朱有凯
- 作品数：21 被引量：43H指数：4
- 供职机构：广西壮族自治区人民医院更多>>
- 发文基金：广东省中医药管理局基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰致基因表达沉默细胞模型的建立被引量：1
- 2005年
- 目的探讨siRNA和shRNA在基因功能研究中的应用。方法用化学方法合成siRNA,以及用常规的分子克隆方法构建shRNA表达载体。以人类K562细胞为实验对象,采用lipofectamine将MDM2基因的siRNA和shRAN表达载体导入细胞后,用多重RT鄄PCR和Westernblot检测目标基因MDM2的表达水平。结果K562细胞瞬时转染MDM2siRNA48h后,MDM2蛋白质表达下降超过60%;稳定转染shRNA表达载体后,MDM2基因在mRNA和蛋白质表达水平下降超过70%。实验结果表明成功地建立了MDM2表达下调的实验细胞模型。结论siRNA和shRNA都能有效地导致目标基因表达沉默,在基因功能研究中瞬时转染和稳定转染需要配合使用以获得更理想的实验结果。
- 朱有凯林汉良马怡晖顾霞吴红阳廖冰
- 关键词：RNA干扰基因表达LIPOFECTAMINEMDM2基因SHRNA基因功能研究
- 应用t-SNE算法探讨实验室检查在自身免疫性疾病诊断上临床意义
- 2023年
- 应用机器学习算法t-SNE(t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding)对自身免疫性疾病患者实验室检查数据进行数据分析,探索其中数据结构、数据之间的关系以及在自身免疫性疾病诊断方面的意义。方法 构建以t-SNE为基础的数据分析模型,以原始实验室检查数据生成的大量高维数据集反复训练模型,确定各种重要参数和实验流程,最终对生成的一系列可视化散点图进行分析,揭示其中包含的信息和知识。结果 本研究建立了可靠性与实用性较强的数据分析模型以及具有临床实践意义的数据分析流程。通过对880例常见自身免疫性疾病病种的数据分析,发现超敏C反应蛋白将所有病例显著地分为两大类;同病种的病例具有明显聚集的数据簇结构,不同病例的数据点有重叠现象;通过比较不同的数据集分析结果,进一步简化了检查项目组合。结论 采用本研究建立的数据分析模型,能够将复杂的临床高维数据集通过计算简化为二维的可视化散点图。通过对散点图上重叠数据点的解析,快速地将疑难病例甄别出来,表明了数据分析模型的可靠性;研究结果表明超敏c反应蛋白可能在自身免疫性疾病的发生发展中具有启动者的作用;简化的检查项目组合也可以取得具有临床诊断价值的结果,在一定程度上节约了医疗资源。
- 肖瑞平朱有凯
- 关键词：STOCHASTICNEIGHBOR自身免疫性疾病超敏C反应蛋白
- MDM2基因敲低对白血病细胞株K562的影响
- 2005年
- 【目的】研究 MDM2基因对白血病细胞的影响,探讨 MDM2基因在白血病发病机制和治疗方面的意义。【方法】用 pSilencer4.1-CMV neo 构建 MDM2 shRNA 表达载体 pMDM2-shRNA,采用脂质体将载体导入 K562细胞,G418筛选出稳定表达 shRNA 细胞,然后用在流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡率,用多重 RT-PCR 和 Western blot 检测细胞基因表达水平。【结果】转染 pMDM2-shRNA 的细胞 MDM2 mRNA 及蛋白质的表达均下降>70%,细胞增殖减慢,G1-S期阻滞,细胞凋亡增加。伴随 MDM2基因表达下调,多种基因表达出现较明显改变,包括 P21表达增加,E2F1和 P65表达下降。【结论】MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢和细胞凋亡;结果表明 MDM2对多种基因的表达具有调控作用,提示 MDM2有可能成为白血病治疗的新靶点。
- 朱有凯林汉良顾霞马怡晖吴红阳古聪敏
- 关键词：白血病MDM2转染NEOSHRNA
- 转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长和化疗敏感性的影响被引量：2
- 2005年
