中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2010JB01)
- 作品数：11 被引量：14H指数：2
- 相关作者：童光志于海周艳君马继红杨馥如更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国际科技合作与交流专项项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 中国大陆猪流感病毒流行特征及未来值得关注的几个问题被引量：3
- 2012年
- 控制猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行具有重要的兽医学和公共卫生学意义。中国被认为是国际流感病毒的流行中心,对流感病毒的流行生态有着重要影响。本文将对中国大陆SIV流行特征做一归纳,并简要分析未来值得关注的几个问题。
- 王斌童光志
- 关键词：猪流感病毒
- 弓形虫转基因学研究进展被引量：1
- 2011年
- 转基因技术在弓形虫的运用加速了对弓形虫功能基因组学的研究。本文对转基因弓形虫载体的构建、转基因方法和转基因弓形虫技术在弓形虫研究中的应用进展加以综述。
- 张彦雷张厚双周金林
- 关键词：刚地弓形虫电转化
- 表达期特异性双荧光蛋白的转基因弓形虫的构建
- 弓形虫速殖子向缓殖子转化的过程中会伴随着期特异性基因的表达,利用速殖子期特异性表达的SAG1基因启动子启动绿色荧光蛋白(EGFP)基因,利用缓殖子期特异性表达的BAG1基因启动子启动红色荧光蛋白(RFP)基因,构建期特异...
- 张彦雷张厚双蔺智兵周勇志曹杰周金林
- 关键词：弓形虫
- 文献传递
- 细胞渗透肽TAT与3种弓形虫抗原的融合重组表达被引量：1
- 2010年
- 为了探索新型弓形虫疫苗的传递系统,本试验分别构建了细胞渗透肽反式转录激活因子(TAT)与3种弓形虫抗原和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的重组质粒,即pET28a-TAT-EGFP,pET28a-TAT-SAG1,pET28a-TAT-GRA4和pET28a-TAT-AMA1质粒。重组质粒被转化到大肠杆菌中并通过IPTG诱导,成功进行了融合表达,表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化,然后进行SDS-PAGE分析。结果得到31 ku的TAT-EGFP融合蛋白、34 ku的TAT-SAG1融合蛋白、38 ku的TAT-GRA4融合蛋白和62 ku的TAT-AMA1融合蛋白,经过Western blotting分析,感染弓形虫的小鼠血清可特异性地识别融合TAT的SAG1、GRA4蛋白和微弱地识别TAT-AMA1蛋白。
- 王娜张厚双张厚双周勇志曹杰张守发
- 关键词：TAT弓形虫抗原TOXOPLASMAGONDIISDS-PAGE分析SAG1
- H1N2亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3
- 2011年
- 利用RT-PCR技术扩增猪流感病毒A/swine/Shanghai/1/07(H1N2)的8个基因片段,分别克隆至双向转录表达载体PBD上,构建出8个能在哺乳细胞中复制和表达的质粒。将8个质粒共转染293T细胞,收取转染48 h时的细胞上清并接种9～11日龄SPF鸡胚,成功拯救出有血凝活性的病毒。经序列测定,确定拯救病毒的8个基因片段均来自猪流感病毒A/swine/Shanghai/1/07(H1N2)基因组。H1N2亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;同时,为H1N2亚型猪流感新型疫苗的研制开辟了新的途径。
- 黄梦于海周艳君李泽君马继红杨馥如童光志
- 关键词：猪流感反向遗传操作技术
- 表达期特异性双荧光蛋白的转基因弓形虫的构建
- 2011年
- 目的构建速殖子期特异表达绿色荧光和缓殖子期特异表达红色荧光的转基因弓形虫。方法利用速殖子期特异性表达的SAG1基因启动子启动绿色荧光蛋白(EGFP)基因,利用缓殖子期特异性表达的BAG1基因启动子启动红色荧光蛋白(RFP)基因,构建期特异性表达双荧光的质粒,通过电转化将质粒转化进弓形虫体内进行表达。结果经过息疟定抗性筛选得到阳性重组子,经荧光观察观察到了在速殖子时期表达的绿色荧光虫体和经缓殖子诱导后表达红色荧光的缓殖子虫体;通过PCR检测也检测到了EGFP和RFP基因。结论本试验成功构建表达期特异性双荧光蛋白的转基因弓形虫。
- 张彦雷张厚双蔺智兵周勇志曹杰周金林
- 关键词：弓形虫
- 密码子优化的甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护效力研究
- 2012年
- 为了提高甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗的免疫原性,本研究将流感病毒rPan09（HA和NA来自A/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒）的HA基因通过人工合成的方法将其密码子优化为哺乳动物体内偏嗜性密码子opti-HA,同未优化的rPan09的HA基因分别与真核表达载体pCAGGS连接构成重组质粒pCA-optiHA和pCA-HA转染293T细胞,48 h后采用间接免疫荧光的方法检测HA基因的体外表达情况,结果显示重组质粒pCA-optiHA的蛋白表达量明显高于pCA-HA。为评价这两种重组质粒的免疫及保护效力,选取6~8周龄雌性BALB/c小鼠,将质粒pCA-HA、pCA-optiHA以100μg/只的剂量,进行后腿肌肉多点注射,同时设立空载体pCAGGS对照,共免疫3次,每次间隔2周。结果表明DNA疫苗pCA-optiHA可显著提高小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。三免2周后用107.45EID50的rPan09采用滴鼻方式进行攻毒,用Real-time PCR及制作肺组织石蜡切片检测DNA疫苗的保护效力。结果表明,pCA-optiHA免疫组的保护效力明显高于pCA-HA免疫组。本研究为进一步研究和设计有效的甲型流感病毒DNA疫苗奠定了基础。
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红温峰周艳君童光志
- 关键词：甲型H1N1流感病毒HA基因密码子优化DNA疫苗
- 表达期特异性双荧光蛋白的转基因弓形虫的构建
- 弓形虫速殖子向缓殖子转化的过程中会伴随着期特异性基因的表达,本试验目的是构建速殖子期特异表达绿色荧光和缓殖子期特异表达红色荧光的转基因弓形虫。本试验方法是利用速殖子期特异性表达的SAGl基因启动子启动绿色荧光蛋白(EGF...
