李永锋
- 作品数：48 被引量：61H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 表达萤火虫荧光素酶基因的重组猪瘟病毒及其应用
- 本发明公开了一株表达萤火虫荧光素酶基因的重组猪瘟病毒及其应用，属于表达萤火虫荧光素酶基因的重组猪瘟病毒的拯救和应用领域。本发明通过重叠PCR方法将萤火虫荧光素酶基因克隆到猪瘟病毒Shimen株全长感染性克隆pBRCISM...
- 仇华吉申梁李永锋孙元李素罗玉子
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
- 2018年
- 为建立一种准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,通过对PRRSV基因连续缺失片段dNsp2(87)进行诱导表达,重组pUC57-dNsp2蛋白,经镍柱纯化后,作为抗原包被微量反应板,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。经反应条件优化,确定抗原的最适包被浓度为40μg/mL,最适封闭液为5%脱脂奶粉,检测血清稀释度为1:40,酶标二抗的最适工作浓度为1:5 000,最佳显色时间为1 h,确定阴阳性临界值为0.35(OD450)。该方法均不与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。与IDEXX PRRSV Kit进行重复性、敏感性、符合性试验,证明该方法具有较好的重复性、敏感性、符合性。结果表明,该方法可用于临床PRRSV抗体的检测。
- 高许雷孙国强李永锋
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒间接ELISA
- 表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株及其应用
- 本发明公开了表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株及其应用，属于伪狂犬病病毒变异株的构建及应用领域。本发明以gE/gI双基因缺失重组病毒rPRVTJ‑delgE/gI为基础，在rPRVTJ‑delgE/gI中插入猪...
- 仇华吉孙元罗玉子李素李永锋
- 文献传递
- 抗猪瘟病毒感染的siRNA及其应用
- 本发明公开了抗猪瘟病毒感染的siRNA及其应用，属于抗猪瘟病毒siRNA的鉴定及其应用领域。本发明首先公开了分别靶向猪瘟病毒基因组N<Sup>pro</Sup>、P7、NS5A和NS5B基因的抗猪瘟病毒感染的siRNA，...
- 仇华吉申梁李永锋孙元李素罗玉子
- 文献传递
- 囊膜蛋白的糖基化修饰对病毒感染和致病性影响的研究进展被引量：1
- 2022年
- 糖基化(Glycosylation)是指蛋白质或脂质在酶的作用下连接糖链的一种修饰形式。作为生物体内最重要的蛋白质翻译后修饰形式之一,糖基化调控了蛋白质在组织和细胞中的定位、功能、活性、寿命和多样性[1-2]。细胞内超过50%的蛋白质均有糖链的修饰,它们参与了包括细胞识别、细胞分化、发育、信号转导、免疫应答等在内的各种重要的生命活动。在多种疾病,如肿瘤。
- 赵小天袁梦淇张新杨晓柯马吉飞李永锋仇华吉
- 关键词：囊膜蛋白蛋白质翻译后修饰病毒感染细胞识别细胞分化糖链
- 猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响
- 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro蛋白具有自我切割酶活性和抑制Ⅰ型干扰素产生的...
- 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒病毒复制
- 猪瘟病毒截短E2蛋白及其应用
- 本发明公开了一种基于蛋白空间结构设计的猪瘟病毒截短E2蛋白及其应用。本发明根据牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的晶体结构，模拟出猪瘟病毒E2蛋白的空间结构并对其进行截短表达，截短蛋白E2<Sup>B/C/D/A</Sup>的氨基...
- 仇华吉罗玉子孙元孟星宇李素李永锋
- 文献传递
- 家兔ANXA1蛋白与猪瘟病毒E2蛋白相互作用并影响其复制的研究
- 2023年
- 本研究团队前期研究发现,猪瘟病毒(CSFV) HCLV株E2蛋白结构域Ⅰ (E2^(Domain Ⅰ))是HCLV株适应家兔的关键结构域,Domain Ⅰ中108位脯氨酸(P)和109位苏氨酸(T)是HCLV株适应家兔必需氨基酸。为进一步探究HCLV适应家兔的分子机制,本研究提取家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白分别与CSFV Shimen (SM)株E2蛋白(SM E2)、HCLV株E2蛋白突变体(HCLV E2^(P108L-T109I))及HCLV株E2蛋白(HCLV E2)共孵育,经SDS-PAGE后通过蛋白质质谱鉴定,结果却意外发现,CSFV SM E2与家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白作用后在37 ku左右处多出一条带;质谱分析结果显示其可能为细胞膜蛋白膜联蛋白1 (ANXA1),且与CSFV SM E2蛋白之间可能存在相互作用。为了分析ANXA1在HCLV适应家兔中的作用,将CSFV SM株和HCLV株分别接种家兔,48 h和72 h后分离各组兔外周血单个核淋巴细胞(PBMC),采用RT-q PCR方法检测ANXA1基因m RNA的转录水平。结果显示,与对照组相比,家兔在接种SM株和HCLV株后,ANXA1基因m RNA转录水平均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)下调,且与接种HCLV株的家兔相比,接种SM株家兔中ANXA1基因m RNA的转录水平极显著(P<0.001,72 h)或者显著(P<0.05,48 h)下调,表明接种SM株后的家兔可能通过调控ANXA1的转录水平抑制SM株的复制。将pCAGGS-Flag-ANXA1和pCAGGS-Flag分别转染HKE293T细胞,48 h后收集细胞样品,通过GST pulldown验证ANXA1与CSFV SM E2蛋白的相互作用;将pCAGGS-Strep-SME2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为强毒实验组,将pCAGGS-Myc-HCLV E2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为弱毒实验组,48 h后采用Co-IP试验验证ANXA1与不同CSFV E2的相互作用。上述结果进一步表明,ANXA1与CSFV SM E2存在相互作用,但其与HCLV E2无相互作用;将pCAGGS-Strep-SME2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为实验组,采用激光共聚焦显微镜观察发现SM E2蛋白和ANXA1蛋白共定位于细胞浆中。将表达ANXA1的重组质粒转染ST细胞,48 h后分别接种CSFV S
- 赵小天谢利豹张柯慧马吉飞李永锋仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白
- 伪狂犬病病毒变异株双基因缺失毒株及其构建方法和应用
- 本发明公开了伪狂犬病病毒变异株双基因缺失毒株及其构建方法和应用。本发明提供了一株缺失gI和gE基因的伪狂犬病病毒株，其微生物保藏编号是CGMCC.No.8786。本发明进一步提供了构建所述双基因缺失毒株的方法，包括：（1...
- 仇华吉孙元罗玉子李素李永锋
- 检测非洲猪瘟病毒的PCR引物、试剂盒及其应用
- 本发明公开了检测非洲猪瘟病毒的PCR引物、试剂盒及其应用，属于非洲猪瘟病毒的检测领域。本发明首先根据GenBank上ASFV p72基因的保守区域设计了4对引物，从中筛选出特异性强、敏感性高的引物，该引物由SEQ ID ...
- 仇华吉罗玉子孙元孟星宇李素李永锋
- 文献传递
