卢文亮
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 大肠杆菌植酸酶在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：7
- 2012年
- 为探讨植酸酶的结构与功能,研究了来源于大肠杆菌的植酸酶基因在酵母中的表达和纯化条件.将含有大肠杆菌植酸酶基因的毕赤酵母工程菌在不同甲醇浓度和不同诱导时间下培养,检测植酸酶的表达情况.结果表明:诱导培养基中一次性添加2.5%的甲醇,诱导96 h后,蛋白浓度达到1.36 mg mL-1,酶活力达到6 530 U mL-1;将在毕赤酵母中表达的植酸酶粗酶液经过硫酸铵盐析、Resource S柱和Superdex-75三步纯化,得到单峰纯的蛋白,比活力为137 280 Umg-1.用圆二色谱分析纯化后的蛋白在pH 5.0和8.0环境中的结构变化,结果显示pH 8.0环境使大肠杆菌植酸酶发生了变性.
- 张耀华姚明泽卢文亮梁爱华
- 关键词：毕赤酵母圆二色谱
- 芽孢杆菌植酸酶phy(ycD)基因在大肠杆菌中的异源表达与纯化被引量：4
- 2014年
- 为研究中性植酸酶的性质,将芽孢杆菌来源植酸酶基因phy(ycD)构建到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上,进行诱导表达,利用Ni-NAT和Superdex-75纯化后,对重组植酸酶r-phy(ycD)的性质进行分析.结果显示,该酶是Ca2+依赖性酶,Ca2+最适浓度为1 mmol/L,酶比活为4.7 U/mg,酶促反应的最适pH为6.5,在中性条件下稳定,最适反应温度为45℃,K m值和V max值分别为0.213 mmol/L和5.55 U/mg.Zn2+、Ni2+、Ba2+和Ag2+对酶促反应均有显著抑制作用.本研究表明,Ca2+对该类酶的活性和热稳定性起着关键性作用,因此在表达和纯化过程中需要在培养基和纯化所需的各类缓冲液中添加Ca2+.
- 王茜卢文亮姚明泽胡风云付月君梁爱华
- 关键词：中性植酸酶酶学性质
- 重组中性植酸酶phy（ycD）的表达及其性质
- 植酸是豆类、谷类和油料作物等种子中磷的主要储存形式,植酸酶能够水解植酸生成无机磷和磷酸肌醇衍生物,在动物饲料中添加植酸酶可以有效地提高植酸中磷的利用效率、降低动物排泄物的环境磷污染,并能通过去除植酸的抗营养作用来提高饲料...
- 卢文亮
- 关键词：中性植酸酶基因表达酶学性质
- 文献传递
- 大豆根部两株产植酸酶菌的分离鉴定及中性植酸酶基因的克隆被引量：2
- 2013年
- 从大豆根部土壤中筛选到两株产植酸酶的细菌菌株,对其进行形态学分析和16S rRNA鉴定,确定两个菌株为枯草芽孢杆菌,并对其植酸酶的酶学性质进行初步研究。通过PCR方法从该芽孢杆菌基因组中克隆了植酸酶基因phy(ycD)和phy(ycE)。与NCBI已报道的植酸酶序列分别通过BLASTn和BLASTp程序进行比对,确定phy(ycD)和phy(ycE)属于β-螺旋桨植酸酶家族。两个植酸酶核酸序列同源性达到98%。两个基因的开放阅读框(ORF)均为1149个核苷酸,编码382个氨基酸。N端26个氨基酸为信号肽序列,整个酶分子有5个氨基酸不同,运用SWI SS-MODEL服务器进行同源建模,使用Spdbv软件对其三维结构评估,这5个氨基酸中的4个分别处在酶分子不同二级结构部位。β-螺旋桨植酸酶基因phy(ycD)和phy(ycE)的获得,为进一步探讨中性植酸酶的结构与功能以及该类植酸酶的产业化应用提供实验数据。
- 姚明泽卢文亮张耀华梁爱华
- 关键词：植酸酶基因酶学性质