- 张彦雷张厚双蔺智兵周勇志曹杰周金林
- 关键词：弓形虫
- 文献传递
- H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及其对小鼠免疫保护效力研究被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在为研制一种安全、有效并具有广泛保护作用的流感病毒通用疫苗进行初步的探索。从Gen-Bank上获得所有H1亚型经典猪源流感病毒和甲型流感病毒的HA基因序列,通过系统进化分析获得其共有序列,并对共有序列进行密码子优化(Optimized consensus,opti-CS),同时将H1亚型的A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和重组甲型流感病毒rPan09(H1N1,其HA和NA来自A/Swine/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒)的HA基因分别进行密码子优化(opti-G11,opti-r09),并将这3种片段与真核表达载体pCAGGS连接获得重组质粒pCA-opti-CS、pCA-opti-G11和pCA-opti-r09。将重组质粒瞬时转染293T细胞,检测HA基因在哺乳动物细胞中的表达情况。免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,免疫3次,每次间隔3周,同时设立空载体pCAGGS对照。三免2周后从每个质粒免疫组中选取一半小鼠每只以50μL 103.87 EID50的剂量接种A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)病毒,另一半小鼠每只以50μL 107.45 EID50的剂量接种rPan09病毒。采集血清,对HA抗体水平、HI滴度、细胞因子产生情况、肺组织病毒含量进行检测,并对肺组织病理学变化进行观察。结果显示:重组质粒中HA基因均能够在哺乳动物细胞中有效的表达。pCA-opti-CS免疫后能够诱导小鼠产生较高的HA抗体水平,较高的HI滴度,并且能够诱导机体产生较高水平的IL-4和IFN-γ。肺组织病毒含量测定以及组织病理学观察结果显示:HA共有序列密码子优化的DNA疫苗pCA-opti-CS免疫后能够有效限制病毒A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09HA在肺脏中的复制,减轻肺脏病理变化。结果提示:HA共有序列密码子优化的DNA疫苗pCA-opti-CS能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫和细胞免疫应答,并具有较好的交叉保护效力,能够保护小鼠抵抗异源流感病毒的攻击。本研究为流感通用疫苗的研究提供了有益的参考。
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红温峰周艳君童光志
- 关键词：密码子优化
- H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究被引量：2
- 2011年
- DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。为了提高猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）HA基因DNA疫苗的表达量，增强其免疫效果，本研究通过人工合成的方法将H1亚型猪流感病毒A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）的HA基因密码子优化为猪体内偏嗜性密码子optiHA，同野生型A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）的HA基因分别与真核表达载体PCAGGS连接构成重组质粒PCAGGS—optiHA和PCAGGS—HA，然后分别转染293T细胞，48h后采用间接免疫荧光的方法检测Ⅲ基因的瞬时表达蛋白情况。将质粒PCAGGS—HA、PCAGGS—optiHA以100μg／只的剂量，采用后腿肌肉多点注射的方式，免疫6-8周龄雌性BALB／c小鼠，同时设立空载体PCAGGS对照。共免疫3次，每次间隔2周，三免2周后对每组以10^3.87 EID50的A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）进行攻毒。采用ELISA、血凝抑制试验、细胞因子检测和肺组织病毒含量测定等实验评价这两种DNA疫苗的免疫效果。结果表明，HA基因密码子优化的DNA疫苗可显著提高体液免疫和细胞免疫的应答水平，攻毒后免疫组PCAGGS—optiHA的保护效力明显高于免疫组PCAGGS—HA。这一结果为进一步研究和设计有效的SIVDNA疫苗奠定了基础。
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红周艳君童光志
- 关键词：猪流感病毒HA基因密码子优化
