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玉米混合组织的EST文库的构建和部分EST序列的分析被引量：6: 2004年; 以CLONTEECH的pDNR-LIB质粒为载体,构建了干旱和盐碱共胁迫48h和相应的无胁迫正常生长条件下耐旱玉米(ZeamaysL.)YQ7-96品系的雌雄分化期(12片叶龄)的混合组织(叶、茎和花器)EST文库。该文库容量>2×105个克隆,覆盖了预计的玉米基因组5万个基因的4倍以上。随机对3168个克隆中插入的cDNA进行测序,获得有效序列2098条,其中,2002个克隆中的cDNA进行了5'端测序,96个克隆中的cDNA的进行了5'和3'两端测序。结果表明,3'端测序的96个克隆的cDNA都含有polyA尾巴;进一步对这2098条组装分析,形成168个重叠群(Contig)和1693个单拷贝EST(Singlet),代表了共计1861条独立基因(Unigene);根据GenBank中的玉米EST数据库和BLASTn分析软件进行核苷酸同源性分析,1731条(93.01%)EST的score值大于或等于100,130条(6.99%)的EST的score值小于100,说明这130条属于新的表达基因的序列,有21条可以定位在玉米的不同染色体上;BLASTx分析表明,2098条EST中,1007条(48%)有功能注释信息,1091条(52%)无功能注释信息。该文库中的EST将会对公共数据库中现存的玉米EST数据起到补充作用。; 张洁焦岳宏陆海峰李有志; 关键词：玉米干旱盐碱表达序列标签

碱性污染土壤宏基因组文库的构建以及酶基因的克隆: 极端微生物是一个巨大的潜在的优势基因资源库，未培养微生物研究是极端微生物研究的一个重要组成部分。未培养微生物在自然界土壤栖息群中占99％以上的资源。直接从极端环境土壤中抽提纯化宏基因组DNA构建文库是从分子生物学角度研究...; 蒋承建胡婷婷武波; 关键词：宏基因组文库酶基因基因克隆; 文献传递

曲霉菌降解机械润滑油的研究: 2006年; 分离出能高效降解机油的真菌并研究其使用方法。从机械润滑油污染的土中分离出2株真菌，GXUA和GXUB。形态鉴定为曲霉属（Aspergillus）菌。rDNA的ITS序列同源性分析表明，GXUA与A．tubingens，GXUB与A．fumigatus菌株SRRC43完全同源。根据均匀设计的油-矿质液中的摇床发酵结果，混合菌体对机油的降解效率高于单菌株，最佳发酵条件为25g菌丝体／L矿质液，DH：5．0，26℃。在此条件下，于10g机油／L矿质液中摇床发酵9d，其降解效率为95．90％。液-质色谱分析表明，混合菌能降解机油中700-900Dt的大分子。用两菌株的孢子和其他两种生物材料试制了实验室级的颗粒（直径1cm）生物制剂。在实验室级水平上，按500粒／m^2水面和150粒／kg土用量分别处理具有约2mm厚油膜的水（自来水和海水）和50g机油／kg土的土壤，处理后的水和土壤中残余油量符合国家有关环境污染控制标准，添加油酸钠和H2O2能够显著提高降解效率。; 马义丽冯莲周媛赖洪敏刘杨李有志; 关键词：应用微生物学曲霉属降解生物制剂

碱性土壤微生物基因的克隆和多样性分析: 本研究工作从碱性土壤样品中直接抽提和分离宏基因组DNA,首先构建了包含5562个阳性克隆的碱性土壤16S rDNA 文库,随机抽取9个克隆测序后构建的系统进化树表明了碱性土壤环境微生物种群基因的多样性。纯化土壤宏基因组D...; 蒋承建胡婷婷武波; 关键词：宏基因组文库未培养微生物碱性蛋白酶 Β-葡萄糖苷酶; 文献传递

高盐极端环境土壤基因组DNA的分离纯化方法研究及基因文库的构建被引量：7: 2006年; 以钦州市犀牛角镇晒盐池内（盐浓度〉25％）的土壤样品为研究对象，对土壤混合基因组DNA的提取和纯化方法进行了深入研究，结果表明。冻融法、十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K联合使用的提取法，能有效提高DNA得率，DNA的产量达到每克土壤样品10～15μg。交联聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、SeDhadex G-200树脂以及大量胶回收的使用，可有效纯化DNA。纯化的DNA产量可达每克土壤样品4～6μg，DNA片段大小〉30kb，将纯化的DNA用BamH Ⅰ部分酶切后构建以pLAFR3为载体的混合基因组文库，该文库包含15600个克隆，外源片段DNA平均大小为18kb。通过DNA序列测定和同源性比较，对从文库中随机挑取的10个克隆进行了序列分析，发现9个外源插入片段包含未知DNA序列。; 孙栋唐莉丽王倩倩杨冬梅蒋承建武波; 关键词：土壤 DNA提取 DNA纯化

费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii HN01)与无机硫代谢相关操纵子的初步研究: 本室先前工作以Tn5gusA5对费氏中华根瘤菌HNO1随机插入突变并筛选得一株结瘤能力下降、结瘤时间延迟的突变体GXHN100。插入位点序列基因被命名为 pmrA。经原位杂交从费氏中华根瘤菌HNO1基因组文库中钓出含有p...; 陆祖军曹勇强隆文杰武波; 关键词：根瘤菌操纵子; 文献传递

一种来自未培养微生物,编码新型L-半胱氨酸脱羧酶的基因的筛选,测序分析和鉴定: 近年来,环境体系宏基因组文库的构建为新型生物活性物质的筛选工作提供了丰富的直接的自然资源来源。本研究工作从碱性自然环境中采集土壤,直接提取纯化土壤宏基因组DNA,利用大肠杆菌作为宿主细胞构建质粒宏基因组文库,采用酶活性筛...; 蒋承建胡婷婷武波; 关键词：宏基因组文库半胱胺; 文献传递

碱性土壤微生物基因的克隆和多样性分析被引量：8: 2006年; 从碱性土壤样品中直接抽提和分离宏基因组DNA,首先构建了包含5562个阳性克隆的碱性土壤16SrDNA文库,随机抽取9个克隆测序后构建的系统进化树表明了碱性土壤环境微生物种群基因的多样性。纯化土壤宏基因组DNA后采用EcoRⅠ酶部分酶切处理,我们又构建了以pGEM-3Zf(+)为载体的DNA部分文库AL01。AL01文库包含23650个克隆,随机插入载体的外源DNA片段平均大小为3.2kb左右,DNA文库的总容量为75.68Mb。建库效率为从每克环境样品中获得6000个左右的含随机外源DNA片段插入载体的克隆。采用酶活筛选策略,我们从AL01文库中筛选到一个编号为pGXAA2011的阳性克隆携带有一个完整的碱性蛋白酶基因。蛋白酶活性检测其酶活作用最佳温度为40℃,最适作用pH值为9.5。另外,我们还克隆和表达了一个新型-葡萄糖苷酶基因unglu01,该基因和现有数据库中的-葡萄糖苷酶基因没有任何DNA或者氨基酸水平的同源性。将unglu01基因的ORF与表达载体pETBlue-2连接后导入宿主菌株Tuner(DE3)pLacI中,该重组表达克隆在含柠檬酸高铁铵和七叶苷的LA平板上表现清晰的-葡萄糖苷酶活性,SDS-PAGE电泳可以检测到29kDa大小的目的蛋白。; 胡婷婷蒋承建梁璇隆文杰武波; 关键词：宏基因组文库未培养微生物碱性蛋白酶 Β-葡萄糖苷酶

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广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室