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国家重点基础研究发展计划(G1999053906): 作品数：12 被引量：116H指数：8; 相关作者：童坦君张宗玉张晓伟黄英郭焱更多>>; 相关机构：北京大学北京医科大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生电子电信更多>>

端粒酶反义腺病毒载体对乳腺癌细胞MCF-7端粒酶的抑制作用被引量：10: 2000年; 目的　研究端粒酶RNA的反义对人乳腺癌细胞系MCF 7细胞端料酶活性的影响。方法　用重组腺病毒转移并表达端粒酶RNA的反义cDNA ,采用基因重组、脂质体共转染法获得端粒酶反义重组病毒 ,用Southern杂交鉴定病毒的整合功能 ,用TRAP 银染法检测端粒酶活性。结果　MCF 7细胞是恶性乳腺癌的典型细胞系。与对照组MCF 7、MCF 7 vAd AAV细胞相比 ,反义病毒感染后的MCF 7 vAdT AAV细胞的端粒酶活性明显降低 ,只扩增出小片段的寡聚核苷酸。结论　端粒酶RNA的反义cDNA的导入。; 张晓伟童坦君; 关键词：乳腺癌端粒端粒酶 MCF-7 基因抑制

衰老过程中原癌基因及抑癌基因的表达谱被引量：26: 2002年; 细胞衰老时增殖能力逐渐减退 ,实质细胞不断减少 ,是脏器功能衰退的原因之一。原癌基因及抑癌基因与细胞增殖调控密切相关 ,因而它们与细胞衰老的关系早已引起人们的关注。本文就此进行了概括介绍。总的看来 ,衰老时多数原癌基因表达降低 ,抑癌基因表达增强。; 韩晓琳张宗玉童坦君; 关键词：衰老原癌基因抑癌基因表达谱

fibrillarin在有丝分裂过程中分布于纺锤体两极: 2002年; fibrillarin是核仁的一个主要蛋白成分,细胞分裂时它要经历从核仁到细胞质的重新分布过程,并且与细胞分裂后核仁的重新组装有着密切的关系.为了研究有丝分裂过程中fibrillarin的动态变化及与其他细胞结构的关系,构建了fibrillarin的真核表达载体,采用cDNA转染、免疫荧光标记和免疫共沉淀等方法证明了处于分裂期的HeLa细胞中fibrillarin不但分布于细胞质,而且还有一部分定位于纺锤体两极的中心体部位,并且与NuMA蛋白共定位.当使用药物将分裂期细胞的微管结构解聚后,fibrillarin在两极聚集的现象消失,而后随着纺锤体的重新组装,fibrillarin又在两极重新出现.体外非细胞体系的实验也证明了fibrillarin和分裂期细胞中微管中心体结构结合在一起.; 郭焱魏朝亮胡劲松丁明孝陈建国; 关键词：有丝分裂过程纺锤体中心体真核细胞核仁 FIBRILLARIN

人衰老成纤维细胞凋亡的可诱导性被引量：10: 2000年; 目的　研究体外培养的人成纤维细胞衰老时可诱发凋亡的能力。　方法　用丁酸钠和去血清两种方法诱导人衰老和年轻成纤维细胞 ,以细胞生存曲线、细胞形态和超微结构、DNA断裂电泳图谱、流式细胞仪分析凋亡峰等手段检测凋亡的发生情况。　结果　 5 0 mm ol/ L的丁酸钠诱导年轻细胞 48h即发生凋亡 ,而衰老细胞需 96 h;去血清诱导年轻细胞 15 d左右发生凋亡 ,而衰老细胞此时尚未出现凋亡现象。　结论　人衰老成纤维细胞可诱发凋亡的能力明显低于年轻细胞。; 黄英张宗玉童坦君; 关键词：成纤维细胞衰老细胞凋亡

p21^(WAF1)在丁酸钠诱导的人成纤维细胞凋亡中的表现被引量：4: 2000年; 用丁酸钠 (NaBu)诱导了人胚肺二倍体成纤维细胞凋亡 (2BS) ,检测其诱导过程中凋亡相关基因的表达变化 ,结果表明 ,p2 1WAF1的表达在凋亡发生前即有明显下降 ,并持续至凋亡发生时 ,bcl 2的表达仅在凋亡发生时有所下降 ,c myc和c fos的表达有所上升 ,而 p5 3和HER 2的表达无明显变化 .用稳定转染了不同长度p2 1WAF1启动子片段和下游绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的 2BS WP系列细胞进一步研究发现 ,其GFP的表达水平在NaBu诱导过程中下降 ,主要调控区域为 p2 1WAF1启动子的TATAbox上游 0～ - 80 0bp .说明NaBu诱导的人胚肺二倍体成纤维细胞凋亡与p2 1WAF1启动子的转录活性下降与密切相关 ,并且可能不依赖于p5 3.; 黄英张宗玉童坦君; 关键词：P21^WAF1 丁酸钠成纤维细胞

