国家自然科学基金(30400282)
- 作品数：15 被引量：173H指数：6
- 相关作者：陈鹏李学俊陈涛李玉红张莉更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学江苏省徐州医药高等职业学校更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 苦荞种子萌发过程芦丁降解酶的代谢规律被引量：19
- 2010年
- 利用等吸收紫外分光光度法检测苦荞萌发过程中芦丁降解酶的活性,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)活性染色分析苦荞粉和萌发过程芦丁降解酶的同工酶谱,并对萌发过程黄酮质量分数的变化进行了分析。结果表明,建立的芦丁降解酶PAGE分析方法可以用于该酶的同工酶分析,苦荞种子中芦丁降解酶有4种同工酶。活性及同工酶电泳分析显示芦丁降解酶在种胚和内种皮中均有分布,胚中芦丁降解酶活性在籽粒萌发3 d内无明显变化,在萌发第4天开始迅速下降,至胚为子叶完全吸收后活性消失,而内种皮中芦丁降解酶在萌发过程中一直保持较高活性。整个萌发过程总黄酮呈上升趋势。推测芦丁降解酶在种子的萌发期并无新的合成。
- 陈鹏侯智法
- 关键词：苦荞萌发WESTERNBLOTTING
- 灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析被引量：7
- 2011年
- 以灵杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非特异性核酸酶(Non-specific nuclease,NU)基因,并克隆到pMAL-c4X载体上构建重组表达载体pMAL-c4X-NU。经测序及BLASTN发现其与灵杆菌Serratia marcescens核酸酶基因的同源性为97%。将构建的表达载体pMAL-c4X-NU转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导实现了胞内表达78 kDa的麦芽糖结合蛋白-NU融合蛋白(Maltose-binding protein-NU,MBP-NU),其最佳诱导表达条件为37℃,0.75 mmol/L IPTG诱导1.5 h。用Amylose resin纯化得到了目的蛋白。活性检测表明MBP-NU具有同时降解DNA和RNA的活性,在37℃、pH 8.0时活性最高,比活力为1.11×106 U/mg,目标蛋白的纯化效率可达10.875 mg/L。纯化的目标蛋白中无蛋白酶活性存在。0.5 mmol/L乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、1 mmol/L苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)以及150 mmol/L KCl对MBP-NU的活性几乎无影响,因此MBP-NU可作为蛋白质纯化过程中核酸的高效降解酶。
- 陈鹏杨海艳李慧婧杨龙雨李学俊
- 关键词：融合蛋白
- 小麦叶片胞间隙蛋白的提取与鉴定
- 2010年
- 采用真空渗入离心法,通过特定的装置并在不同的离心力和时间条件下分离小麦叶片胞间隙液,结合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术,以胞内高含量的蛋白-Rubisco大亚基为胞内物污染的指示,利用高效价的兔抗Rubisco抗体进行Western-blotting检测分析。结果表明,在离心力为3 000g,离心时间为10,15和20 min所提的胞间隙液量最大,且均检测到Rubisco的污染。结合胞间隙液的产率确定小麦叶片胞间隙液提取最佳的离心条件应为离心力1 000-2 500 g,时间15-20 min。
- 陈鹏张静崔会东李玉红陈妮
- 关键词：小麦SDS-PAGE
- 水分胁迫对苦荞幼苗黄酮类物质含量的影响被引量：43
- 2008年
- 以苦荞"榆6-21"为试验材料,对不同水分胁迫下的苦荞芽菜总黄酮、芦丁和槲皮素含量进行了测定和分析,结果表明在荞麦芽菜中,槲皮素的含量甚微。水分胁迫可以增加荞麦总黄酮和芦丁含量。复水以后,水分胁迫处理的幼苗总黄酮和芦丁含量仍高于对照。荞麦幼苗的黄酮和芦丁含量同样受发育的调节。
- 蔡娜淡荣陈鹏
- 关键词：苦荞水分胁迫总黄酮芦丁槲皮素
- 霜霉菌或水分胁迫诱导的黄瓜叶片胞间隙27kD蛋白为几丁质酶被引量：4
- 2007年
- 蛋白含量测定和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,水分胁迫或霜霉菌接种处理均使黄瓜(Cucumis sativus L.)叶片胞间隙总蛋白含量升高,27kD蛋白积累。通过基体辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析纯化的27 kD蛋白,将所得的PMF(肽指纹图谱)在NCBInr蛋白质数据库中比对,发现水分胁迫和霜霉菌接种所诱导的27kD蛋白是同一种蛋白,均为一种酸性的几丁质酶。其酶活性测定结果表明,水分胁迫或霜霉菌接种处理的叶片胞间隙液几丁质酶活性均高于对照。
- 陈鹏李玉红程智慧陈涛
- 关键词：黄瓜霜霉菌水分胁迫几丁质酶
- 苦荞耐受和累积铅的分子机制
- 铅(Pb)是最具毒性的重金属持久性污染物之一。铅污染已成为世界范围内广泛关注的环境问题。土壤铅污染会严重影响植物(作物)种子的萌发、生长发育及结实等过程，进入食物链会严重损伤人的神经、免疫及生殖系统，且具有累积性。土壤重...
