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搜索到189篇“ DNA转染“的相关文章

微毫秒脉冲电场致细胞DNA转染的仿真研究被引量：1: 2021年; 为研究微毫秒脉冲电场对细胞摄取DNA的影响规律,基于孔密度、孔径及DNA迁移方程,建立脉冲电场作用下球形细胞DNA转染的数学模型,仿真计算典型脉冲参数作用下胞内DNA浓度的变化特性。仿真结果表明:在单个脉宽100μs、电场强度1kV/cm的脉冲作用下,胞内DNA浓度由0增至7.8×10^(−8)mol/m^(3);而在单个脉宽1ms、电场强度0.5kV/cm的脉冲作用下,胞内DNA浓度增至1.1×10^(−8)mol/m^(3)。同时研究上述两种脉冲组成的双脉冲作用下,其时间间隔(0~1s)以及施加顺序对细胞摄取DNA的影响,结果显示,先施加100μs后再施加1ms脉冲时,不同时间间隔下胞内DNA浓度均为3.45×10^(−7)mol/m^(3);而当改变脉冲施加顺序且脉冲时间间隔小于10ms时DNA浓度为8.9×10^(−8)mol/m^(3),当间隔增至1s时,DNA浓度增至1.68×10^(−7)mol/m^(3)。此外,仿真结果显示,特定条件下DNA摄取浓度与脉冲幅值正相关。仿真结果为脉冲致细胞DNA转染的应用提供了脉冲参数优选指导。; 彭豪张琳刘欣郭飞; 关键词：脉冲电场电穿孔 DNA 双脉冲

超声介导微泡促进HPV16L1/sPD1 DNA转染影响HPV疫苗效应实验研究: 宫颈癌是世界上女性中第二大致死性癌症，而人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型被证实为诱发宫颈癌的主要型别。DNA疫苗是疫苗开发最具成本效益的平台之一，在几十年的研究中取得了一定成功。最近...; 汪玉玲; 关键词：DNA疫苗; 文献传递

一种高效低毒的质粒DNA转染方法: 本发明公开了一种高效低毒的质粒DNA转染方法，属于生物技术领域。本发明方法包括如下步骤：(1)以20％‑30％的细胞密度接种细胞，进行培养；(2)当细胞密度生长至40％‑60％时，进行传代培养；(3)待传代培养的细胞处于...; 郭继华贾荣贾俊郭辰

细胞穿膜肽hPP-chol、生产及其介导的质粒DNA转染的方法: 本发明涉及生物医学领域，公开了一种新型的胆固醇修饰下的人源性细胞穿膜肽hPP‑chol的生产及其介导的质粒DNA转染的方法。细胞穿膜肽hPP‑chol的序列为：Chol‑KIPLPRFKLKCIFC KKRRKR。其在C...; 刘岩松郭晓霞唐伟柳项段茹许力谢艳; 文献传递

树枝状人源性细胞穿膜肽hPP7K、生产及其介导质粒DNA转染的方法: 本发明涉及生物医学领域，公开了一种新型的树枝状人源性细胞穿膜肽hPP7K、生产及其介导质粒DNA转染方法。hPP7K是新型的树枝状人源性细胞穿膜肽，在C端或N端共价或非共价连接标记物或载物分子，并携带标记物或货物分子穿过...; 刘岩松郭晓霞唐伟柳项段茹谢艳; 文献传递

线性聚乙烯亚胺(LPEI)介导DNA转染的优化研究: 2019年; 线性聚乙烯亚胺(LPEI)是一类广泛用于核酸转染或药物传递的阳离子聚合物.为了进一步探究25kDaLPEI的转染条件,通过凝胶电泳阻滞试验评估N/P,聚合pH及聚合时间对LPEI-DNA复合物形成的影响,继而利用大范围N/P的25kDaLPEI对HEK293T细胞进行绿色荧光蛋白表达质粒转染,转染48h后通过绿色荧光细胞比例及MTT的统计分析,评估转染效率与LPEI造成的细胞毒性.结果表明,N/P的上升能增强LPEI-DNA的电泳阻滞;随着共孵育pH值从6~8升高,LPEI-DNA聚合逐渐减弱;随着共孵育时间延长,LPEI-DNA聚合逐渐增强,孵育1h时达到饱和.随着体外转染HEK293T细胞的N/P升高,转染阳性细胞比例逐渐升高,当N/P达到40~60时转染效率达到最高,进一步提高N/P后转染效率极显著下降(p<0.01);随着N/P升高,细胞活力逐渐下降.结果表明,N/P,pH,聚合时间均可影响LPEI聚合核酸能力;综合考虑N/P对HEK293T细胞转染效率及细胞毒性的影响,确定25kDaLPEI转染细胞适宜的条件为N/P为40~60,聚合pH值为6.0,聚合时间为1h.; 马兴宇叶国根乔冰珂赵建军刘安芳; 关键词：体外转染