人外周血淋巴细胞凋亡与年龄及p21^(WAF1)的关系被引量：8: 2001年; 分别从老年人和新生儿外周血中分离淋巴细胞 ,用形态观察、DNA断裂电泳图谱、流式细胞仪分析凋亡峰等手段检测其在体外培养过程中发生凋亡的情况 .结果表明 ,不论是自发凋亡还是用1 0 mmol/L的丁酸钠诱导其凋亡 ,老年人淋巴细胞的凋亡率均高于新生儿组 .进一步检测淋巴细胞凋亡时 p2 1 WAF1的表达变化 ,结果表明老年人淋巴细胞 p2 1 WAF1的下调幅度明显大于新生儿组 .提示老年人淋巴细胞凋亡率高与其 p2 1 WAF1表达容易下调有关 .; 黄英杨龙张宗玉童坦君; 关键词：淋巴细胞 P21^WAF1 年龄

基因科学的革命——基因芯片技术被引量：31: 2000年; 基因芯片技术是一种建立在杂交测序基本理论上的全新技术 ,它利用固定在芯片上的几万至几十万条探针与样品进行杂交 ,在一步实验中获取大量的信息。它的出现 ,使基因序列测定、基因功能测定等工作的程序得到了极大的简化 ,使许多原来根本不可能实现的检测成为可能。基因芯片技术使用了包括光控固相化学合成、激光共聚焦等在内的多项先进技术 ,实验实现了全部自动化 ,操作极为简便 ,可以节约大量的时间和实验成本。该项技术 ,已经在基因多态性分析、基因表达分析等多方面得到了广泛的应用 ,并已开始应用于临床诊断。随着基因芯片技术的进一步成熟和越来越多的成品芯片的设计制造成功。; 翟鹏童坦君; 关键词：基因芯片杂交

组蛋白H2A与染色质的动态结合: 2003年; 在真核细胞中 ,核小体的核心结构组蛋白被DNA紧密缠绕 ,但是这种紧密的结合有时也可能变得松散 ,以利于其他蛋白与DNA的结合。将组蛋白H2A与绿色荧光蛋白的融合表达载体和核仁纤维蛋白 (fibrillarin)与红色荧光蛋白的融合表达载体共转染COS 7细胞 ,利用荧光漂白恢复(FRAP)技术研究了H2A在细胞核内的动态变化。结果显示 ,在少数间期细胞的核仁区有组蛋白聚集现象 ,且此区域内H2A的运动速度显著地高于非核仁区的H2A ,推测该现象仅出现于细胞周期的某个时期。; 郭焱孙玉慧魏朝亮丁明孝陈建国; 关键词：组蛋白核仁

端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响被引量：10: 2001年; 为了进一步探讨端粒酶在肿瘤发生中的作用 ,实验应用反义核酸技术研究端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞MCF 7恶性表型的影响采用的方法包括 :基因重组、脂质体共转染法获得端粒酶反义重组病毒 ,病毒感染MCF 7后 ,检测细胞的生长曲线、细胞周期及集落形成能力结果表明 ,与对照组细胞相比 ,反义病毒感染后的MCF 7细胞恶性表型明显降低提示端粒酶RNA的反义cDNA的导入。; 张晓伟童坦君; 关键词：端粒酶反义核酸技术 MCF-7 恶性表型乳腺癌细胞

Senescence-like changes induced by expression of p21^(Waf1/Cip1) in NIH3T3 cell line被引量：9: 2002年; P21Waf1/Cip1 is a potent cyclin-dependent kinase inhibitor. As a downstream mediator of p53, p21Waf1/cip1involves in cell cycle arrest, differentiation and apoptosis. Previous studies in human cells provided evidencefor a link between p21Waf1/cip1 and cellular senescence. While in murine cells, the role of p21Waf1/Cip1is indefinite. We explored this issue using NIH3T3 cells with inducible p21Waf1/cip1 expression. Induc-tion of p21Waf1/Cip1 triggered G1 growth arrest, and NIH3T3-p21 cells exhibited morphologic features,such as enlarged and flattened cellular shape, specific to the senescence phenotype. We also showed thatp21Waf1/Cip1-transduced NIH3T3 cells expressedβ-galactosidase activity at pH 6.0, which is known to bea marker of senescence. Our results suggest that p21Waf1/cipx can also induce senescence-like changes inmurine cells.; XI CHENWEI ZHANGYUN FEI GAOXIAO QIN SUZHONG HE ZHAI

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