国家自然科学基金(30772299)
- 作品数：26 被引量：92H指数：7
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- 相关机构：第三军医大学大坪医院兰州大学第二医院重庆医科大学更多>>
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- 黄芪总皂甙对Wnt/β-catenin信号通路及神经干细胞分化的影响被引量：7
- 2018年
- 目的观察黄芪总皂甙(TSA)调控体外培养大鼠神经干细胞(NSCs)向神经元方向分化的作用及其有效浓度,并研究其Wnt/β-catenin信号通路相关机制。方法新生24 h大鼠大脑皮层来源NSCs进行原代、传代培养并鉴定,通过CCK-8试剂盒初筛TSA诱导分化的可能有效浓度。取第三代NSCs,设不加TSA的正常组和不同浓度TSA实验组,分化培养7 d后,间接免疫荧光法和Western blotting检测微管相关蛋白2 (MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。另设正常组、最佳浓度TSA组、TSA+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001组和ICG-001组,分化培养7 d后,Western blotting检测各组Wnt3/3a、β-catenin和抗神经原素1 (Ngn1)蛋白表达。结果 TSA在浓度1×10-4mol/L、1×10-5mol/L、1×10-6mol/L时,NSCs数量显著增加(P <0.001)。TSA能增加NSCs分化为神经元的比例,1×10-5mol/L最佳(P <0.05)。TSA能上调Wnt3/3a、β-catenin与Ngn1蛋白的表达(P <0.05)。结论 TSA能促进体外培养NSCs向神经元方向分化,与激活Wnt/β-catenin信号通路,从而调控该通路下游促分化靶向蛋白Ngn1的表达有关。TSA最佳促神经元方向分化浓度约为1×10-5mol/L。
- 漆国栋伍亚民漆伟刘超智江琼
- 关键词：黄芪总皂甙神经干细胞分化WNT/Β-CATENIN信号通路
- 神经干细胞、丙戊酸联合应用对成鼠脊髓损伤的修复作用被引量：4
- 2009年
- 目的观察神经干细胞(NSCs)和丙戊酸(VPA)联合应用对成年大鼠脊髓损伤后的修复作用。方法SD大鼠随机分为单纯损伤组、NSCs移植组和NSCs+VPA治疗组。采用半切脊髓损伤模型,损伤后进行病理染色和神经诱发电位检测。结果NSCs+VPA治疗组损伤处空洞闭合情况优于其余两组,移植物和宿主脊髓建立的纤维联系较其余两组多,排列有序。NSCs+VPA治疗组诱发电位各项指标匀优于其余两组,8周时最显著,其中以运动诱发电位(MEP)的优化最明显。结论NSCs和VPA联合应用对成鼠脊髓损伤具有良好的修复作用。
- 王莉伍亚民刘媛南国新曾琳
- 关键词：脊髓损伤神经干细胞丙戊酸创伤修复
- VEGF、bFGF联合应用对胎鼠大脑皮质神经干细胞分化的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合应用对胎鼠大脑皮质神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法取孕14dSD大鼠,收集胎鼠大脑皮质NSCs,采用无血清培养基传代培养,取P3代细胞,分别加入200μg/LVEGF和(或)20μg/LbFGF进行诱导分化,并设对照组(不加VEGF和bFGF),7d后采用免疫细胞化学方法检测巢蛋白(Nestin)、β微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果从胎鼠大脑皮质中分离的细胞在体外悬浮生长,形成致密的球形细胞团,传代后能形成新的细胞球,免疫细胞化学染色显示细胞球nestin表达阳性。诱导分化后的细胞部分表达β-tubulin-Ⅲ,部分表达GFAP。与对照组比较,VEGF和(或)bFGF均可使NSCs向神经元方向分化的比例增加,其中VEGF+bFGF联合作用后NSCs的β-tubulin-Ⅲ阳性率(80.3%)最高,GFAP阳性率(18.6%)最低。bFGF作用后NSCs的β-tubulin-Ⅲ阳性率(60.4%)和GFAP阳性率(38.5%)与VEGF作用后(分别为60.3%、38.7%)比较无统计学差异(P>0.05)。结论VEGF和bFGF均可促进NSCs向神经元分化,且二者具有协同效应。
- 李政王江龙在云王莉曾琳伍亚民
- 关键词：细胞分化血管内皮生长因子类成纤维细胞生长因子-2
