国家自然科学基金(31071297)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- CP基因在果蝇中的功能研究
- 卵壳蛋白基因（Chorion protein,CP）是构建卵壳的重要基因,卵壳蛋白基因家族编码组成的卵壳蛋白占果蝇卵壳干重的95%以上。卵壳功能极为重要,它包裹在卵的表面保护卵免受外界环境的胁迫、进行必要的生存物质交换（...
- 孟帅帅
- 关键词：CP基因果蝇SDS-PAGERT-QPCR
- 文献传递
- 沙丁胺醇对果蝇的化蛹、羽化、寿命及抗氧化能力和DNA损伤的影响被引量：5
- 2014年
- 【目的】利用重要的模式生物果蝇研究沙丁胺醇的作用机制,探索瘦肉精对生物体产生的影响及其分子机制,为进一步在生产中开发出更快速、精准且高效的瘦肉精检测方法提供重要的基础。【方法】将果蝇一龄幼虫放到不同浓度的沙丁胺醇培养基上饲喂,每天记录果蝇化蛹和羽化的情况,并统计出果蝇的化蛹率和羽化率及化蛹时间和羽化时间。收集24 h内羽化的果蝇,放入不同浓度沙丁胺醇培养基和基础培养基中,每管放入雌雄果蝇各25只,每个浓度设置4个平行实验。每天记录果蝇的存活数,每3 d更换一次培养基,直至果蝇全部死亡。分别统计雌雄果蝇半数死亡天数,平均寿命和平均最高寿命。收集不同浓度沙丁胺醇培养基上的3日龄成虫,雌雄果蝇各取15只放入离心管,研磨制成组织匀浆,离心(2 500 r/min,10 min)后取上清,然后按照试剂盒的方法测定SOD和CAT活力,同时检测MDA的含量;以果蝇3日龄成虫的中肠细胞为研究对象,采用单细胞凝胶电泳技术(Single cell gel electrophoresis,SCGE)对细胞进行处理,经EB染色后,在荧光显微镜下观察果蝇细胞DNA损伤情况并拍照,结合CometscoreTM软件对图像进行分析。【结果】在沙丁胺醇的作用下,果蝇化蛹率和羽化率随处理浓度增加而降低,但是经统计分析发现差异不显著(P>0.05),对果蝇化蛹时间和羽化时间也没有显著影响(P>0.05);用沙丁胺醇饲喂果蝇之后,对3日龄成虫体内SOD、CAT活力和MDA含量进行测定表明,随处理浓度的增加使体内MDA含量显著增加(P<0.05),CAT的活力被抑制,呈现出显著降低的趋势(P<0.05),促使体内抗氧化系统产生作用SOD活力显著提高(P<0.05);正是由于机体内抗氧化系统的保护机制产生作用,使得在一定浓度下处理的果蝇寿命呈现增加的趋势。对果蝇DNA损伤检测的试验表明,经沙丁胺醇处理之后,果蝇细胞就出现损伤,在SCGE的检测下�
- 孙冰林欣大张春红
- 关键词：沙丁胺醇果蝇单细胞凝胶电泳DNA损伤
- 黑腹果蝇white基因在H_2O_2影响下卷翅形成中的作用及机理
- 2018年
- 卷翅是果蝇遗传学上最常用的标记之一,但卷翅形成的具体机制还不清楚.过去的研究发现,理化刺激影响果蝇卷翅的形成.我们最近研究发现,H_2O_2处理不仅会影响果蝇的羽化率,还会使其出现卷翅现象.本研究通过改变H_2O_2浓度、果蝇培养温度和H_2O_2处理时间,探讨影响黑腹果蝇卷翅形成的具体因素,并对其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力进行检测,探讨H_2O_2对果蝇抗氧化能力的影响.结果表明:果蝇的羽化率与H_2O_2浓度成反比.温度、H_2O_2浓度和H_2O_2处理时间的改变均会影响果蝇翅的卷曲程度和卷翅果蝇所占的比例.其中white基因突变果蝇对这3种条件反应最明显,mini-white(white基因回复突变)果蝇却可以拯救该表型,它的反应与野生型OR相似.H_2O_2对含Cy基因的果蝇卷翅的形成也有一定的影响,可以加大果蝇翅的卷曲程度.对SOD、CAT和GSH-PX活力检测发现,H_2O_2处理会使果蝇的抗氧化能力降低.实时荧光定量PCR检测发现,H_2O_2处理会导致果蝇基因表达量发生改变.黑腹果蝇卷翅形成是一个十分复杂的过程,H_2O_2可能作为某种信号分子或是间接影响某种因子参与黑腹果蝇的卷翅形成过程.该卷翅形成过程可能与Cy基因导致的果蝇卷翅过程是同一个信号途径,两者也可能是通过不同的模式进行调控的.
