国家自然科学基金(30571384)
- 作品数：6 被引量：27H指数：3
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- 8株动物源编码Stx2短尾噬菌体的生物学特性
- 2008年
- 【目的】对8株源自大肠杆菌O157编码Stx2毒素的噬菌体生物学特性进行研究。【方法】丝裂霉素C诱导8株大肠杆菌O157菌株释放噬菌体,采用PCR作初步鉴定,分离、纯化噬菌体基因组,随机引物法地高辛(DIG)标记stx2基因片段作为探针,对纯化的噬菌体采用Southern blot进行Stx2噬菌体再次鉴定,透射电子显微镜观察纯化的8株Stx2噬菌体的形态特征,通过限制性内切酶图谱分析,确定噬菌体的核酸类型和基因组大小、以及限制性内切酶酶切片段多态性,并分析噬菌体的蛋白质组成特征。【结果】Southern blot证实分离的8株噬菌体为Stx2噬菌体,电镜下观察的各株Stx2噬菌体形态一致,头部均为正六边形,尾部很短,属于短尾噬菌体科,各株噬菌体之间存在相同的蛋白结构模式,基因组为双链DNA,限制性内切酶片段长度表现出一定的多态性,噬菌体的基因组大小从48.0～65.3kb不等。【结论】来源不同菌株的8株编码Stx2噬菌体均为短尾噬菌体,其蛋白结构模式一致,但基因组具有不同组成。
- 夏炉明苏良科孙建和严亚贤
- 关键词：SDS-PAGE
- 噬菌体治疗制剂的研究进展被引量：9
- 2007年
- 从噬菌体作为治疗制剂的前提条件、噬菌体的药物动力学特征、噬菌体可能携带的有害基因、噬菌体产物、噬菌体治疗的实例等方面综述了噬菌体作为治疗制剂的研究进展,旨在通过介绍用噬菌体替代抗生素治疗由细菌引起的感染的机理,为细菌性疾病的治疗提供新的思路和方法。
- 高成秀严亚贤
- 关键词：噬菌体细菌感染
- 大肠杆菌O157溶源性Stx噬菌体的诱导及鉴定
- 采用PCR方法对62株大肠杆菌菌株进行stx基因检测,将筛选到含有stx基因的菌株进行噬菌体诱导、分离、纯化和鉴定,并对编码Stx2的噬菌体(Stx2噬菌体)相关基因进行序列测定。将分离的Stx2噬菌体溶源大肠杆菌MC1...
- 夏炉明孙建和严亚贤
- 关键词：测序
- 文献传递
- 大肠杆菌vpr基因突变株的蛋白表达及功能研究被引量：3
- 2006年
- 目的进一步确定vpr基因及相关蛋白的功能。方法在获得vpr同源基因突变株MC1061△vpr的基础上,构建了vpr基因突变株的回复株MC1061-C,并进行了噬菌体裂解试验、细胞壁吸附试验、蛋白表达和印迹试验。结果亲本株MC1061和回复株MC1061-C对VT2噬菌体C43b的裂解敏感,突变株MC1061△vpr抵抗噬菌体C43d的裂解。噬菌体吸附细胞壁试验中,吸附30min后,亲本株和回复株的上清液中分别存在6.4%和5.2%的游离噬菌体,吸附到90min时未有大量的游离噬菌体释放。噬菌体与突变株的细胞壁吸附30min后,上清液中有85.4%的游离噬菌体存在,表明VT2噬菌体能与亲本MC1061和回复株MC1061-C的细胞壁不可逆吸附,但不能与突变株MC1061△vpr的细胞壁发生不可逆吸附。在蛋白表达中,Westernblot显示回复株和亲本株均能转印出特异性90000蛋白主带,而突变株没有。结论vpr基因表达的分子量为90000的Vpr蛋白与VT2噬菌体的裂解敏感性有关,可能是VT2噬菌体的裂解受体。
- 孙建和严亚贤陆承平
- 关键词：敏感性WESTERNBLOT受体
- Stx2噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性
- 利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7 Min27株的stx2基因中。获得O157:H7 Min27的突变菌株Min27(Δstx::cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导...
- 苏良科严亚贤陆承平
- 关键词：大肠杆菌O157:H7
- 文献传递
- 丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157 Stx毒素表达的影响
- 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑...
- 夏炉明孙建和严亚贤
- 关键词：大肠杆菌O157丝裂霉素CVERO细胞
- 文献传递
- 源自大肠杆菌O157编码Stx2毒素的噬菌体特性研究
- 丝裂霉素C诱导8株大肠杆菌O157释放编码Stx2毒素的噬菌体。以地高辛(DIG)标记的stx2基因片段作为探针。应用Southern blot对纯化的噬菌体进行鉴定。通过限制性内切酶图谱分析,确定噬菌体的核酸类型、基因...
- 夏炉明苏良科孙建和严亚贤
- 关键词：SDS-PAGE
- 文献传递
- 丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157 Stx毒素表达的影响被引量：4
- 2008年
- 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑,并采用PCR方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导前以及诱导8、12、16h这4个阶段滤液中Stx毒素的表达量,毒素表达量采用WST-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量也显著增加,且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加,但增加的幅度逐渐减缓。【结论】本研究确定了丝裂霉素C可以诱导溶原性大肠杆菌O157释放Stx噬菌体,同时也增加了Stx毒素的表达,从而增强细菌的毒力。
- 夏炉明孙建和严亚贤
- 关键词：丝裂霉素CVERO细胞
- 志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性被引量：3
- 2008年
- 【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min27(△stx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx∷cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】ΦMin27(△stx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。
- 苏良科严亚贤陆承平
- 关键词：大肠杆菌O157:H7
- Stx2噬菌体ФMin27溶原影响宿主大肠杆菌的分子机制
- 大肠杆菌O157为重要的食源性病原菌，其主要毒力因子之一是志贺毒素（Shiga toxin），编码志贺毒素的噬菌体为志贺毒素噬菌体（Stx噬菌体）。Stx噬菌体的溶原可使宿主菌产生Stx毒素，导致细菌致病力增强。此外 S...
- 曹冬梅
- 关键词：分子机制
- 文献传递