- 沉默ski基因对大鼠星形胶质细胞迁移的影响被引量：6
- 2017年
- 目的研究ski基因在大鼠星形胶质细胞迁移过程中的作用。方法分离大鼠脑皮质星形胶质细胞,体外培养。合成ski基因和阴性对照小干扰片段。设置ski-siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组。采用脂质体法将特异性针对ski基因的siRNA和阴性对照siRNA转入大鼠星形胶质细胞。采用Western blotting检测各组ski蛋白的表达水平;采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测ski-siRNA转染后星形胶质细胞迁移能力的变化。结果与空白对照组和阴性对照组比较,ski-siRNA转染组细胞内ski蛋白的相对表达水平显著降低(F=132.957,P<0.001)。Transwell细胞迁移实验发现,ski-siRNA转染组每孔迁移细胞数少于空白对照组和阴性对照组(F>47.197,P<0.05)。细胞划痕实验显示,转染组细胞1~5 d的划痕愈合率均明显低于对照组(F>69.187,P<0.01)。结论沉默ski基因能显著抑制星形胶质细胞的迁移能力,ski可能参与星形胶质细胞的转移过程,进而调控胶质瘢痕的形成。
- 赵鑫王兴文寇江力李忠浩郭永强伍亚民张海鸿
- 关键词：SKI星形胶质细胞
- 大鼠脊髓损伤后ski相关蛋白表达的时空变化规律及作用被引量：2
- 2017年
- 目的探究大鼠脊髓损伤后ski相关蛋白(SKIP)的表达及其变化规律。方法 60只成年雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=30)和打击组(n=30),每组分为1 d、3 d、5 d、7 d、14 d五个时间点,各6只。打击组用Allen法制作T10打击损伤模型,假手术组只咬开椎板。采用BBB评分评价后肢运动功能;尼氏染色观察损伤后脊髓神经元的病理变化;免疫荧光染色观察损伤脊髓SKIP的表达情况。结果打击组各时间点BBB评分均显著低于假手术组(t>48.267,P<0.001)。与假手术组相比,打击组5 d脊髓神经元胞浆中尼氏小体开始崩解、凝聚,分布不规则,神经元变性坏死,14 d时损伤加重。免疫荧光染色显示,SKIP主要在脊髓灰质中表达,白质中极少表达;损伤后SKIP表达逐渐上升,5 d时达到高峰(t=-17.035,P<0.001),14 d时明显降低(t=3.853,P<0.05)。结论 SKIP可能是一种作用于神经元并影响其凋亡的新的信号分子。
- 朱彦东周开升郭永强江龙郑利强汪静李森龙在云伍亚民张海鸿
- 关键词：脊髓损伤神经元
- APS通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖被引量：11
- 2016年
- 目的观察APS是否通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖。方法将神经干细胞,随机分为对照组、APS(5%)组、APS(5%)+LY294002组和LY294002组,用间接免疫荧光法检测Nestin和Brdu;CCK-8检测细胞增殖;Elisa检测VEGF、FLK-1含量;Western blot法检测FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达。结果 APS可以提高LY294002干预后神经干细胞增殖(P<0.05),提高VEGF、FLK-1含量(P<0.05),提高FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达(P<0.05)。结论 APS可能通过促进Akt磷酸化,活化PI3K/AKT信号通路,调节PI3K/AKT信号通路下游靶基因,促进神经干细胞增殖。
- 郑利强江琼伍亚民石永江查倩
- 关键词：FLK-1PI3KP-AKT增殖
- 大鼠脊髓损伤后结肠功能变化与Cajal间质细胞的关系
- 2016年
