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南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所: 作品数：35 被引量：64H指数：4; 相关作者：陈中标徐翠香姜茵石小军法萍萍更多>>; 相关机构：中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室中山大学肿瘤防治中心温州医学院检验医学院浙江省医学遗传学重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>

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CD80-链亲和素融合蛋白锚定的鼻咽癌CNE2细胞增强T细胞的杀伤活性被引量：1: 2010年; 目的:制备CD80-链亲和素(streptavidin,SA)融合蛋白,研究CD80-SA锚定的鼻咽癌CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。方法:pET21a-CD80-SA-6His质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导CD80-SA融合蛋白的表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后透析复性。流式细胞仪检测CD80-SA融合蛋白在CNE2细胞表面的锚定效率;LDH释放法检测CD80-SA锚定的CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。结果:成功制备和纯化了CD80-SA融合蛋白。CNE2细胞表面低表达CD80分子[(2.2±0.18)%]。CD80-SA融合蛋白可有效地锚定于生物素化的CEN2细胞表面,锚定效率可达73%。CD80-SA锚定的CNE2细胞可有效激活T细胞的杀伤作用,效靶比在1∶1、1∶20、1∶40时T细胞的杀伤率分别约为(37±3.12)%、(51±2.63)%和(58±2.47)%,均显著高于对照CNE2细胞激活的T细胞(均P<0.01)。结论:CD80-SA融合蛋白可有效锚定于生物素化的CNE2细胞表面,从而增强T细胞对CNE2细胞的杀伤活性。; 李金龙常红胡志明高基民; 关键词：CD80 链亲和素鼻咽癌细胞 T细胞杀伤

SA/TNFα双功能融合蛋白的克隆、表达及活性研究: 2010年; 目的:制备链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白,并对其活性进行研究。方法:构建原核表达质粒pET24a-SA-TNFα和pET21a-TNFα-SA;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲合层析纯化后进行透析复性;流式细胞仪检测融合蛋白对生物素化MB49细胞的锚定活性,L929细胞杀伤实验检测融合蛋白的TNFα活性。结果:成功制备了两种链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白SA-TNFα和TNFα-SA;其表达量分别约占总蛋白的30%和23%,纯化效率均达90%以上;两种融合蛋白均能有效地锚定于生物素化的MB49细胞表面,其锚定效率分别为95%和92%;L929细胞杀伤实验显示SA-TNFα具备TNFα活性,但TNFα-SA不具备TNFα活性。结论:成功制备了具备双功能活性的链亲合素标记的TNFα融合蛋白,TNFα在该融合蛋白中的位置与其活性有重要的关系。; 李金龙徐翠香胡志明高基民; 关键词：人肿瘤坏死因子Α 链亲和素融合蛋白

1型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染人脐静脉内皮细胞的体外研究被引量：2: 2008年; 目的评价1型重组腺相关病毒(rAAV1)作为新生血管性角膜病变基因治疗载体的可行性。方法rAAV1-EGFP按转染倍数(MOI)5×103,5×104,5×105转染ECV304细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察ECV304细胞中GFP阳性表达情况和细胞生长形态特点等,流式细胞仪检测rAAV1-EGFP对EVE304细胞的转染效率。MTT法检测rAAV1-EGFP对EVC304细胞增殖的影响。结果转染后2d,MOI=5×105组细胞中的GFP开始表达;表达强度随MOI值的增高而增强,同时GFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强,转染后第7天达到高峰,此时流式细胞仪检测rAAV1-EGFP对ECV304细胞的转染率分别为45.90%(MOI=5×103),58.56%(MOI=5×104),68.31%(MOI=5×105)。AAV1-EGFP转染ECV304细胞后,细胞生长及形态正常,MTT法显示转染后72、96h各转染组与未转染组之间A值无显著性差异。结论rAAV1-EGFP对ECV304细胞转染稳定、有效,重组腺相关病毒对细胞增殖无明显抑制,重组腺相关病毒可作为基因治疗角膜新生血管性病变的载体。; 汤明芳陆晓和高基民钟彦彦罗微周明乾; 关键词：腺相关病毒绿色荧光蛋白基因脐静脉内皮细胞

