本文通过检测化合物对登革Ⅱ型重组病毒(DENV-ⅡLuc+)表达海肾荧光素酶活性的影响,进行化合物筛选,发现阿兹夫定(azvudine,FNC)、盐酸阿兹夫定(hydrochloride salt of azvudine,FNC-HCl)和三磷酸酯阿兹夫定(triphosphate azvudine,FNC-TP)能够抑制DENV-ⅡLuc+的复制,并研究其体外抗登革病毒(dengue virus,DENV)活性。首先通过噬斑法检测FNC、FNC-HCl和FNC-TP对DENV的抑制活性;并通过蛋白印迹实验检测3种化合物对DENV-Ⅱ囊膜蛋白E(envelope protein E)表达的影响,最后通过实时定量PCR检测化合物对DENV-Ⅱ病毒RNA的抑制作用。结果显示,FNC、FNC-HCl和FNC-TP抑制DENV复制的半数有效浓度(EC50)在0.54~25.42μmol·L^(-1)之间,阳性药物利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC50为40.78±1.02μmol·L^(-1)。蛋白印迹实验及定量结果显示,3种化合物均能抑制DENV-Ⅱ囊膜蛋白E的表达,并且显著地抑制DENV-Ⅱ病毒RNA的复制。通过MTT法检测发现FNC、FNC-HCl和FNC-TP的细胞毒性很小,半数细胞毒性浓度(CC50)均大于3 000.00μmol·L^(-1)。本研究表明FNC、FNC-HCl和FNC-TP在细胞水平、蛋白水平及RNA水平均能抑制DENV的复制,且抑制作用优于利巴韦林,有望成为抗登革病毒的候选药物。
