张萌
- 作品数：117 被引量：436H指数：11
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- 汉黄芩素对多发性骨髓瘤细胞周期及P-Wee1和P-Akt蛋白表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨汉黄芩素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制作用及其可能的机制。方法以不同浓度的汉黄芩素(5～100μg/ml)作用于RPMI8226细胞24h,使用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞的增殖活性和细胞周期的变化;运用Western-blot法检测汉黄芩素作用前后细胞内P-Wee1、P-Akt蛋白表达的变化。结果汉黄芩素对RPMI8226细胞具有增殖抑制作用,并有剂量依赖性,IC50为43.71μg/ml;汉黄芩素浓度为50μg/ml时,用药组的G2/M%为(25.4333±2.35433)%,明显高于溶剂对照组的(6.8333±1.52753)%;Western-blot检测结果显示,用药组汉黄芩素浓度≥50μg/ml时,与对照组相比,P-Wee1、P-Akt蛋白表达明显减少。结论汉黄芩素能明显抑制RPMI8226细胞的增殖,可能是通过Akt/Wee1途径使肿瘤细胞发生G2/M期阻滞,从而发挥增殖抑制作用。
- 张萌刘丽萍郭友逢李智莫穗林
- 关键词：多发性骨髓瘤汉黄芩素G2M期阻滞P-AKT
- 脐血干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症被引量：19
- 2005年
- 目的比较假肥大型肌营养不良症(Duchennemusculardystrophy,DMD)患者经脐血干细胞移植治疗前后其肌肉再生、抗肌萎缩蛋白表达和运动功能的改变;以及评价治疗的安全性。方法对1例经基因分析和肌肉活检及抗肌萎缩蛋白检测确诊的、已丧失行走能力的DMD患儿,经HLA配型,在脐血库中寻找到一个全相合的脐血供体。采用白消安+环磷酰胺+兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后进行异基因脐血干细胞移植;术后采用环孢素A和骁悉方案预防移植物抗宿主反应(graftversushostreaction,GVHD)。同时定期检测原发病的生化指标如血清肌酸激酶(creatinekinase,CK)、造血重建的植入证据(血型转变、肌肉和血液系统的聚合酶链反应短串联重复序列分析)、缺陷基因是否纠正、新生肌肉是否出现、肌肉中抗肌萎缩蛋白是否表达和运动功能是否改善。结果(1)中性粒细胞在脐血干细胞移植后第15天(+15天)达到0.5×109/L,白细胞在+25天达正常水平;血小板于+22天达到20×109/L;血红蛋白维持于85～100g/L。术后140天骨髓穿刺提示三系生长旺盛;(2)移植后140天血型转为供体AB型。至今没有出现移植物抗宿主反应。(3)术后18天、30天、43天、55天、74天、233天患者外周血DNA和术后140天、183天、235天骨髓细胞DNA经PCRSTR检测为供者独立植入;(4)患儿术后60天取外周血做基因分析,显示19号缺失的外显子得到完全纠正,患儿转变为正常基因型;(5)患儿在移植后75天的肌肉活检可见新生肌管形成,抗肌萎缩蛋白免疫组化呈弱阳性,少数为强阳性反应,DNA分析:供者基因DNA占1%～13%;移植后126天抗肌萎缩蛋白免疫组化检测显示阳性的肌纤维明显增多,供者基因DNA上升至2.5%～25%;(6)患儿血清CK从移植治疗前的5735U/L降至274U/L;(7)术后100天体检发现患儿肌力略有改善,肢端温暖。结论异基因脐血干细胞移植治疗DMD,可在移植后短期内重建造血�
- 张成冯慧宇黄绍良方建培肖露露姚晓黎陈纯叶欣曾缨卢锡林文剑明张为西李中冯善伟徐宏贵黄科周敦华陈维谢有梅席静张萌黎阳刘颖
- 关键词：脐血干细胞移植假肥大型肌营养不良症抗肌萎缩蛋白造血功能
- 缺氧反应元件启动子表达反义血管内皮生长因子(VEGF)_(165)cDNA靶向性抑制骨肉瘤细胞VEGF表达被引量：8
- 2005年