- 王磊
- 关键词：苦荞铅胁迫转录组
- 苦荞籽粒蛋白质亚基的分离及其营养评价被引量：5
- 2011年
- 目的从氨基酸均衡的苦荞籽粒中分离球蛋白与清蛋白的亚基并进行营养评价,获得富含条件性必需氨基酸的均衡亚基。方法根据蛋白溶解性和分子量大小差异对苦荞籽粒清蛋白和球蛋白各亚基进行分离,对各蛋白亚基组分进行了氨基酸组分分析并采用氨基酸比值系数法(SRCAA)评价其营养价值。结果清蛋白中39.6 ku、40.6 ku亚基和球蛋白的36.6 ku亚基与FAO/WHO评分模式接近,SRC分值分别达到了66.04、71.84、66.0,其半必需氨基酸(精氨酸Arg+组氨酸His)含量分别为122.8,155.2,109.2 mg/g。结论清蛋白中39.6 ku、40.6 ku亚基和球蛋白的36.6 ku亚基具有较高的营养价值,对改良小麦等其它作物蛋白质营养具有重要的参考价值。
- 陈鹏刘洋张曼高吉霞
- 关键词：苦荞蛋白亚基氨基酸营养评价
- 苦荞类过敏原的原核表达及多克隆抗体制备被引量：5
- 2011年
- 以苦荞种子发育期全长cDNA文库中获得的与甜荞16 kD过敏原同源的基因BALP(Buckwheat Allergen-like protein,BALP;GenBank登录号GO496294)为基础,构建了原核表达载体pET47b-BALP,实现了在大肠杆菌Rosetta gami2(DE3)中的高效表达,并对诱导表达的时间和IPTG的浓度进行了优化。利用钴离子螯合层析纯化了重组蛋白并制备了高效价的抗BALP多克隆抗体。结果表明,克隆的该苦荞类过敏原与已报道的甜荞16 kD过敏原在氨基酸序列上具有83%的相似性,该苦荞类过敏原以包涵体的形式表达,最佳诱导时间为6 h,IPTG浓度为0.4 mmol/L。Western blotting显示天然的BALP仅存在于苦荞种子的清蛋白中。原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步探讨BALP在苦荞麦中的功能以及研究BALP结构与功能的关系奠定了基础。
- 李学俊郭彦飞闫倩陈鹏
- 关键词：苦荞原核表达多克隆抗体
- 大麦纤维素合成酶截短体的重组表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2011年
- 对大麦纤维素合成酶(Hordeum vulgare CesA,Hv-CesA)的蛋白质序列进行疏水性分析和跨膜区预测,获得截短的亲水性非跨膜区特征序列,采用PCR扩增截短序列编码区,定向克隆入N端带有His标签的pET-28a(+)表达载体中,并转化大肠杆菌进行诱导表达,利用钴离子螯合层析纯化重组表达蛋白,并制备高效价的多克隆抗体。结果表明,截短的Hv-CesA基因在大肠杆菌Rosetta gami2以包涵体的形式高效表达,western blotting显示制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原。
- 李学俊李新宇李迟园陈鹏
- 关键词：大麦纤维素合成酶原核表达多克隆抗体
- 传统荞麦制品保健功能特性研究被引量：29
- 2009年
- 利用高效液相色谱法(HPLC)和比色法对苦、甜荞麦粉及其加工制品甲醇提取物的芦丁含量和抗氧化性进行了分析测试,结果表明:苦荞粉和甜荞粉中芦丁含量分别达到5 250.4、1 995.3 mg/kg,荞麦馒头、荞麦饣合饣各、荞麦烙饼、荞麦锅巴等制品中的芦丁含量与荞麦粉相比,均有大幅度降低。荞麦制品的抗氧化性结果表明:苦荞粉及其制品甲醇提取物对二苯代苦味酰自由基(DPPH)的清除率高于甜荞粉及其制品甲醇提取物的清除率,荞麦粉对DPPH游离基的清除率远高于小麦粉。不同荞麦产品对DPPH游离基的清除率依次为荞麦饣合饣各(煮制品)>荞麦馒头(蒸制品)>荞麦烙饼(烙制品)>荞麦锅巴(油炸食品),荞麦锅巴(油炸食品)的活性成分损失最多。荞麦产品的总抗氧化能力和DPPH游离基的清除能力比相应的原料都有所下降。加热使荞麦制品的功能成分都有降低,降低程度依次为油炸>烙>蒸>煮。苦荞麦粉的发酵制品——苦荞醋清除DPPH游离基能力和总抗氧化能力均高于其他荞麦制品。
- 张莉李志西
- 关键词：荞麦抗氧化功能特性