人Notch2受体胞内区基因N2ICD的原核表达、纯化和鉴定: 2016年; [目的]构建含Notch2胞内区基因N2ICD的原核重组质粒,并在E.coli中表达。[方法]根据Gen Bank上N2ICD基因序列设计引物,用PCR从真核重组质粒p CMV-Tag4/N2ICD中扩增目的基因,克隆至携带GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中并转化E.coli BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体经反复冻融、溶菌酶破菌、超声破碎后,通过SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达形式,表达产物经谷胱甘肽琼脂糖树脂glutathione sepharose 4B纯化并经Western Blot鉴定。[结果]PCR获取了目的基因人N2ICD,并成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1/N2ICD,目的基因在E.coli中成功表达并以部分可溶性形式表达在上清中,纯化后经Western Blot鉴定表达产物分子量在110 k Da。[结论]重组N2ICD在E.coli中成功获得可溶性表达,为研究Notch2受体在细胞信号转导中的作用奠定了基础。; 陈中标李飞李佩婷邱晓媚叶健斌胡冰心宁立军宁云山李妍; 关键词：NOTCH2 克隆原核表达纯化

胰高血糖素样多肽-1诱导吉非替尼筛选富集的胰腺癌干细胞分化: 2014年; 目的 :通过化疗药物筛选富集胰腺癌干细胞,观察胰高血糖素样多肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)诱导胰腺癌干细胞的分化。方法 :应用0.05 mmol/L吉非替尼连续培养胰腺癌Panc-1细胞2周,筛选出吉非替尼耐药的S-Panc-1(selected Panc-1)细胞,并用10 nmol/L GLP-1处理72 h(命名为G-S-Panc-1细胞)。分别应用FCM法检测Panc-1、S-Panc-1和G-S-Panc-1细胞中CD133+细胞所占的比例,软琼脂克隆形成实验检测Panc-1和S-Panc-1细胞的克隆形成能力,裸鼠移植瘤实验检测S-Panc-1和G-S-Panc-1细胞的体内成瘤能力。结果 :S-Panc-1细胞中CD133+细胞所占比例[(55.5±1.7)%]明显高于Panc-1细胞[(1.7±0.2)%](P<0.01),G-S-Panc-1细胞中CD133+细胞所占比例明显下降(P<0.01),S-Panc-1细胞的体外克隆形成率[(1.20±0.16)%]明显高于Panc-1细胞[(0.31±0.02)%](P<0.01),G-S-Panc-1细胞裸鼠体内的成瘤能力明显低于S-Panc-1细胞(P<0.01)。结论 :吉非替尼耐药的Panc-1细胞具有肿瘤干细胞特征,GLP-1对胰腺癌干细胞可能具有诱导分化的作用。; 丁雯李金龙徐岚惠宏襄; 关键词：胰腺肿瘤肿瘤干细胞细胞分化吉非替尼 GLP-1

基于Mimox工具分析幽门螺杆菌Lpp20蛋白模拟表位: 2013年; 目的利用Mimox软件分析幽门螺杆菌Lpp20蛋白模拟表位的性质。方法将源于噬菌体随机肽库筛选技术获得的6个Lpp20模拟表位输入Mimox网站,参数设为默认值,进行模拟表位的比对,寻找其共同序列并分析其性质。结果从ClustalW界面比对结果看,氨基酸D、A、S、G、L在模拟表位中出现的频率较高。通过统计学的方法推导出的共同序列为-[-W][PST][LDE]H[SDE][DM]ASG-[LT][YFW][-R]-,第2位置氨基酸W(50%),第7位置氨基酸D(67%),第8位置氨基酸A(50%),第9位置氨基酸S(50%),第12位置氨基酸L(50%)的出现频率较高。通过JalView界面推导出的共同序列为-WPLHSDASG-LYR-,保守性上第6位置S(分值6)、第7位置D(分值5)、第12位置L(分值5)比较高;特异性上第6位置S(分值2.067 059)、第12位置L(分值2.529 612)、第10位置G(分值1.805 491 4)、第3位置P(分值1.761 471 6)比较高;共同性上第7位置D(66%)、第8位置A(50%)、第9位置S(50%)、第10位置G(66%)比较高。结论结合噬菌体筛选技术和生物信息学Mimox工具对抗原模拟表位进行分析并获得较全面的表位信息,为进一步确定抗原表位及研制新型表位疫苗奠定基础。; 李妍温月媚曾爽陈中标陈艳宁云山; 关键词：模拟肽幽门螺杆菌 LPP20

