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我国代表性茶树种质嘌呤生物碱的鉴定被引量：18: 2014年; 从国家种质杭州茶树圃选取了403份代表性的茶树资源，采用HPLC对嘌呤生物碱进行了两年、春秋两季的重复鉴定。结果表明，年度和季节间咖啡碱含量总体稳定，但可可碱含量春季变化显著。93%以上资源的咖啡碱含量为25.0 ~ 45.0 mg/g。茶的3个变种间，咖啡碱含量存在着显著差异，且阿萨姆茶秋季较春季咖啡碱含量明显增加。来源不同地区的资源咖啡碱含量存在着显著差异，其中云南和广东的资源变异系数和多样性指数最大。从403份资源中筛选出3份高咖啡碱。; 金基强周晨阳马春雷姚明哲马建强陈亮; 关键词：茶树种质资源生物碱

茶树简化EcoTILLING技术的建立被引量：7: 2010年; EcoTILLING(Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)可快速检测自然群体中的SNP(Single Nucleotide Polymorphism)等DNA变异。第一次建立了简化的茶树EcoTILLING技术体系:首先筛选扩增目的基因的特异PCR引物;然后通过CELⅠ酶切PCR产物优化实验,确定酶切时间20 min、10×buffer组成为250 mmol/L Tris-HCl(pH7.4)、150 mmol/L KCl、15 mmol/L MgSO4、4μg/mL BSA和0.04%Triton x-100,反应温度为47.5℃,酶量为1.8μL CJE(Celery Juice Extract)/10μL反应体系时,酶切的谱带信号较强、特异性高;初步确定合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条件为凝胶浓度5%、上样量4～5μL、有效分离长度要达到15 cm。利用上述简化的EcoTILLING对6份茶树种质870 bp的PPO基因片段实现了分型,经测序验证酶切产生的谱带与6份种质内部或不同种质间的SNP位置吻合。; 金基强陈亮姚明哲王新超马春雷; 关键词：茶树 SNP

茶树TIDH核苷酸多样性及与咖啡碱含量的关联分析被引量：5: 2013年; 咖啡碱是嘌呤碱中最重要的一种,对茶叶的滋味等品质起重要的作用,对于咖啡碱代谢途径的研究有重要意义。根据NCBI登录的TIDH基因(编码咖啡碱合成途径的一个关键酶——次黄嘌呤核苷酸脱氢酶)cDNA设计引物,克隆获得了一条基因组DNA的中间片段,长4172bp(TIDH3)。从中国茶树资源核心种质中选取咖啡碱含量有代表性的95份资源进行了两个年度、春秋两季的咖啡碱含量HPLC测定,大部分材料的咖啡碱含量在2.50%～4.50%,4次重复的平均值为3.50%,变异系数在15.52%～19.25%,表明茶叶咖啡碱含量在不同年份与季节都是相对稳定的。经PCR扩增、测序和序列多态性分析,TIDH3中的一个759bp片段的总核苷酸多样性指数πT和θW分别为0.006和0.012,同义突变多样性πsyn=0.009大于非同义突变多样性πnonsyn=0.006。Ka/Ks=0.600<1,认为TIDH3基因受到负向选择作用。TIDH3基因连锁不平衡分析表明,基因内的连锁不平衡衰减速度较快,在约300bp范围内r2值降低到了0.2。通过关联分析,获得两个与咖啡碱含量显著相关的SNP位点,遗传贡献率分别为10.43%和5.68%。; 周晨阳金基强马春雷姚明哲陈亮; 关键词：茶树咖啡碱基因克隆

利用基因芯片筛选茶树芽叶紫化相关基因被引量：18: 2011年; 采用基因芯片技术对龙井群体中紫芽资源和绿芽资源进行分析,探索茶树紫化相关的差异表达基因。结果检测到差异表达基因43个,其中上调表达基因17个,下调表达基因26个。以基因芯片中紫芽资源上调基因TC0002e03和下调基因TL016D09、TL011D06,及不变基因TL022H08、TL024B05为材料,用实时荧光定量方法验证基因芯片的结果,二者完全相符。根据基因芯片的实验结果,采用数据库查询方式对43个差异表达基因进行功能注释,结果表明差异表达基因主要与能量代谢、次生代谢和转录调控等分子功能有关,特别是在差异表达基因中还包含两个与花青素代谢途径直接相关的基因,苯丙氨酸解氨酶和花青素还原酶基因,同绿芽资源相比,它们在紫色资源中分别下调3.44倍和上调2.09倍;同时还筛选到两个可能调控花青素合成的转录因子MYB蛋白和WD40蛋白,分别上调2.25倍和2.54倍。这些研究结果将为深入理解茶树芽叶的紫化机理,克隆相关基因打下基础。; 马春雷姚明哲王新超金基强陈亮; 关键词：茶树基因芯片差异表达基因

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浙江省自然科学基金(Y3090041)