质粒DNA转染人PBMC电穿孔条件的影响因素被引量：2: 2019年; 目的分析影响质粒转染人PBMC电穿孔效率的不同因素。方法从人外周血中分离得到PBMC,利用携带荧光标记的质粒进行电穿孔转染。分别比较不同的电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态、质粒质量对转染效率和细胞活率的影响。结果在一定范围内适当增高电压会增加细胞转染效率,但会降低细胞活率;脉冲时间达到一定数值后,转染效率才会有明显的升高;电转缓冲液对于电转后细胞存活率至关重要;未活化的PBMC转染效率低于经刺激活化的PBMC,但细胞活率却高于后者;质粒纯度和质量显著影响电穿孔转染效果,利用全波长光谱扫描仪可对质粒的杂质进行有效的检测,质粒中内毒素的含量显著影响PBMC电转后的存活率。结论对质粒转染人PBMC的电穿孔条件进行了详细的分析与探索,阐明了影响原代淋巴细胞转染的多种因素,对于有效提高人原代淋巴细胞转染效率具有重要意义,为基于淋巴细胞的肿瘤免疫研究提供有益参考。; 孔明圣于洋张亚倩李玲张文峰邵红伟; 关键词：电穿孔转染 PBMC 质粒

Mycoplasma contamination-mediated attenuation of plasmid DNA transfection efficiency is augmented via L-arginine deprivation in HEK-293 cells被引量：2: 2019年; 目的:明确支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并从支原体对细胞精氨酸代谢的角度探究其机制。创新点:支原体是细胞培养中的常见污染源。HEK-293是目前常用的生产蛋白、包装病毒的常用细胞系。然而,目前支原体污染对于质粒DNA转染效率的影响未见报道。本研究首次报道支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并揭示其机理。方法:采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定HEK-293细胞中的支原体污染情况以及支原体抗生素Plasmocin对支原体污染的清除效果。通过聚乙烯亚胺(PEI)方法对支原体污染的HEK-293细胞及支原体清除后的HEK-293细胞转染质粒,比较转染效率差异。通过高效液相色谱法(HPLC)分析支原体污染的和支原体清除后的HEK-293细胞的细胞裂解产物和细胞上清中的L-精氨酸、瓜氨酸含量变化。在支原体污染的HEK-293细胞中补充L-精氨酸,观察质粒转染效率的改变情况。结论:支原体污染能大大降低HEK-293细胞中质粒DNA的转染效率,且其原因与支原体能耗竭细胞中的L-精氨酸有关。; Zi-fei YINYa-ni ZHANGShu-fang LIANGSha-sha ZHAOJuan DUBin-bin CHENG; 关键词：转染效率 HEK-293细胞

一种高效低毒的质粒DNA转染方法: 本发明公开了一种高效低毒的质粒DNA转染方法，属于生物技术领域。本发明方法包括如下步骤：(1)以20％‑30％的细胞密度接种细胞，进行培养；(2)当细胞密度生长至40％‑60％时，进行传代培养；(3)待传代培养的细胞处于...; 郭继华贾荣贾俊郭辰

基于柔性微电极芯片活体电穿孔提高PD-1质粒DNA转染效率: 2017年; 目的开发一种柔性微电极芯片提高以PD-1质粒为模版的DNA转染效率。方法运用微机电系统加工柔性衬底的微电极芯片,在体外对HEK293细胞进行电转染GFP质粒,验证柔性微电极芯片的可靠性。在活体动物进行电穿孔转染PD-1质粒实验,BALB/C小鼠共分3组,每组5只,分别给予0 V·cm^(-2),100 V·cm^(-2),200 V·cm^(-2)不同电场强度进行电穿孔,间接ELISA法检测电转后不同时间点的血清中抗PD-1抗体滴度。结果制备的柔性微电极芯片,能够转染GFP质粒到HEK293细胞内表达蛋白;在活体实验中,采用微电极芯片电穿孔免疫5次后2周,小鼠血清中PD-1抗体达到峰值。结论基于柔性微电极芯片的活体电穿孔能够有效提高DNA转染效率,增强免疫应答。; 张卫凯胡志远李智涛; 关键词：电穿孔 DNA转染 PD-1

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