- 目的以缺氧诱导因子1/缺氧反应元件(HIF1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含荧光素酶(Luc)报告基因和人反义VEGF165cDNA全长的真核表达质粒,将其转染骨肉瘤细胞系MG63,用液闪计数仪测定缺氧对报告基因表达的调节,酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测缺氧条件下细胞VEGF表达的变化。结果成功构建了由HRE启动子驱动的含Luc和反义VEGF165cDNA全长的真核表达质粒pBIHRELucAsVEGF165,该质粒转染骨肉瘤细胞系,缺氧条件下可使报告基因在肿瘤细胞中的表达提高3.5×102倍,使肿瘤细胞VEGF分泌下降45%。结论利用肿瘤缺氧,HRE启动子能够实现反义VEGF165的高效表达,为开展靶向性抗肿瘤血管生成治疗提供了实验依据。
- 王燕汪睿乔慧李晋云彭挺生李扬张萌梁惠珍丘钜世
- 关键词：骨肉瘤内皮生长因子反义血管内皮生长因子骨肉瘤细胞系缺氧反应元件VEGF表达启动子
- 骨巨细胞瘤瘤组织中M-CSF、TNF_(-α)的检测及其意义被引量：2
- 1999年
- 目的：探讨细胞因子与骨巨细胞瘤局部溶骨的关系。方法：通过ＥＬＩＳＡ法、Ｗｅｓｔｅｎｂｌｏｔ法和免疫组化法对１０例骨巨细胞瘤、５例骨肉瘤和５例正常人血清进行了ＴＮＦ－α和Ｍ－ＣＳＦ表达及定位检测。结果：骨巨细胞瘤组织ＴＮＦ－α含量和Ｍ－ＣＳＦ表达率明显高于骨肉瘤和正常人血清。ＴＮＦ－α由骨巨细胞瘤的部分单核基质细胞和多核巨细胞分泌；而Ｍ－ＣＳＦ由部分单核基质细胞分泌，多核巨细胞则不表达。结论：骨巨细胞瘤中各种细胞分泌不同的细胞因子可能参与该肿瘤的局部骨质吸收。
- 姚俊霞文剑明钟思陶钟思陶张萌
- 关键词：骨巨细胞瘤M-CSFTNFΑ
- 反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究被引量：1
- 2004年
- 目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as。随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。
- 孙来保李成荣文剑明王国兵张萌杨军李若馨
- 关键词：反义HTERT白血病细胞增殖分子生物学
- 化疗药物对淋巴瘤survivin mRNA表达的影响
- 2008年
- 目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)、氟尿嘧啶(5-Fu)的作用及耐药机制.方法 将化疗药物作用于HL-60、Raji和Jurkat细胞株,RT-PCR检测抗凋亡基因survivin、bcl-2和凋亡基因caspase-3 mRNA水平的变化,对结果进行半定量分析.用MTT法检测转染survivin反义mRNA的Jurkat细胞对抗肿瘤药物的敏感性.结果 HL-60、Raji和Jurkat细胞高表达survivin和bcl-2 mRNA,survivin和bcl-2 mRNA表达随着化疗药物作用时间延长和剂量升高逐渐减弱;但Raji细胞经低剂量MTX作用24 h survivin mRNA表达升高,HL-60细胞经CTX作用24 h bcl-2 mRNA表达升高;不表达caspase-3的Raji和Jurkat细胞,经CTX作用24 h表达caspase-3 mRNA.转染survivin反义mRNA后Jurkat细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,细胞生长抑制率明显大于未转染组.结论 survivin和bcl-2 mRNA表达降低和caspase-3表达升高与CTX、MTX、5-Fu抗肿瘤作用有关,抑制survivin表达可以增加化疗药物的敏感性.
- 顾霞林汉良张萌梁惠珍朱有凯沈艳吴红阳
- 人成骨肉瘤细胞系（OS－732）对骨质破坏吸收的病理
- 1994年
- 用人成骨肉瘤ＯＳ－７３２细胞系与人胎骨粒共培养，观察瘤细胞浸润及溶解吸收骨质的过程。可见（１）瘤细胞突侵入骨质浅层，包绕骨基质致呈小块状分离，然后吸收；（２）瘤细胞分泌水解酶，直接溶解及吸收骨基质，致骨质表层陷窝状凹陷。故认为瘤细胞能直接浸润及溶解骨质，而不需要破骨细胞的参与。作者尚应用￣（４５）Ｃａ标记新生小鼠颅骨与人成骨肉瘤细胞系共培养，以及加入骨质溶解促进剂（ＥＧＦ）及抑制剂（二磷酸盐）后，通过液闪计数仪检测以及￣（４５）Ｃａ释出的数据，加以比较及分析。结果说明ＥＧＦ能使骨质溶解增强；小剂量二磷酸盐可抑制骨质的溶解，但大剂量二磷酸盐则有加速骨肉瘤细胞溶解骨质的作用。
- 刘子君丘钜世文剑明张萌梁凤英陶瑜徐栋梁
- 关键词：肉瘤细胞系骨质破坏骨肿瘤
- TRAP-银染方法检测体外培养细胞的端粒酶活性被引量：22
- 1997年
- ＴＲＡＰ－银染方法检测体外培养细胞的端粒酶活性孙来保文剑明张萌谢丹赵国强罗超权关键词端粒酶ＴＲＡＰ－银染方法端粒中图号Ｒ７３０４３端粒（Ｔｅｌｏｍｅｒｅ）由ＤＮＡ和蛋白质构成，位于真核生物染色体的末端。这一结构的ＤＮＡ部分主要由富含鸟嘌呤（Ｇ）的简...
