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含人γ-干扰素基因真核表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达被引量：8: 2002年; 目的　构建含人γ -干扰素 (IFN -γ)基因的真核表达载体 ( pcDNA3-IFN -γ) ,并观察其在肝癌细胞株中的表达情况。方法　将IFN -γ的cDNA亚克隆于哺乳动物载体 ( pcDNA3)上 ,经脂质体介导将pcDNA3-IFN -γ导入人肝癌细胞株SMMC -772 1和QGY -770 1中 ,通过高剂量G418选择培养得出抗性克隆。RT -PCR检测IFN -γ基因在转染细胞内有无转录 ,ELISA法检测转染细胞内IFN -γ的表达水平。结果　 IFN -γ基因的mRNA仅存在于pcDNA3-IFN -γ导入的肝癌细胞内。其细胞培养上清液存在高水平的IFN -γ。结论　含IFN; 郭英杨丽新王坤闵军陈积圣; 关键词：遗传学基因表达肝癌

腺病毒介导的p53抑制肝癌生长的实验研究被引量：9: 2001年; 目的探讨外源性野生型Ｐ５３（Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅｐ５３，ＷＴ－ｐ５３）基因对肝癌细胞生长的影响。方法通过表达ＷＴ－ｐ５３的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｐ５３），将ｐ５３基因导入肝癌细胞株中，用ＭＴＴ法检测Ａｄ－ｐ５３对各细胞株生长特性的影响，流式细胞仪分析各组细胞中ＤＮＡ含量及凋亡的比例。建立裸小鼠移植瘤模型后，瘤内注射Ａｄ－ｐ５３。最后处死动物，移植瘤称重，ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测ｐ５３和ｐ２１蛋白的表达情况。结果外源性ｐ５３基因的导入可导致肝癌细胞生长的明显抑制，表现为既诱导细胞凋亡，又诱导细胞周期阻滞。瘤内注射Ａｄ－ｐ５３后移植瘤生长明显受抑制，并出现瘤组织中ｐ５３和ｐ２１蛋白表达的上调。结论腺病毒介导的ｐ５３基因治疗能有效控制肝癌的生长。; 郭英曾益新王坤朱孝峰罗慧玲郑美莲李满枝陈积圣; 关键词：基因 P53 腺病毒肝细胞

野生型p53基因对不同内源性p53状态的肝癌细胞株生长的影响被引量：9: 2001年; 目的探讨外源性野生型p5 3(wild typep5 3,WT p5 3)基因对具有不同内源性p5 3功能状态肝癌细胞生长的影响。方法通过表达WT p5 3的重组腺病毒载体 (Ad p5 3) ,将p5 3基因导入具有不同内源性p5 3功能状态的肝癌细胞株Bel 740 2、QGY 770 1和PLC/PRF/ 5中 ,用MTT法检测Ad p5 3对各细胞株生长的影响 ,流式细胞仪分析各组细胞中DNA含量及凋亡的比例。结果当取 40、2 0 0、80 0MOI值的表达p5 3的腺病毒分别转染PLC/PRF/ 5、Bel 740 2和QGY 770 1细胞时 ,72h后行MTT检测 ,OD值分别为 :在PLC/PRF/ 5细胞 ,空载体 (Ad LacZ)组 0 98± 0 16 ,Ad p5 3组 0 0 2± 0 0 0 (P <0 0 1) ;在Bel 740 2细胞 :Ad LacZ组 1 0 4± 0 2 3,Ad p5 3组 0 10± 0 0 2 (P <0 0 1) ;而在QGY 770 1细胞 :Ad LacZ组 1 88± 0 2 4,Ad p5 3组 1 86± 0 19(P >0 0 5 )。细胞周期分析显示 ,在PLC/PRF/ 5 ,表现为既诱导细胞凋亡 ,又诱导细胞周期阻滞。在Bel 740 2 ,表现为诱导细胞周期阻滞。结论外源性p5 3对肝癌细胞生长的抑制可能与内源性p5 3功能状态无关。; 郭英王坤陈积圣; 关键词：肝细胞基因 P53 基因表达调控腺病毒科肝癌

可溶性Ⅰ型胶原蛋白对移植肝细胞凋亡的抑制作用被引量：6: 2001年; 目的　研究可溶性Ⅰ型胶原蛋白对自体移植肝细胞凋亡的抑制作用及相关机制。方法　建立自体肝细胞脾内移植大鼠模型 ,按肝细胞处理的不同分为肝细胞悬液不处理组 (A组 )、拮抗型抗整合素 β1单克隆抗体及Ⅰ型胶原蛋白处理组 (B组 )以及Ⅰ型胶原蛋白处理组 (C组 ) ,应用99mTc AnnexinV的单光子发射计算机体层摄影术 (SPECT)显像测定肝化脾对99mTc AnnexinV的摄取率 ,采用原位末端标记法 (TUNEL法 )检测肝细胞凋亡指数 ,并用免疫组织化学法检测移植肝细胞磷酸化酪氨酸蛋白的表达。结果　C组的移植肝细胞凋亡指数和99mTc AnnexinV摄取率分别为 (3 .86±1.37) %和 5 5 1.2± 98.3,均显著低于A组和B组 (P <0 .0 1) ,其磷酸化酪氨酸蛋白表达强度在 + +以上者为 75 % ,高于A组和B组 (P <0 .0 5 ) ,其磷酸化酪氨酸蛋白的表达与凋亡指数呈负相关。; 宋尔卫陈积圣张磊邓小耿; 关键词：肝细胞移植细胞凋亡

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国家自然科学基金(39670705)