- 目的研究转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长的影响以及转染后淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法构建survivin反义mRNA真核表达质粒pcDNA3.1反义(As)survivin;利用脂质体转染法将其转入高表达survivinmRNAT淋巴母细胞淋巴瘤Jurkat细胞系,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组织化学SP法、Western印迹法检测细胞中survivin表达;用细胞计数、流式细胞术(FCM)检测其细胞生长曲线、细胞凋亡指数,并进行光镜、电镜形态学观察;并对转染pcDNA3.1Assurvivin前后Jurkat细胞分别加入4羟基环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)72h后,常规MTT检测细胞存活率。结果RTPCR检测转染pcDNA3.1Assurvivin后48h、5和6周Jurkat细胞survivinmRNA表达,发现survivinmRNA表达皆低于对照组;转染后survivin蛋白表达也明显降低。转染pcDNA3.1Assurvivin后Jurkat细胞生长倍增时间(52h)明显延长;用FCM检测细胞凋亡发现,转染pcDNA3.1Assurvivin后Jurkat细胞凋亡指数[20.2%(48h)]明显高于对照组(转染空质粒和未转染组,2.1%和1.3%);5和6周为6.2%和6.8%,明显高于未转染细胞(1.3%和1.0%)。光镜、电镜观察见转染细胞出现较多凋亡细胞及一些变性肿胀细胞;MTT检测结果显示Jurkat细胞转染前后,经化疗药物4羟基环磷酰胺和甲氨蝶呤作用,转染细胞的抑制率明显大于未转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因对Jurkat细胞系的生长起着重要的作用,抑制survivin基因表达在T淋巴母细胞淋巴瘤治疗中可能有重要的意义,该基因似可能作为治疗的靶点。
- 顾霞林汉良邵建永张萌朱有凯梁惠珍马怡晖
- 关键词：淋巴瘤转染
- 非霍奇金淋巴瘤中survivin、bcl-2、bax、p53表达及其与细胞增殖和凋亡的关系被引量：5
- 2006年
- 目的研究非霍奇金淋巴瘤(non-Hndgkin’s lymphoma,NHL)中survivin、bcl-2、bax和p53指标表达的情况,比较它们在B-NHL和T-NHL中的差异,探讨它们在临床病理实践中的应用价值。方法应用免疫组化、原位凋亡检测及组织芯片技术对190例NHL进行检测。结果①survivin、bcl-2、bax、p53在75例B-NHL中表达的总阳性率分别为70·67%、57·33%、46·67%和36·00%,在115例T-NHL中表达的总阳性率分别为81·74%、44·35%、46·09%和40·00%,其中bcl-2表达在B-NHL和T-NHL之间差异有显著性(P=0·045);②随着B-NHL生物侵袭性的增强,survivin表达率和表达强度升高(P=0·001),bcl-2表达率和表达强度下降(P=0·018);③在低中度侵袭组中,随着NHL生物侵袭性的增强,突变型p53表达率升高;在高侵袭组中p53的表达率反而降低;④随着NHL生物侵袭性的增强,Ki-67表达升高(P=0·014和P=0·002)。结论①survivin是判断NHL恶性及侵袭性有意义的指标,联合检测survivin和bcl-2蛋白的表达情况对判断B-NHL的侵袭性可能有互补作用;②p53表达可用于评价低中度侵袭性NHL的生物学行为;③Ki-67蛋白表达强度是评估NHL肿瘤细胞增殖的良好指标,它对NHL侵袭性的分级具有较为重要的参考价值。
- 马怡晖林汉良朱有凯
- 关键词：非霍奇金淋巴瘤增殖SURVIVIN蛋白BCL-2蛋白BAX蛋白
- 化疗药物对淋巴瘤survivin mRNA表达的影响
- 2008年
- 目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)、氟尿嘧啶(5-Fu)的作用及耐药机制.方法 将化疗药物作用于HL-60、Raji和Jurkat细胞株,RT-PCR检测抗凋亡基因survivin、bcl-2和凋亡基因caspase-3 mRNA水平的变化,对结果进行半定量分析.用MTT法检测转染survivin反义mRNA的Jurkat细胞对抗肿瘤药物的敏感性.结果 HL-60、Raji和Jurkat细胞高表达survivin和bcl-2 mRNA,survivin和bcl-2 mRNA表达随着化疗药物作用时间延长和剂量升高逐渐减弱;但Raji细胞经低剂量MTX作用24 h survivin mRNA表达升高,HL-60细胞经CTX作用24 h bcl-2 mRNA表达升高;不表达caspase-3的Raji和Jurkat细胞,经CTX作用24 h表达caspase-3 mRNA.转染survivin反义mRNA后Jurkat细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,细胞生长抑制率明显大于未转染组.结论 survivin和bcl-2 mRNA表达降低和caspase-3表达升高与CTX、MTX、5-Fu抗肿瘤作用有关,抑制survivin表达可以增加化疗药物的敏感性.
