上海市自然科学基金(09zr1424800)
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
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- 转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系被引量：1
- 2011年
- 目的探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0、5×10-6、1×10-5、2×10-5 mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT-PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6 mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6 mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6 mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6 mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6 mol/L时效果最明显;推测存在LKB1-SHH-cAMP/PKA通路。
- 成小林李正东蒋蓓琦庄志刚庄传经
- 关键词：LKB1基因乳腺癌
- siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。
- 庄志刚成小林蒋蓓琦傅韵李正东罗建民金伟
- 关键词：LKB1基因HEDGEHOG信号通路裸鼠
- Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响被引量：3
- 2012年
- 目的:研究环靶明(cyclopamine)抑制Sonic Hedgehog(SHH)信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法:抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 :在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 :抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。
- 成小林蒋蓓琦李正东傅韵庄志刚庄传经
- 关键词：乳腺癌HEDGEHOG信号通路LKB1基因
- 人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中LKB1基因过表达抑制HER-2蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨不同LKB1基因表达的人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白的表达。方法:建立不同LKB1基因表达的人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,免疫组化检测原位移植瘤组织中LKB1及ER,PR,HER-2表达。结果:LKB1低表达的MDA-MB-435细胞株(MDA-MB-435)裸鼠移植瘤及转染空质粒的MDA-MB-435(MDA-MB-435/vect)裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白呈高表达,而转染LKB1cDNA的MDA-MB-435(MDA-MB-435/LKB1)裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白呈低表达,转染与未转染LKB1的裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白表达差异显著,具有统计学显著意义(P<0.01)。三组中ER,PR的表达无显著差异。结论:人乳腺癌裸鼠移植瘤中LKB1基因的过表达抑制HER-2蛋白表达。
- 庄志刚贺其志蒋蓓琦李正东成小林罗建民金伟
- 关键词：乳腺肿瘤HER-2LKB1基因
- LKB1基因与Hedgehog信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制机制的探讨
- 2011年
- 目的:探讨乳腺癌细胞中LKB1基因与Hedgehog信号转导途径的关系。方法:以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,LKB1基因转染或干扰处理后,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测Hedge-hog信号通路中Shh、Sufu、Ptch、Smo、Gli 1、Hip mRNA和蛋白表达的变化。建立LKBl基因表达抑制的细胞移植瘤模型,验证体外实验结果并进行对比分析。结果:Hedgehog信号通路激动因子Ptch的mRNA和蛋白的表达在各组细胞中差异无统计学意义。而激动因子Shh、Gli1和Smo的mRNA和蛋白的表达在MDA-MB-231正常细胞及其空质粒细胞、siRNA无关序列细胞中差异无统计学意义;在LKB1转染细胞中降低(F=29.56,P<0.05),在LKBl转染siRNA细胞中升高(F=32.15,P<0.05)。而抑制因子Sufu、Hip的mRNA和蛋白的表达正好相反,在LKB1转染细胞中升高,在LKBl转染siRNA细胞中降低,F=30.25,P<0.05。移植瘤检测Shh、Su-fu、Smo、Gli 1、Hip蛋白表达与体外实验相似,F=8.40,P<0.01。而且发现LKBl转染siRNA细胞组裸鼠肿瘤平均体积显著大于对照组(F=4.68,P<0.05),生存时间显著短于对照组,F=3.50,P<0.01。LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达呈负相关,r=0.232,P<0.05。结论:LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达在乳腺癌细胞中呈负相关,LKB1基因可能通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞的发生,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治可能有重要影响。