SA/mIL15双功能融合蛋白的制备及其生物学鉴定被引量：1: 2010年; 目的:制备链亲和素(SA)标记的鼠白细胞介素-15融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,并研究其生物学功能。方法:构建pET24a-SA-L-mIL15和pET21a-mIL15-L-SA重组表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,对所表达的蛋白分别采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和阴离子交换(DEAE)层析进行纯化,透析复性。MTT法检测融合蛋白对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析融合蛋白对生物素化的小鼠前列腺癌(RM-1)细胞表面锚定修饰效率。结果:SA-mIL15和mIL15-SA在大肠杆菌中实现了高效表达,约占细菌总蛋白的20%。制备的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即:mIL15促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性和SA介导的高效结合至表面已生物素化的RM-1细胞的功能(表面锚定修饰效率均大于95%)。其中,SA-mIL15双功能融合蛋白促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞增殖活性为1×106IU/mg,mIL15-SA活性为2×105IU/mg。结论:SA/mIL15双功能融合蛋白具有双重活性,为mIL15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制奠定了基础。; 陈艳丽许晓玲唐佳聂小霞宋志纯胡志明高基民; 关键词：白细胞介素15 链亲和素融合蛋白

生物技术专业《生物治疗学》教学的心得体会被引量：1: 2012年; 《生物治疗学》现已成为我校生物技术专业的一门必修的专业课程,作者结合自己在《生物治疗学》课程教学中的亲身体会,对教学时间、教材选择、教学内容、教学方式及考核方式等方面进行了深入的探讨和总结。; 李妍惠宏襄; 关键词：教学方式教学体会

人凝血因子Ⅶ重组腺病毒载体的构建及鉴定: 2015年; 目的构建表达人凝血因子Ⅶ(FⅦ)的重组腺病毒载体,利用腺病毒载体介导哺乳动物细胞表达重组人凝血因子Ⅶ(rh FⅦ)。方法利用Bam HⅠ和EcoRⅤ双酶切pc DNA 3.1-FⅦ载体得到FⅦ基因片段,补平后,插入经SalⅠ单酶切、补平并去磷酸化处理的加强型绿色荧光蛋白(GFP)表达盒的p Ad Track-CMV腺病毒穿梭载体,构建p Ad Track-CMV-FⅦ,继而进行酶切和测序鉴定;经PmeⅠ单酶切线性化后,p Ad Track-CMV-FⅦ在BJ5183感受态菌内与p Ad Easy-1腺病毒骨架发生同源重组,构建重组表达FⅦ的腺病毒质粒p Ad-FⅦ;经PacⅠ酶切后的p AdFⅦ,使用PEI试剂转染293A细胞,包装表达FⅦ的重组腺病毒Ad-FⅦ;利用Western印迹检测重组腺病毒Ad-FⅦ介导293A细胞表达FⅦ的蛋白水平;通过观察EGFP的表达来判断质粒转染及病毒感染细胞的效率。结果经酶切和测序鉴定,FⅦ克隆到p Ad Track-CMV腺病毒穿梭载体中,获得重组质粒p Ad Track-CMV-FⅦ;将其与p Ad Easy-1在细菌内发生同源重组,成功获得FⅦ重组腺病毒质粒p Ad-FⅦ;在293A细胞内包装重组腺病毒,Western印迹检测到FⅦ蛋白的表达。结论成功构建重组腺病毒Ad-FⅦ,并实现了rh FⅦ在哺乳动物细胞中的表达,为利用哺乳动物细胞表达rh FⅦ的研究奠定了基础。; 揭飞龙吕茂民王升尧颜仁和何悦李红卫章金刚; 关键词：重组腺病毒载体哺乳动物细胞蛋白表达

去甲斑蝥素干扰HL-60肿瘤细胞周期及其机制研究被引量：4: 2010年; 目的明确去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐明NCTD的抗肿瘤作用机制。方法体外培养HL-60细胞,NCTD作用后采用3H-TdR掺入实验检测DNA复制;流式细胞术检测细胞周期进程;Western blotting检测细胞周期调控蛋白Cdk1、Cyclin B1、Cdc 25c表达变化。结果不同浓度（16~128μmol/L）NCTD作用于HL-60细胞12 h后,DNA复制受到抑制,细胞周期出现明显的S期累积,并呈剂量依赖性趋势;同时观察到G2/M的阻滞,且调控G2/M周期进程的调节蛋白Cdk1、Cyclin B1及Cdc 25C蛋白表达下调。结论 NCTD可抑制HL-60细胞DNA复制、下调周期调控蛋白从而干扰肿瘤细胞的周期进程。; 李金龙蔡于琛胡志明高基民冼励坚; 关键词：去甲斑蝥素 DNA复制 HL-60 细胞周期

南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所

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