- 顾霞林汉良张萌梁惠珍朱有凯沈艳吴红阳
- 四逆汤对大鼠肠缺血再灌注后肠粘膜细胞凋亡的影响及神经酰胺机制被引量：15
- 2005年
- 目的 研究四逆汤(SND)对大鼠肠缺血再灌注 (II/R后肠粘膜细胞凋亡的影响,并从神经酰胺信使通路探讨其抗凋亡机制。方法 24只SD大鼠随机分为 3组(n=8):对照组(仅分离不阻断肠系膜上动脉)、模型组 (阻断肠系膜上动脉 1h后再灌注 3h)、SND组(每天 3g·kg-1 SND灌胃,连续 3天后手术)。取回肠末端组织行电镜检查;检测肠粘膜组织SOD活性、MDA及神经酰胺含量的变化,TUNEL法检测肠粘膜上皮细胞的凋亡指数,RT PCR法分析肠粘膜组织鞘磷脂酶(SMase)基因表达的变化。结果 模型组电镜下可发现许多典型凋亡的上皮细胞,凋亡指数达 30 82%6 34%,SND预处理后凋亡指数为 14 91%±5 40%,明显低于模型组(P<0 01);模型组SOD活性明显低于对照组 (<0 01),MDA与神经酰胺含量以及SMase的基因表达明显高于对照组(P<0 01),且神经酰胺含量与凋亡指数具有良好的正相关 (r=0 852,P<0 01),与SOD活性具有负相关(r= -0 775,P<0 01 )。SND预处理能明显增强SOD活性,降低肠粘膜组织MDA及神经酰胺含量,减少肠粘膜组织SMase的基因表达(P<0 01)。SND组凋亡指数与神经酰胺的含量亦呈显著的正相关 (r=0 832,P<0 01 )。结论 SND具有抗II/R后肠粘膜细胞凋亡的作用,其作用与它清楚氧自由基、抑制SMase的基因表达、减少神经酰胺的生成有关。
- 刘克玄吴伟康朱有凯柳垂亮孙惠兰赵明奇
- 关键词：四逆汤肠粘膜神经酰胺类
- 液基细胞学结合分子生物学对膀胱癌诊断的价值被引量：2
- 2011年
- 目的探讨液基细胞学、液基细胞学联合免疫细胞化学标记物角蛋白20(CK20)、核基质蛋白22(NMP22)检测对膀胱癌诊断的价值。方法对208例膀胱癌疑似患者的尿液进行液基细胞学检查,对46例有非典型尿路上皮细胞的膀胱癌疑似患者涂片同时进行免疫细胞化学标记物CK20检测,对42例膀胱癌疑似患者的尿液进行NMP22检测,将它们的结果与组织病理学诊断结果对比,评估它们对膀胱癌的临床诊断价值。结果液基细胞学、液基细胞学联合CK20或NMP22的检测敏感度分别为71.6%、83.3%、80%,特异度分别为99.3%、75%、72.7%,阳性预测值分别为97.7%、86.2%、72.3%,阴性预测值分别为89.6%、70.6%、80%。结论在膀胱癌临床诊断中,尿液基细胞学是一种无创伤性、特异度高、阳性预测值好的诊断方法。液基细胞学与免疫细胞化学结合或与NMP22结合可提高对膀胱癌诊断的敏感度。
- 叶见波朱有凯周祥祯王庆国刘时才梁建波
- 关键词：膀胱肿瘤液基细胞学角蛋白20核基质蛋白22
- shRNA干扰Jurkat细胞株MDM2表达对细胞生物特性的影响被引量：3
- 2005年
- 目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系。方法应用pSilencer4.1CMVneo构建MDM2shRNA表达载体pMDM2shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RTPCR和Westernblot等技术检测细胞MDM2表达水平、基础生长曲线、细胞周期变化以及UV照射后细胞生长变化。结果发现转染pMDM2shRNA的细胞MDM2mRNA及蛋白质的表达均下降>50%,细胞的生长减慢,出现一定程度的G1～S期阻滞,DNA损伤后细胞恢复较慢。结论MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢以及降低损伤修复的能力;细胞内表达shRNA可长期敲低靶基因的表达,可作为较理想的基因功能研究细胞模型。
- 朱有凯林汉良顾霞张萌吴红阳许湘
- 关键词：JURKAT细胞株生物特性细胞生物学特性MDM2基因细胞内表达
- 尿液基细胞学和核基质蛋白22对膀胱癌诊断的临床价值被引量：1
- 2010年
- 目的探讨尿液基细胞学和核基质蛋白22(Nuclear matrix protein22,NMP22)对膀胱癌诊断的临床价值。方法对208例膀胱癌疑似患者的尿液进行液基细胞学检查,对42例膀胱癌疑似患者的尿液进行NMP22检测,同时,将两种方法结果与组织病理学诊断结果对照,评估它们对膀胱癌的临床诊断价值。结果尿液基细胞学和NMP22的敏感度分别为71.6%和80%,特异度分别为99.3%和72.7%,阳性预测值分别为97.7%和72.3%,阴性预测值分别为89.6%和80%。结论在膀胱癌临床诊断中,尿液基细胞学是一种无创伤性、特异度高、阳性预测值好的诊断方法,液基细胞学与核基质蛋白22联合可提高对膀胱癌诊断的敏感度。
- 叶见波朱有凯周祥祯黄谟婉王庆国刘时才
- 关键词：液基细胞学核基质蛋白22膀胱癌尿液
