点研究
豌豆蛋白是一种新型的优质植物蛋白质资源,作为我国豌豆利用中淀粉加工的副产物,正亟需提高其附加价值。同时,由蛋白质所引发的食物过敏反应正严重地影响着部分过敏消费者的身体健康,亦已成为备受关注的食品安全问题。本文以豌豆蛋白粉...
丁婕
关键词:食物过敏抗氧化活性变应原性

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李里特
作品数:699被引量:5,413H指数:35
供职机构:中国农业大学
研究主题:电生功能水 低聚木糖 木聚糖酶 高压静电场 农产品加工
王璋
作品数:405被引量:5,916H指数:39
供职机构:江南大学食品学院
研究主题:水酶法 纯化 分离纯化 亚麻籽胶 酪蛋白磷酸肽
许时婴
作品数:496被引量:6,998H指数:40
供职机构:江南大学食品学院
研究主题:微胶囊化 亚麻籽胶 微胶囊 纯化 稳定性
郭兴凤
作品数:212被引量:1,513H指数:19
供职机构:河南工业大学粮油食品学院
研究主题:大豆分离蛋白 大豆蛋白 玉米醇溶蛋白膜 酶水解 蛋白质
吴晖
作品数:427被引量:2,223H指数:23
供职机构:华南理工大学
研究主题:蛋白 多肽 抗氧化活性 抗氧化 发酵