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Ca^(2+)信号对肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌与活化的影响被引量：11: 2004年; 目的　探讨Ca2 + 信号调节对肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMPs)分泌与活化的影响。方法　在体外人SMMC 772 1肝癌细胞培养体系中 ,引入Ca2 + 及其激动剂和抑制剂。应用SDS 聚丙烯酰胺 (SDS PAGE)蛋白电泳和明胶酶谱电泳分析方法 ,观察肝癌细胞培养上清中MMPs的分泌与活化水平的变化。结果　人SMMC 772 1肝癌细胞MMP 2和MMP 9的分泌和活化随着培养体系中Ca2 + 浓度升高而升高 ,在 0 .8mmol/LCa2 + 浓度时 ,达稳定水平 ,其中以MMP 2的分泌和活化最明显 ,较 0mmol/LCa2 + 组升高 (10 9.71± 2 7.93) % (P <0 .0 0 1)。在无血清培养条件下 ,肝癌细胞分泌蛋白经电泳鉴定结果提示主要为MMPs。细胞内Ca2 + 库释放诱导剂毒胡萝卜内酯 (Tg ,4 μmol/L)可明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,MMPs的分泌和活化总量较对照组升高 (5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ;而抑制剂S 亚硝基乙酰青霉胺 (SNAP ,2 0 0 μmol/L)则抑制了Tg的诱导作用。结论　肝癌细胞内Ca2 +; 蒋建利姚西英周筠黄勇陈志南; 关键词：肝癌细胞细胞内CA^2+基质金属蛋白酶 SMMC-7721 电泳分析 SDS-PAGE

βig-h3对肝癌细胞黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶的影响被引量：1: 2006年; 目的:研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验,检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化。结果:转染βig-h3基因的SMMC-7721细胞的黏附率、侵袭率及MMP-2、MMP-9的分泌量,均明显高于转染空载体的SMMC-7721细胞。结论:βig-h3具有促进肝癌细胞浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的促进因子。; 唐娟蒋建利周宏伟杨向民陈志南; 关键词：肝癌细胞

HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨被引量：10: 2004年; 目的　探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法　应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果　HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论　全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。; 蒋建利姚西英周筠黄勇张阳陈志南; 关键词：SMMC-7721细胞基质金属蛋白酶类 HAB18G/CD147 钙离子通道

多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究被引量：5: 2006年; 目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。; 李珂万琪蒋建利贾军宏蒋虹楚勤英唐志雄; 关键词：多奈哌齐 Β淀粉样蛋白 BCL-2 CASPASE-3

成纤维细胞在肿瘤发生发展中的作用被引量：2: 2006年; 成纤维细胞是产生基质的主要细胞,与肿瘤细胞相互作用,促进其自身形态与生理功能发生变化,表达多种细胞因子、蛋白酶、黏附分子,不同程度增加肿瘤细胞的恶性表型,对肿瘤发生、生长、血管形成、浸润及转移有重要作用。现综述基质成纤维细胞在肿瘤发生发展中的重要作用。; 蒋建利周宏伟陈志南; 关键词：细胞外基质成纤维细胞肿瘤

稳定表达肝癌相关抗原HAb18G/CD147成纤维细胞株的建立及其意义被引量：3: 2004年; 目的 :探讨将HAb1 8G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/ 3T3的可行性及其意义 .方法 :将含有肝癌相关抗原HAb1 8G全长cDNA的真核表达载体 pcDNA3.0 /HAb1 8G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况 ;RT PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb1 8G刺激 3T3细胞分泌基质金属蛋白酶 (MMP 2、MMP 9)的情况 .结果 :利用脂质体介导法将HAb1 8G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb1 8G的阳性克隆株 ;RT PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP 2、MMP 9mRNA转录水平较未转染前增多 ;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强 .结论 :HAb1 8G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞 ,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达。; 黄勇蒋建利周筠姚西英窦科峰陈志南; 关键词：转染成纤维细胞金属蛋白酶类

βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义: 2006年; 目的:测定转化生长因子β(TGF-β)诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法:培养人肝癌细胞T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147)、7721(未转染HAb18G/CD147)、人肝细胞癌细胞系(HHCC)和正常人张氏肝细胞QZG,提取总RNA,设计合成特异性引物,以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测βig-h3 mRNA的差异表达情况。结果:逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)结果显示,TGF-β诱导分子βig-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.01),其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC>T7721>7721,在正常肝细胞QZG中表达水平最低。结论:证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达,为进一步探讨βig-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础。; 周宏伟蒋建利郭卫平陈志南杨向民; 关键词：肝癌 HAB18G/CD147

肝癌相关抗原HAb18G对小鼠成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶2、9的影响被引量：3: 2004年; HAb18G为高特异性地表达于肝癌细胞膜表面的一种膜抗原[1,2],本研究将HAb18G全长cDNA直接转染入小鼠成纤维细胞株NIH/3T3,建立高效表达HAb18G的小鼠成纤维细胞株,观察其对基质金属蛋白酶(MMPs)的分泌所产生的影响,研究肝癌易于浸润转移的机制.; 黄勇窦科峰蒋建利陈志南; 关键词：HAB18G 小鼠肝癌基质金属蛋白酶2 相关抗原鼠成纤维细胞分泌

Differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines: 2007年; Objective：To observe the differential expression of TGF-β-induced gene human clone 3 （βig- h3） in human hepatoma cell lines. Methods：Human hepatoma cells HHCC, 7721, T7721 constructed by stably transfectiug HAb18G/CD147 cDNA into 7721 and normal human liver cell QZG were cultured as previously. RT-PCR and western blot were used to investigate the differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines and normal liver cell. Results ：The results of RT-PCR suggested that the expression of βig-h3 mRNA in human hepatoma cells was higher than that in normal human liver cell QZG（P〈0.01）, and its expression level in human hepatoma cells in turn was HHCC〉T7721〉7721. Moreover, the similar results of βig-h3 protein expression were testified by western blot. Conclusion：This study demonstrates that the expression of βig-h3 in hepatoma cell lines is higher than that in normal liver cell QZG, which provides a sound basis for exploring the function of βig-h3 in processes of adhesion and metastasis of human hepatoma cells.; 郭卫平周宏伟蒋建利张洪新; 关键词：HEPATOMA HAB18G/CD147 ADHESION

βig-h3在肝癌细胞系中差异表达的筛选和鉴定被引量：1: 2006年; 目的:筛选并鉴定TGFβ诱导分子βig-h3基因在肝癌细胞系T7721和7721中的差异表达.方法:培养肝癌细胞系T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147),7721(未转染HAb18G/CD147),提取总RNA,荧光交换标记(Cy5和Cy3)筛选信号转导相关基因芯片;RT-PCR检测基因芯片初步筛选出的差异分子(βig-h3)在肝癌细胞T7721和7721中的差异表达.结果:①经基因芯片差异分析,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞中TGFβ诱导分子βig-h3的mRNA表达明显上调,为7721细胞的4.4倍;而TGFβ1的mRNA表达无明显差别.②RT-PCR显示βig-h3mRNA在T7721中的表达水平明显高于7721(t=14.42,P<0.01).结论:经基因芯片筛选分析,发现HAb18G/CD147分子与TGFβ诱导分子βig-h3的表达成正相关,HAb18G/CD147的高表达诱导了βig-h3的表达增高,为进一步探讨在细胞内信号转导通路中HAb18G/CD147分子促进肝癌细胞侵袭和转移的作用机制奠定了基础.; 周宏伟蒋建利郭卫平陈志南张洪新; 关键词：HAB18G/CD147 肝细胞肿瘤转移

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国家自然科学基金(30200144)

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