- 目的探讨大鼠脊髓损伤后结肠功能的改变与Cajal间质细胞（ICC）变化的关系，进一步分析脊髓损伤后肠功能障碍的形成机制。方法采用改良Allen装置以10g×25cm强度打击大鼠T10硬膜囊，建立脊髓损伤模型。选择100只成年sD雌性大鼠按随机数字表法分为正常组（20只）、假手术组（20只）和损伤组（60只）。各组于伤后1，2，4周取近端结肠组织，行HE染色观察形态学改变；记录各组近端结肠的生物电改变；免疫荧光双标染色检测各组结肠肌层ICC阳性细胞数和神经元吸光度（A）值的变化；Westernblot检测伤后1，2，4周时各组结肠组织ICC特异蛋白c—kit的表达变化。结果HE染色可见正常组和假手术组近端结肠绒毛上皮细胞排列整齐，损伤组绒毛上皮细胞倒伏、脱落，黏膜层及肌层厚度增加。正常组和假手术组生物电活动较规律，损伤组近端结肠生物电紊乱，振幅变异较大，且波形较不稳定。免疫荧光染色显示损伤组近端结肠肌内ICC阳性细胞数1周为57．384-4．69，2周为32．26±3．62，4周为25．07±3．05，均明显少于正常组和假手术组（P〈0．05）。2周时损伤组结肠神经元A值为71．46±4．69，均小于正常组的114．30±24．44和假手术组的108．11±26．46（P〈0．05）。Westernbla显示损伤组C—kit蛋白表达1周为0．7454-0．017，2周为0．492±0．480，4周为0．409±0．032，较正常组和假手术组明显减少（P〈0．05）。结论大鼠脊髓损伤后结肠功能明显改变，可能与结肠肌内ICC数量减少和C—kit的表达降低有关。
- 洪有建江龙陈旺李陈成李森刘媛伍亚民黄显凯
- 关键词：CAJAL间质细胞脊髓损伤
- IGF-1对受损血管内皮细胞存活和增殖的影响及其机制被引量：7
- 2011年
- 目的观察胰岛素样生长因子(IGF-1)对受损血管内皮细胞(VEC)增殖的影响。方法利用不同浓度(10、40、80、160 ng/ml)的IGF-1作用于血管内皮细胞48 h后,通过MTT法检测细胞的生长情况;采用划痕实验观察IGF-1对受损内皮细胞增殖的影响,并用PI染色观察细胞的情况,ELISA法测定VEGF含量。结果 10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml的IGF-1对血管内皮细胞的增殖都有不同程度的促进作用,IGF-1浓度为40 ng/ml、80 ng/ml的实验组与未加入IGF-1的对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),160 ng/ml的IGF-1对细胞增殖作用下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。取40 ng/ml IGF-1作用于受损血管内皮细胞48 h后,细胞增殖速度较对照组明显加快,PI染色显示实验组死亡细胞明显减少,实验组培养液上清VEGF含量较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IGF-1对受损血管内皮细胞的增殖有促进作用,同时可减少其细胞凋亡,促进受损内皮细胞的修复,其机制可能与IGF-1促进细胞分泌VEGF有关。
- 陈瑶伍亚民伍亚民龙在云刘媛王莉曾琳王继红
- 关键词：IGF-1内皮细胞存活增殖
- Ski在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化被引量：4
- 2016年
- 目的探究ski在大鼠正常及损伤后脊髓中的表达及随时间变化的规律。方法 60只成年雌性Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组(n=30)和损伤组(n=30),各组设1周、2周、4周、8周、12周亚组,每个亚组6只大鼠。用Allen法制备T10打击损伤模型。损伤后1 d、3 d、1周、2周、4周、8周、12周行BBB后肢功能评分;术后1周、2周、4周、8周、12周,各组取3只大鼠行HE染色,观察损伤后脊髓病理变化及空洞形成;另3只大鼠行ski免疫荧光染色及半定量分析。结果损伤组各时间点BBB评分均低于假手术组(P<0.05)。损伤后1周、2周,脊髓主要以坏死为主;4周时空洞完全形成,空洞周围有致密瘢痕组织;8周、12周空洞及瘢痕无明显变化,但损伤中心及附近脊髓明显变细。ski在正常脊髓中表达较低,损伤后ski表达逐渐增高,8周时达到高峰,12周时有所降低;ski在正常及损伤后12周脊髓中主要分布于白质;损伤后2周、4周和8周时灰质中出现明确ski表达。在损伤中心,ski在空洞周围密集表达。结论 ski在脊髓损伤后表达。它可能作用于星形胶质细胞,并调控其活化、增生以及胶质瘢痕形成。
- 周开升朱彦东赵鑫郭永强寇江力汪静李森龙在云伍亚民张海鸿
- 关键词：脊髓损伤SKI星形胶质细胞瘢痕
- Ski在神经系统中的作用及机制的研究进展被引量：8
- 2016年
- Ski作为一种进化保守蛋白,在不同物种中广泛参与并调节多种细胞的增殖及分化过程。Ski在胚胎神经系统发育、中枢及周围神经系统病变中发挥一定作用,可能涉及转化生长因子-β及其超家族成员之一骨形态形成蛋白信号通路。
- 周开升朱彦东张海鸿伍亚民
- 关键词：SKI神经系统