- 吴程丽林欣大蒋艳云孟帅帅
- 关键词：黑腹果蝇H2O2
- 镉和铅联合作用对黑腹果蝇发育及抗氧化的影响
- 2019年
- 作为主要的重金属污染物,镉(Cd^2+)和铅(Pb^2+)对生物体具有不同影响和毒作用机制,然而当它们同时存在于机体内常会表现出不同的联合效应,因此研究以上两种重金属的联合作用极其重要。本研究以模式生物黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)为研究对象,采用原子吸收、发育实验、酶学测定以及荧光定量PCR评估Cd^2+和Pb^2+以及二者联合对果蝇的影响。向果蝇分别饲喂不同剂量的Cd^2+(0.05、0.1、0.3、0.5 mmol·L^-1)和Pb^2+(0.2、0.5、1.5、2.9 mmol·L^-1)以及Cd^2++Pb^2+(0.05+0.2、0.1+0.5、0.3+1.5、0.5+2.9 mmol·L^-1),测定果蝇成虫体内Cd^2+和Pb^2+积累量,以及化蛹率、羽化率、抗氧化能力、金属硫蛋白(metallothionein,MTNs)和谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因的表达水平。结果表明,果蝇中Cd^2+和Pb^2+浓度随着培养基中重金属浓度的上升而增加,当同时加入Cd^2+和Pb^2+后,二者积累量进一步增加。单独添加Pb^2+(0.2、0.5、1.5、2.9 mmol·L^-1)或共同添加Cd^2++Pb^2+(0.1+0.5、0.3+1.5、0.5+2.9 mmol·L^-1)显著降低果蝇化蛹率和羽化率,而Cd^2++Pb^2+联合处理较单独Cd^2+/Pb^2+处理表现出更强的效果,且这种效果随着Cd^2+/Pb^2+浓度的增加而增强。Cd^2++Pb^2+处理CAT活性较单独Cd^2+/Pb^2+处理显著提高。Cd^2++Pb^2+(0.05+0.2、0.1+0.5、0.3+1.5 mmol·L^-1)处理组SOD活性较单独Cd^2+/Pb^2+处理,SOD活性无明显变化,但在Cd^2++Pb2(+0.5+2.9 mmol·L^-1)处理组中SOD活性显著上升;Cd^2++Pb^2+(0.05+0.2 mmol·L^-1)处理组MDA含量较单独Cd^2+/Pb^2+处理显著提升,但在处理组Cd^2++Pb^2+(1+0.5、0.3+1.5、0.5+2.9mmol·L^-1)中MDA含量反而较单独的Cd^2+/Pb^2+处理有所下降。荧光定量PCR结果表明,在Cd^2+/Pb^2+处理下MTNs和Gsts表达水平显著升高。本研究表明重金属联合作用会对生物体产生不同的毒性效应,而MTNs和Gsts两类基因在生物体重金属胁迫下的解毒机制中发挥着至关重要的作用。
- 王博张春红林欣大
- 关键词：镉铅黑腹果蝇金属硫蛋白谷胱甘肽S转移酶
- 沙丁胺醇对黑腹果蝇基因组稳定性、细胞凋亡和蛋白表达的影响
- 2015年
