暨南大学微生物技术研究所
- 作品数：48 被引量：49H指数：5
- 相关作者：胡熔管敏王衡馨王艳凤方明英更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程自动化与计算机技术更多>>
- 四环素核酸适配体电化学生物传感器的研制
- 四环素(tetracyclines,TCs)是一类含有骈四苯结构的广谱抗菌药物,价格低廉,可直接作为一种饲料添加剂投放到饲料中,目前被广泛的应用于养殖业、畜禽业、水生生物等领域.在欧盟,四环素类抗生素的使用量占了整个禽畜...
- 陈丹姚冬生谢春芳刘大岭
- 关键词：四环素核酸适配体电化学
- 饲用酶蛋白的理性设计及其改良技术
- 2013年
- 酶作为天然的生物催化剂,具有高催化效率和高底物选择特异性的特点,在工农业生产上有重要的应用价值。通过对酶蛋白的改造是获得优良性质酶蛋白的重要来源。针对饲用酶应用的特点,从酶蛋白理性分子设计策略及其技术方法角度综述了酶的热稳定性及pH稳定性改造,蛋白酶抗性改造和酶蛋白的多性质改造等,以期为相关实验研究提供技术参考。
- 刘小芸姚冬生
- 关键词：分子设计热稳定性糖基化
- 四环素核酸适配体电化学生物传感器的研制
- 四环素(tetracyclines,TCs)是一类含有骈四苯结构的广谱抗菌药物,价格低廉,可直接作为一种饲料添加剂投放到饲料中,目前被广泛的应用于养殖业、畜禽业、水生生物等领域。在欧盟,四环素类抗生素的使用量占了整个禽畜...
- 陈丹姚冬生谢春芳刘大岭
- 关键词：四环素核酸适配体电化学
- 文献传递
- β-激动剂核酸适配体电化学生物传感器的研制被引量：3
- 2015年
- β-激动剂是苯乙醇胺类化合物在芳香环和末端氨基部位被不同官能团取代而产生的一类化合物。β-激动剂具有营养再分配作用,当食用含有β-激动剂的食物后β-激动剂会在人体内积累引起急性或慢性中毒。因此,建立一个快速检测β-激动剂的方法对于食品安全控制是十分重要的。通过等温滴定量热技术筛选出一条对β-激动剂有高亲和力(Kd=3.34×10-5mol/L)的核酸适配体,AP-Ago。AP-Ago为22bp的单链DNA。利用该适配体(AP-Ago)作为识别分子成功构建了一个非标记型电化学适配体生物传感器,该传感器对莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、苯乙醇胺和丙卡特罗敏感。对莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、苯乙醇胺和丙卡特罗的检测限分别为0.04ng/ml、0.35pg/ml、0.53pg/ml、1.0pg/ml和1.73pg/ml。检测时间为15min。该适配体传感器具有良好的检测重现性(RSD=2.09%)。研究表明,适配体传感器可以被发展成为一种快速检测样品中一种或多种β-激动剂的方法。
- 杨敏陈丹姚冬生谢春芳刘大岭
- 关键词：电化学检测选择性
- 构建人工遗传线路增进毕赤酵母纤维素代谢功能
- ＜正＞巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）的遗传背景已经研究比较清晰,可进行蛋白翻译后的修饰、加工和折叠等优点,有良好的可操作性,已发被用于表达多种外源蛋白。因具有毒性小,发酵工艺成熟,易于工业化,培养成本低...