- 孙来保文剑明张萌谢丹赵国强罗超权
- 关键词：端粒酶端粒肿瘤细胞培养
- 反义hTERT基因对白血病细胞端粒酶表达及活性的抑制作用被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨反义hTERT基因体外对白血病细胞端粒酶基因表达及其活性的抑制作用。方法 采用基因重组技术设计并构建了针对端粒酶活性蛋白催化亚单位mRNA的 5′端序列的反义pcDNA hTERT真核表达载体 ,通过SuperFect(QIAGEN)将其瞬时转染人早幼粒白血病细胞株HL60 及人红白血病细胞株K562 ,并运用流式细胞术测定其细胞凋亡与细胞周期的变化 ,同时运用实时荧光定量逆转录 聚合酶链反应方法对其端粒酶蛋白催化亚单位基因的表达水平进行了检测 ,端粒酶活性的检测则采用了非放射性TRAP 银染法。结果 成功地构建了反义pcDNA hTERT真核表达载体 ,并将其转染至K562 和HL60 白血病细胞株。结果与空载体组、空白组相比 ,反义 pcDNA hTERT组体外显示出明显有效地抑制端粒酶的基因表达及其活性的作用 ;在细胞凋亡与细胞周期方面 ,反义组能引起细胞周期左移 ,增殖分裂能力降低 ,同时伴有细胞凋亡数的增加。结论 研究构建的反义hTERT基因体外确实能明显有效地下调白血病细胞端粒酶的基因表达及其活性 。
- 孙来保李成荣文剑明王国兵张萌杨军李若馨
- 关键词：反义HTERT白血病细胞端粒酶酶表达真核表达载体
- 骨肿瘤的分子、细胞遗传学研究被引量：14
- 2000年
- 目的 探讨骨肿瘤的分子、细胞遗传学改变。 方法 采用染色体分析技术、免疫组化技术、分子杂交技术、PCR SSCP技术、DNA序列分析技术及基因转染技术等对常见骨肿瘤分子细胞遗传学进行了系列研究。 结果 5 0例侵袭性骨肿瘤瘤细胞普遍存在染色体畸变 ,数目畸变率达86 96 % ,结构畸变率达 93 94% ,但不同肿瘤间存在差别 ;5 3例骨肿瘤患者外周血细胞染色体不稳定性明显高于正常人 ,且患者染色体脆性部位、瘤细胞染色体高度非随机断裂点与癌基因位点密切相关 ;对 30 5例骨肿瘤p5 3基因和 89例骨肿瘤Rb基因的研究发现 ,骨肿瘤p5 3和Rb基因的异常为多发事件 ,p5 3蛋白积聚和Rb蛋白缺失多见于有恶性倾向的骨肿瘤 ;对 12 4例骨肿瘤相关癌基因 (ras,myc ,fos,bcl 2 ,met等 )进行了结构分析和蛋白表达研究 ,发现骨肿瘤可出现多个原癌基因的异常 ,不同骨肿瘤间癌基因的异常存在差别 ;将外源性野生型p5 3基因转导入人骨肉瘤细胞株中 ,可导致骨肉瘤细胞生长抑制及引起瘤细胞凋亡。 结论 骨肿瘤细胞普遍存在染色体、癌基因和抑癌基因的异常 ,骨肿瘤的发生与多种癌基因和抑癌基因变异有关。
- 丘钜世朱全胜王连唐李扬黄琳张萌陈平圣田伟刘巍张静
- 关键词：骨肿瘤细胞遗传学分子遗传学基因表达
