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Ca^(2+)信号对肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌与活化的影响被引量：11: 2004年; 目的　探讨Ca2 + 信号调节对肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMPs)分泌与活化的影响。方法　在体外人SMMC 772 1肝癌细胞培养体系中 ,引入Ca2 + 及其激动剂和抑制剂。应用SDS 聚丙烯酰胺 (SDS PAGE)蛋白电泳和明胶酶谱电泳分析方法 ,观察肝癌细胞培养上清中MMPs的分泌与活化水平的变化。结果　人SMMC 772 1肝癌细胞MMP 2和MMP 9的分泌和活化随着培养体系中Ca2 + 浓度升高而升高 ,在 0 .8mmol/LCa2 + 浓度时 ,达稳定水平 ,其中以MMP 2的分泌和活化最明显 ,较 0mmol/LCa2 + 组升高 (10 9.71± 2 7.93) % (P <0 .0 0 1)。在无血清培养条件下 ,肝癌细胞分泌蛋白经电泳鉴定结果提示主要为MMPs。细胞内Ca2 + 库释放诱导剂毒胡萝卜内酯 (Tg ,4 μmol/L)可明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,MMPs的分泌和活化总量较对照组升高 (5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ;而抑制剂S 亚硝基乙酰青霉胺 (SNAP ,2 0 0 μmol/L)则抑制了Tg的诱导作用。结论　肝癌细胞内Ca2 +; 蒋建利姚西英周筠黄勇陈志南; 关键词：肝癌细胞细胞内CA^2+基质金属蛋白酶 SMMC-7721 电泳分析 SDS-PAGE

βig-h3对肝癌细胞黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶的影响被引量：1: 2006年; 目的:研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验,检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化。结果:转染βig-h3基因的SMMC-7721细胞的黏附率、侵袭率及MMP-2、MMP-9的分泌量,均明显高于转染空载体的SMMC-7721细胞。结论:βig-h3具有促进肝癌细胞浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的促进因子。; 唐娟蒋建利周宏伟杨向民陈志南; 关键词：肝癌细胞

HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨被引量：10: 2004年; 目的　探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法　应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果　HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论　全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。; 蒋建利姚西英周筠黄勇张阳陈志南; 关键词：SMMC-7721细胞基质金属蛋白酶类 HAB18G/CD147 钙离子通道

多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究被引量：5: 2006年; 目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。; 李珂万琪蒋建利贾军宏蒋虹楚勤英唐志雄; 关键词：多奈哌齐 Β淀粉样蛋白 BCL-2 CASPASE-3

成纤维细胞在肿瘤发生发展中的作用被引量：2: 2006年; 成纤维细胞是产生基质的主要细胞,与肿瘤细胞相互作用,促进其自身形态与生理功能发生变化,表达多种细胞因子、蛋白酶、黏附分子,不同程度增加肿瘤细胞的恶性表型,对肿瘤发生、生长、血管形成、浸润及转移有重要作用。现综述基质成纤维细胞在肿瘤发生发展中的重要作用。; 蒋建利周宏伟陈志南; 关键词：细胞外基质成纤维细胞肿瘤

稳定表达肝癌相关抗原HAb18G/CD147成纤维细胞株的建立及其意义被引量：3: 2004年; 目的 :探讨将HAb1 8G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/ 3T3的可行性及其意义 .方法 :将含有肝癌相关抗原HAb1 8G全长cDNA的真核表达载体 pcDNA3.0 /HAb1 8G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况 ;RT PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb1 8G刺激 3T3细胞分泌基质金属蛋白酶 (MMP 2、MMP 9)的情况 .结果 :利用脂质体介导法将HAb1 8G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb1 8G的阳性克隆株 ;RT PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP 2、MMP 9mRNA转录水平较未转染前增多 ;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强 .结论 :HAb1 8G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞 ,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达。; 黄勇蒋建利周筠姚西英窦科峰陈志南; 关键词：转染成纤维细胞金属蛋白酶类

βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义: 2006年; 目的:测定转化生长因子β(TGF-β)诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法:培养人肝癌细胞T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147)、7721(未转染HAb18G/CD147)、人肝细胞癌细胞系(HHCC)和正常人张氏肝细胞QZG,提取总RNA,设计合成特异性引物,以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测βig-h3 mRNA的差异表达情况。结果:逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)结果显示,TGF-β诱导分子βig-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.01),其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC>T7721>7721,在正常肝细胞QZG中表达水平最低。结论:证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达,为进一步探讨βig-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础。; 周宏伟蒋建利郭卫平陈志南杨向民; 关键词：肝癌 HAB18G/CD147

肝癌相关抗原HAb18G对小鼠成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶2、9的影响被引量：3: 2004年; HAb18G为高特异性地表达于肝癌细胞膜表面的一种膜抗原[1,2],本研究将HAb18G全长cDNA直接转染入小鼠成纤维细胞株NIH/3T3,建立高效表达HAb18G的小鼠成纤维细胞株,观察其对基质金属蛋白酶(MMPs)的分泌所产生的影响,研究肝癌易于浸润转移的机制.; 黄勇窦科峰蒋建利陈志南; 关键词：HAB18G 小鼠肝癌基质金属蛋白酶2 相关抗原鼠成纤维细胞分泌

Differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines: 2007年; Objective:To observe the differential expression of TGF-β-induced gene human clone 3 (βig-h3) in human hepatoma cell lines. Methods: Human hepatoma cells HHCC. 7721. T7721 constructed by stably transfecting HAbl8G/CD147 cDNA into 7721 and normal human liver cell QZG were cultured as previously. RT-PCR and western blot were used to investigate the differential expression ofβig-h3 in human hepatoma cell lines and normal liver cell. Results:The results of RT-PCR suggested that the expression ofβig-h3 mRNA in human hepatoma cells was higher than that in normal human liver cell QZG(P< 0. 01), and its expression level in human hepatoma cells in turn was HHCC>T7721>7721. Moreover, the similar results ofβig-h.3 protein expression were testified by western blot. Conclusion: This study demonstrates that the expression ofβig-h3 in hepatoma cell lines is higher than that in normal liver cell QZG, which provides a sound basis for exploring the function ofβig-h3 in processes of adhesion and metastasis of human hepatoma cells.; 郭卫平周宏伟蒋建利张洪新; 关键词：肿瘤转移粘附

βig-h3在肝癌细胞系中差异表达的筛选和鉴定被引量：1: 2006年; 目的:筛选并鉴定TGFβ诱导分子βig-h3基因在肝癌细胞系T7721和7721中的差异表达.方法:培养肝癌细胞系T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147),7721(未转染HAb18G/CD147),提取总RNA,荧光交换标记(Cy5和Cy3)筛选信号转导相关基因芯片;RT-PCR检测基因芯片初步筛选出的差异分子(βig-h3)在肝癌细胞T7721和7721中的差异表达.结果:①经基因芯片差异分析,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞中TGFβ诱导分子βig-h3的mRNA表达明显上调,为7721细胞的4.4倍;而TGFβ1的mRNA表达无明显差别.②RT-PCR显示βig-h3mRNA在T7721中的表达水平明显高于7721(t=14.42,P<0.01).结论:经基因芯片筛选分析,发现HAb18G/CD147分子与TGFβ诱导分子βig-h3的表达成正相关,HAb18G/CD147的高表达诱导了βig-h3的表达增高,为进一步探讨在细胞内信号转导通路中HAb18G/CD147分子促进肝癌细胞侵袭和转移的作用机制奠定了基础.; 周宏伟蒋建利郭卫平陈志南张洪新; 关键词：HAB18G/CD147 肝细胞肿瘤转移

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国家自然科学基金(30200144)

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