- 庄志刚成小林蒋蓓琦李正东屈雪莹
- 关键词：乳腺肿瘤信号传导
- LKB1基因在不同基因亚型乳腺癌中表达的意义被引量：5
- 2010年
- 目的:检测LKB1基因在不同基因亚型乳腺癌中的表达,并探讨其在乳腺癌中表达的意义。方法:应用组织芯片及免疫组织化学法对180例乳腺浸润性导管癌、18例导管原位癌及20例正常乳腺组织中LKB1基因、ER、PR、HER-2、CK56、和P53的表达进行检测;根据最近提出的乳腺癌分子分型进行分组,对LKB1基因在不同基因亚型中的表达及与其他临床病理特征的关系进行统计学分析。结果:LKB1基因在乳腺导管原位癌的阳性率为66.11%(11/18),浸润性导管癌的阳性率为36.67%(66/180),两组间差异有统计学意义(P<0.05);在浸润性导管癌中,LKB1基因在淋巴结转移组阳性率为47.61%(40/84),无转移组阳性率为83.33%(80/96),两组间差异具有统计学意义(P<0.01);在不同基因亚型中中LKB1基因的表达差异具有统计学意义(P<0.05);其中Luminal A组与HER-2+组及三阴性组两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LKB1基因的在乳腺浸润性导管癌中的表达明显低于导管原位癌,与淋巴结转移呈负相关,且在生物学行为更为恶性的HER-2+组和三阴性组具有更低的表达水平,提示LKB1基因对乳腺癌的浸润与转移过程有抑制作用。
- 庄志刚贺其志蒋蓓琦李正东金伟
- 关键词：LKB1基因组织芯片
- 乳腺浸润性导管癌ER、PR、CerbB-2、Ki-67表达与临床病理及预后的关系被引量：8
- 2009年
- 目的观察乳腺浸润性导管癌患者生物学特征与临床病理及生存率的相关性,探讨这些生物学特征在临床诊断及预后中的价值。方法收集临床资料,采用免疫组化检测女性原发性乳腺浸润性导管癌324例患者的ER、PR、CerbB-2、Ki-67的表达状况,与患者的临床病理学如病理类型和组织学分级等因素相结合进行比较,并结合随访资料分析上述指标与患者预后的关系。结果乳腺浸润性导管癌术后生物学指标中,乳腺癌组织分级与CerbB-2、Ki-67阳性表达正相关(P=0.0498,P=0.0404);pTNM分期与CerbB-2、Ki-67阳性表达正相关。单因素生存分析显示ER、PR、CerbB-2和Ki-67阳性表达是乳腺癌复发的影响因素,而CerbB-2阳性表达对总生存率的影响有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox模型分析显示CerbB-2、Ki-67阳性表达是影响乳腺癌复发的独立因素,而CerbB-2、Ki-67阳性表达是影响生存期的独立因素。结论CerbB-2、Ki-67指标与乳腺癌的组织学分级相关,CerbB-2、Ki-67阳性表达和乳腺癌pTNM分期相关。影响乳腺癌患者预后的独立因素有ER、PR、CerbB-2、Ki-67,其中CerbB-2、Ki-67阳性表达是预后不良的指标,ER、PR阳性表达是预后良好的指标。
- 李正东蒋蓓琪庄志刚
- 关键词：乳腺肿瘤预后
- 曼月乐降低三苯氧胺引起的子宫内膜病变的研究被引量：4
- 2011年
- 三苯氧胺是雌激素受体阳性的乳腺癌患者内分泌治疗的首选药物。其抗雌激素作用用于乳腺癌治疗,但类雌激素样的作用可能导致子宫内膜病变,长期使用可增加子宫内膜癌的发病率。本文旨在探讨三苯氧胺引起子宫内膜病变的作用机制以及左炔诺孕酮宫内缓释系统(曼月乐)对三苯氧胺引起的相关子宫内膜病变的治疗及预防作用。
- 傅韵庄志刚
- 关键词：三苯氧胺乳腺肿瘤子宫内膜病变左炔诺孕酮宫内缓释系统
- 乳腺癌中Hedgehog信号通路的表达及其与LKB1基因相关性的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路主要蛋白在乳腺癌中的表达及其与LKB1基因的相关性,以及与临床病理特征、预后的关系。方法:采用免疫组化方法检测75例人乳腺癌标本中Hh信号通路主要蛋白(Shh、Smo、Sufu、Gli1、Ptch)及LKB1基因的表达,分析二者相关性,并分析Hh信号通路的表达与临床病理特征及预后的关系。结果:在75例乳腺癌样本中,阳性表达Shh、Gli1、Smo、Ptch、Sufu、LKB1分别为69(92.0%)、58(77.3%)、65(86.7%)、50(66.7%)、34(45.3%)、33(44.0%),而在其相邻的正常乳腺上皮不表达或低表达。Hh信号通路与LKB1的表达呈负相关;Hh信号通路的表达情况与患者年龄、淋巴结转移情况、分子分型具有一定的相关性,且高表达的患者预后较差。结论:Hh信号通路在乳腺癌中过度激活,与临床病理特征及预后相关,并与LKB1基因的表达呈负相关,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治及预后可能有重要影响。
- 屈雪莹庄志刚成小林罗建民贺其志
- 关键词：HEDGEHOG信号通路乳腺肿瘤免疫组织化学