- 【目的】已有研究表明,食用了饲喂以沙丁胺醇为主要成分的瘦肉精的动物肉类后,瘦肉精成分会在人体内富集,摄入过量沙丁胺醇会对生物体造成不良影响,但是,其具体毒性作用机理目前尚不明确。作为一种模式生物,黑腹果蝇Drosophila melanogaster与哺乳动物的基因具有较高的同源性,且具有繁殖周期短、方便进行遗传操作等优势。因此,我们通过研究过量沙丁胺醇对黑腹果蝇基因组稳定性、细胞凋亡和蛋白表达的影响,来探究它对生物体毒性作用的机理。【方法】将野生型黑腹果蝇3龄幼虫用含沙丁胺醇(120μg/m L)的饲料饲喂2 h后,对幼虫翅成虫盘进行H2Av抗体免疫染色。选取rpr-lac Z转基因黑腹果蝇1龄幼虫用含沙丁胺醇(40和120μg/m L)的饲料饲喂,对幼虫翅成虫盘进行lac Z活性测定。提取沙丁胺醇处理后的野生型3龄幼虫总蛋白,采用SDS-PAGE比较对照组和实验组蛋白表达的差异,并通过质谱分析差异蛋白的氨基酸序列。【结果】沙丁胺醇处理后,经免疫荧光染色发现野生型黑腹果蝇幼虫翅成虫盘部分细胞中组蛋白H2Av的量有显著增加。随着沙丁胺醇浓度的增加,转rpr-lac Z报告基因黑腹果蝇成虫盘细胞lac Z活性增强。采用SDS-PAGE和质谱分析表明,沙丁胺醇处理后黑腹果蝇肌动蛋白(Actin-87E)和异柠檬酸脱氢酶表达量上升。【结论】沙丁胺醇处理会引起黑腹果蝇细胞核DNA损伤,对基因稳定性有显著影响,并且会促进细胞凋亡和蛋白表达的改变。沙丁胺醇可能通过促进肌肉收缩和加速生物体能量代谢这两方面来减少脂肪积蓄。
- 姚云林欣大王博
- 关键词：黑腹果蝇沙丁胺醇基因组细胞凋亡蛋白表达
- 单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的最新研究进展被引量：5
- 2011年
- DNA损伤检测能够检测农药、辐射等引起的DNA损伤。随着近年来DNA损伤检测需求的迅速增加,发展快速、高通量、直观的DNA损伤检测技术,对农业研究、环境科学、毒理学和生物学研究都有重要意义。单细胞凝胶电泳是一种能够直观、准确的反映DNA损伤的检测方法,为了提高该方法的检测效率和准确性,研究者不断对其进行改进。近年来,随着新材料及新技术的应用,检测的通量和准确性得到了显著提高。本文结合最近报道的微室阵列法在单细胞凝胶电泳中的应用,对常规和最新的单细胞凝胶电泳的特点加以归纳综合,并讨论了其发展前景。
- 张春红林欣大
- 关键词：DNA损伤单细胞凝胶电泳
- 纳米银对果蝇化蛹、羽化、寿命及细胞凋亡和蛋白表达的影响被引量：1
- 2019年
- 纳米银因具有强有效的抗菌作用而被广泛应用于医药领域,然而它存在潜在的生物毒性.本研究选取经典的模式生物黑腹果蝇,探究纳米银对生物体的毒性作用机理.测定不同浓度纳米银处理下的Oregon R、w1118、MTF突变体等品系的化蛹率、羽化时间、羽化率及寿命;用rpr-lacZ品系的lacZ活性测定不同纳米银浓度处理下翅成虫盘的细胞凋亡情况;通过SDS-PAGE研究不同浓度纳米银浓度处理下MTF突变体中肠蛋白的表达差异,并利用质谱分析差异蛋白的氨基酸序列.结果显示:纳米银处理浓度升高至200μg·mL^-1及以上时,MTF突变体化蛹率和羽化率显著降低;纳米银处理浓度升高至800μg·mL^-1时,Oregon R和w1118化蛹率和羽化率显著降低,而化蛹时间和羽化时间与纳米银处理浓度无显著关系.不同浓度纳米银处理对Oregon R和w1118的寿命无影响,而200μg·mL^-1纳米银显著降低MTF突变体平均寿命.随纳米银处理浓度升高,细胞凋亡也逐渐增多.SDS-PAGE及质谱分析表明,随纳米银浓度上升,质子泵ATP激酶、热激蛋白、糖代谢相关酶系等蛋白的表达量上升.本研究表明,高浓度的纳米银会促进细胞凋亡致使部分蛋白表达量发生改变,从而降低果蝇存活率,为后续进一步了解其毒性作用机理提供理论依据.
- 孟帅帅王博林欣大
- 关键词：纳米银果蝇细胞凋亡蛋白表达