- 周妮陈丹谢春芳刘大岭刘忠钱垂文姚冬生
- 文献传递
- 四环素核酸适配体电化学生物传感器的研制被引量：4
- 2013年
- 农产品抗生素残留是目前动物性食品安全中的突出问题。四环素的简便、快速检测方法是食品安全控制中十分重要的技术。本研究利用等温滴定量热法筛选到的四环素核酸适配体做识别分子制作生物传感器,用电化学方法研究了该生物传感器检测四环素的电化学行为。结果:等温滴定量热法筛选出一条对四环素有高亲和力的适配体,解离平衡常数Kd=51.8μmol/L。差分脉冲伏安分析,在5.0~5.0×103μg/L浓度范围内,峰电流值的变化△Ip与四环素浓度的对数呈现良好的线性关系,相关系数R2=0.987 6,检测限为1.0μg/L,反应时间为15min。该检测限明显低于目前国家限定的四环素残留量(6.0×102μg/L),也低于目前其他报道的四环素适配体传感器的检测限。
- 陈丹姚冬生谢春芳刘大岭
- 关键词：四环素核酸适配体电化学
- 构建人工遗传线路增进毕赤酵母纤维素代谢功能
- 周妮陈丹谢春芳刘大岭刘忠钱垂文姚冬生
- 基于易错PCR的黄曲霉毒素解毒酶体外分子定向进化被引量：11
- 2011年
- 运用定向进化-易错PCR方法,提高黄曲霉毒素解毒酶的活力及稳定性,并结合辣根过氧化物酶(HRP)-隐性亮绿(RBG)快速高通量筛选系统,构建了库容约为104的突变体库。经过两轮易错PCR,最终分别获得了耐高温70℃突变酶A1773、pH 4.0稳定性的突变酶A1476,pH 4.0和pH 7.5均表现稳定性的突变酶A2863,其酶活力比野生酶分别提高了6.5倍、21倍和12.6倍。经序列分析表明,发现突变酶A1773发生了Glu127Lys和Gln613Arg突变;突变酶A2863发生了Gly73Ser、Ile307Leu、Val596Ala、Gln613Arg突变;突变酶A1476发生了Ser46Pro、Lys221Gln、Ile307Leu和Asn471Ile突变。结果为进一步了解黄曲霉毒素解毒酶的结构与功能之间的关系提供了参考。
- 张赛邢克克胡亚冬谢春芳刘大岭姚冬生
- 关键词：黄曲霉毒素解毒酶稳定性定向进化易错PCR
- 壳聚糖-单壁碳纳米管-黄曲霉毒素氧化酶生物传感器的研制及其用于杂色曲霉素的检测
- @@杂色曲霉素(Sterigmatocystin，ST)是一种致癌致畸的真菌毒素，与黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)结构相似，是AFT的合成前体。ST是国际癌症研究机构划分的2B类致癌物质，与肺癌、肝癌、胃癌密切...
- 陈俊华李世川梁月敏姚冬生刘大岭
- 关键词：壳聚糖单壁碳纳米管黄曲霉毒素氧化酶生物传感器杂色曲霉素
- 文献传递
- 假蜜环菌黄曲霉毒素氧化酶的基因克隆、表达、纯化及酶学性质分析(英文)被引量：9
- 2011年
- 【目的】黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO)来源于假蜜环菌(Armillariella tabescens)的细胞内提取物,具有转化黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的特性。为更进一步了解该酶的性质,我们克隆了AFO的基因,并进行了重组AFO蛋白的表达、纯化和酶学性质分析。【方法】本研究利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得的AFO短肽序列设计简并引物进行逆转录,再通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了AFO基因的全长cDNA序列。构建重组表达载体pPIC9-afo,在毕赤酵母中进行重组AFO(rAFO)的融合分泌表达,用Ni离子螯合层析进行rAFO的纯化,获得有活性的rAFO后,对其进行肽质量指纹(peptide mass fingerprinting,PMF)鉴定和酶学性质分析。【结果】黄曲霉毒素氧化酶(AFO)基因的开放阅读框为2088 bp,编码695个氨基酸;肽质量指纹鉴定结果显示重组AFO的肽片段序列覆盖率为63.2%。活性测定表明纯化后的重组AFO(rAFO)比活力为234 U/mg;对rAFO进行酶学性质分析表明,对于底物黄曲霉毒素B1,rAFO的Km值为3.93±0.20×10-6 mol/L;反应最适温度为30℃,最适pH为6.0;30℃放置90 min后酶活力下降50%;rAFO在pH5.5-7.0之间酶活力较稳定,相对活力维持在51%-65%之间。【结论】本文第一次成功克隆并重组表达了一种具有黄曲霉毒素B1转化功能的酶——黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO),纯化后的重组AFO(rAFO)具有较好的黄曲霉毒素B1转化活性,为进一步研究和应用奠定了基础。
- 温思霞管敏周涛曹红谢春芳刘大玲姚冬生
- 关键词：CDNA末端快速扩增毕赤酵母
