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抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析: 2011年; 为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。; 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永; 关键词：伪狂犬病病毒 GH基因

α-疱疹病毒与宿主细胞骨架相互作用的研究进展被引量：1: 2010年; α-疱疹病毒复制包括吸附宿主细胞膜、膜融合、穿入与脱衣壳、DNA复制与核衣壳装配、囊膜形成与病毒粒子的成熟释放等过程。为了创造一个有利于自身复制和扩散的细胞环境,α-疱疹病毒进化了多种与宿主细胞相互作用的机制。宿主细胞骨架主要包括微管、微丝和中间纤维,在-疱疹病毒复制过程中发挥重要的作用。α-疱疹病毒是如何利用宿主细胞骨架完成其高效率的复制,而宿主细胞骨架又是在病毒的生活周期中起到何种作用,本文就近年来-疱疹病毒与宿主细胞骨架相互作用做一简单综述,有望为抗病毒治疗提供新的研究思路。; 刘超邱亚峰马志永; 关键词：细胞骨架病毒复制

抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达被引量：5: 2011年; 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。; 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永; 关键词：伪狂犬病病毒

p53基因表达沉默的稳定Vero细胞系的建立及特性分析: 2010年; 利用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立稳定沉默p53基因的Vero细胞模型。设计针对p53基因的shRNA序列,构建p53shRNA慢病毒载体并感染Vero细胞;嘌呤霉素筛选阳性细胞,局部消化法挑选细胞克隆;利用RT-PCR和West-ernblot检测p53的表达水平;利用虫荧光素酶报告系统,分析p53的转录激活功能。RT-PCR和Westernblot结果显示,慢病毒介导的shRNA有效地沉默p53基因表达;与对照组细胞相比,干扰组细胞的p53的转录激活功能明显降低。慢病毒介导的shRNA高效、稳定地沉默了p53基因的表达,同时,有效地降低了p53的转录激活功能,为研究p53的生物学功能提供了有利的工具。; 刘超邱亚峰沈阳刘庆伟马志永; 关键词：P53 慢病毒载体 RNA干扰细胞系

伪狂犬病病毒Bartha株gC膜外区部分基因的原核表达及纯化被引量：1: 2009年; 构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,获得大小为35 ku的重组蛋白,命名为pET-gCN813。按照His-Bind纯化试剂盒说明书纯化表达产物,获得融合蛋白的纯化产物。; 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永; 关键词：伪狂犬病病毒 GC基因原核表达融合蛋白

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国家自然科学基金(30700593)