国家科技重大专项(2009ZX08005-027B)
- 作品数：13 被引量：42H指数：6
- 相关作者：李鸿彬王斐孙辉张萍钱雯婕更多>>
- 相关机构：石河子大学中国热带农业科学院更多>>
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- 棉花GhAO3基因的克隆、功能序列分析及原核表达
- 2013年
- 通过RT-PCR方法从处于快速伸长发育时期(开花后15 d)的棉花纤维组织中克隆得到棉花抗坏血酸氧化酶3(Ascorbate oxidase 3,GhAO3)基因的全长开放读码框,该基因全长读码框为1 758 bp,编码包含585个氨基酸的蛋白质。通过序列功能分析和同源序列比对,GhAO3蛋白具有较高的保守性,包括3个多铜氧化酶结构域以及跨膜信号序列,进化树比对结果显示GhAO3与大豆GmAO的亲缘关系较近。将GhAO3基因与原核表达载体pET32a相连构建重组载体pET32a-GhAO3,把重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组菌,经SDS-PAGE电泳分析,获得分子量约为64 kD的重组GhAO3蛋白。
- 冉茂飞贺怡钱雯婕王斐李鸿彬
- 关键词：基因克隆原核表达
- 过量表达棉花GhACO2基因增强拟南芥抗逆性研究被引量：4
- 2011年
- 乙烯在植物生长发育过程中起到非常重要的作用,ACO基因对于细胞内乙烯的合成起到关键的作用,然而乙烯在植物响应非生物胁迫方面的功能有很大的未知性。研究通过PCR方法从棉花基因组中克隆获得GhACO2基因,构建了植物过量表达载体p35S::GhACO2,通过花序侵染法转化拟南芥,用卡那霉素对转化植株进行初步筛选,进一步对阳性植株进行PCR和GUS组织化学分析检测,结果表明,在转基因拟南芥叶片中有很强的GUS活性,茎和根有微量表达;GhACO2基因已经整合到拟南芥基因组中,成功获得转基因拟南芥。经过纯合筛选后获得转基因T2代拟南芥植株,利用NaCl和PEG6000对T2代植株进行盐胁迫和干旱胁迫处理,结果显示,与野生型拟南芥相比,转GhACO2基因拟南芥对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性显著性的增强。研究结果为进一步探讨GhACO2的生物学功能和利用基因工程技术进行转基因育种质奠定了基础。
- 张萍王斐孙辉李鸿彬
- 关键词：乙烯
- 棉花乙烯合成基因促进拟南芥和烟草不定根发生的研究被引量：6
- 2011年
- 从棉花纤维cDNA中克隆获得乙烯合成基因GhACO3,构建了植物过量表达载体p35S∷GhACO3。通过花序侵染法和叶盘法分别转化拟南芥和烟草,利用卡那霉素筛选及分子检测获得转基因阳性拟南芥和烟草植株。结果表明,GhACO3基因已整合到拟南芥和烟草基因组中;经过纯合筛选后获得转基因T2代拟南芥植株;与野生型拟南芥相比,GhACO3基因对拟南芥不定根发生具有显著促进作用;与野生型烟草植株相比,转GhACO3基因烟草不定根发生得到了显著的促进。研究表明,GhACO3基因的过量表达能够促进拟南芥和烟草不定根的形成发育,为进一步探讨GhACO3的生物学功能和进行转基因育种奠定了基础。
- 张萍王斐徐登献孙辉李鸿彬
- 关键词：不定根发生拟南芥烟草
- 棉花GhGAI3a DELLA功能域缺失过表达载体的构建及其功能初步分析被引量：6
- 2012年
- 本研究对棉花GhGAI3aDELLA功能域缺失片段的克隆及对其功能进行了初步分析。本文以质粒p121GhGAI3aDNA为模板,通过PCR方法获得基因GhGAI3aN端赤霉素响应关键区域DELLA缺失的片段Gh-gai3a,构建出过量表达载体pBP35S:gai3a。利用农杆菌介导滴花法转化拟南芥获得T1代转基因植株。DNA检测结果显示,获得了24个转基因株系,RT-PCR表明了该基因在部分株系中已有表达。初步的表型观察发现该DELLA区缺失基因严重影响花器官、侧枝的发育,抑制植物的生长。
- 李艳温玮彭丽军崔百明张文婷郑银英
- 关键词：赤霉素DELLA蛋白
- 棉蚜V-ATPase-A基因RNAi载体的构建及其在转基因拟南芥的基因表达被引量：2
- 2013年
- V-ATPase-A具有催化ATP水解的活性位点的功能,被确认为看家基因。通过构建蚜虫V-ATPase-A干扰载体,运用蘸花法转入拟南芥中,筛选出纯合子后进行转录水平的分析,再对取食相应转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因进行表达分析。结果表明,拟南芥上能成功表达dsRNA,而取食3个line的转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因表达量是取食野生型拟南芥的17%、10%、4%,基因明显受到抑制,成功的干扰了蚜虫体内V-ATPase-A基因。
- 张维高朝宝尹秀彭明崔百明
- 关键词：DSRNA棉蚜转基因
- 甘蓝型油菜下胚轴和带柄子叶再生体系研究被引量：2
- 2013年
- 以甘蓝型油菜野油19号的下胚轴和带柄子叶为外植体,研究其下胚轴和带柄子叶在不同浓度激素配比下的分化率及再生频率的变化。该品系的油菜下胚轴和带柄子叶在1.5 mg/L的2,4-D中预培养4 d后,转入分化培养基中,其愈伤组织形成早,发生快,再生频率和分化频率均较高。其中,下胚轴转入MS+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中的分化率和再生频率最高,再生频率达到86.67%;带柄子叶外植体的再生频率要比下胚轴的再生频率低,在MS+4 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA的分化培养基中芽的再生频率为46.67%。本研究初步建立了甘蓝型油菜野油19号的高频率再生体系。
- 郝晓云沈海涛李鸿彬
- 关键词：甘蓝型油菜下胚轴带柄子叶
- 棉花GhACO1基因植物表达载体构建及拟南芥遗传转化被引量：6
- 2011年
- 乙烯参与植物生长发育等许多生理过程,在许多植物细胞中,ACO基因通过促进乙烯合成调控着植物器官的形成发育。研究通过PCR方法从棉花基因组中克隆得到1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶1(GhACO1)基因,并将该基因构建到植物表达载体PBI121中,其中GhACO1基因位于CaMV35S启动子和GUS报告基因之间。通过花滴法将GhACO1基因转化拟南芥,利用卡那霉素对转化植株进行初步筛选,对卡那霉素阳性植株进行进一步的PCR检测和GUS组织化学分析。结果表明:GhACO1基因已经整合到拟南芥基因组中;GUS组织化学分析显示,在转基因拟南芥叶、茎和根中都表现出GUS活性。研究结果为进一步探讨GhACO1的生物学功能和基因工程改良棉花纤维品质奠定了基础。
- 张萍王斐孙辉李鸿彬
- 关键词：棉花表达载体构建乙烯
- 陆地棉纤维中GhGMPase2基因克隆、序列分析及原核表达
- 2013年
- 从陆地棉纤维中克隆GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GhGMPase2)基因,并进行序列分析及原核表达。利用RT-PCR技术进行基因克隆,构建原核表达载体pET28a-GhGMPase2并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。研究结果表明,从陆地棉花纤维中克隆得到棉GhGMPase2基因,该基因的开放读码框为1 086bp,编码包含362个氨基酸的蛋白质,分子质量约为40ku。序列分析结果表明,GhGMPase2蛋白具有较高的保守性,具有典型的糖酰基转移酶转移酶A家族(GT-A)结构域和左手平行的β-的螺旋(LbetaH或LBH)域,它们分别属于糖酰基转移酶家族2(GT-2)超家族和LBH超家族。进化树分析的结果显示,棉花GhGMPase2与烟草NtGMPase在进化上亲缘关系较近。经过原核表达载体pET28a-GhGMPase2的诱导表达和SDS-PAGE分析显示,获得分子质量约为40ku的重组GhGMPase2蛋白。GMPase2基因的克隆、序列分析及原核表达为进一步研究其参与棉花纤维发育过程中的重要功能奠定基础。
- 赛富涛禄亚洲王斐钱雯婕李鸿彬
- 关键词：棉花纤维克隆原核表达
- 棉花单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆及原核表达被引量：6
- 2012年
- 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化大肠杆菌,经过测序和酶切鉴定后,成功构建重组体pET28a-GhMDAR;将重组体导入大肠杆菌BL21诱导表达,经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为52ku左右的诱导表达蛋白GhMDAR。
- 钱雯婕王斐石峰葛娟李鸿彬
- 关键词：棉花纤维原核表达
- 棉花GhDHAR2基因克隆、功能序列分析及原核表达被引量：11
- 2012年
- 通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-DHAR家族的功能结构域;进化树分析显示GhDHAR2和拟南芥AtDHAR2在进化关系上较近。将GhDHAR2基因连接到原核表达载体pET-28a中,将重组载体pET28a-GhDHAR2转入到表达菌株BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达出重组GhDHAR2蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分析显示重组蛋白大小约为28 kD,诱导表达的重组蛋白具有较高的DHAR活性。首次克隆了棉花GhDHAR2基因,通过结构域分析其可能的作用,并成功进行蛋白体外表达及酶活性分析。
- 田大鹏葛娟石峰李鸿彬
- 关键词：棉花原核表达
