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西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定被引量：2: 2009年; 为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约为90ku,约占可溶性菌体蛋白质量的50%。利用直链淀粉树脂柱对MBP-NS1纯化后的重组蛋白的纯度达到60%,western blot和间接ELISA检测证明纯化的MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性,为进一步开展关于WNV NS1蛋白的研究奠定了基础。; 马健男杨涛王群张维军徐青元田野林燕宋红梅步志高吴东来; 关键词：西尼罗病毒 NS1基因原核表达

人分化抑制因子Id-2、Id-3在E.coli中的高效表达及其多克隆抗体的制备: 分化抑制因子又称DNA结合抑制因子,属于螺旋-环-螺旋蛋白,其对碱性螺旋-环-螺旋转录因子有负调控作用,可以抑制细胞分化、促进细胞增殖并且参与细胞周期调控过程。目前已知哺乳动物细胞含有4种亚型Id蛋白即Id-1～4。其中...; 林燕; 关键词：纯化多克隆抗体; 文献传递

西尼罗病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2011年; 目的:制备针对西尼罗病毒NS1蛋白的特异性单克隆抗体。方法:以原核表达的重组NS1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。以真核表达的重组NS1蛋白为检测用抗原,建立间接ELISA检测方法筛选分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。并利用Western blot和IFA试验对所获得的单克隆抗体进行鉴定。结果:共获得了2株稳定分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为WN-1C10和WN-3D10,其亚类鉴定分别属于IgG2a和IgG1。这2株单克隆抗体均能与西尼罗病毒NS1蛋白和病毒抗原发生特异性反应,而与日本脑炎病毒无交叉反应。结论:本实验成功制备出针对西尼罗病毒NS1蛋白的特异性单克隆抗体,为我国建立西尼罗病毒与日本脑炎病毒的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。; 马健男杨涛徐青元孙恩成林燕刘霓红杨银辉李文京步志高吴东来; 关键词：西尼罗病毒 NS1蛋白单克隆抗体

紫杉醇基因组重排菌株HDFS4-26: 紫杉醇基因组重排菌株HDFS4-26，它涉及一种紫杉醇基因组重排菌株。它解决了目前可用于紫杉醇微生物发酵的菌株的紫杉醇产量仍然较低的问题。紫杉醇基因组重排菌株HDFS4-26为树状多节孢属于多节孢属，保藏于中国典型培养物...; 周东坡赵凯平文祥张丽娜刘军林燕; 文献传递

赤羽病病毒G1蛋白单克隆抗体的制备及生物学活性分析: 以浓缩纯化的赤羽病病毒作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以昆虫杆状病毒表达系统所获得的重组AKAV-G1蛋白为检测抗原进行间接ELISA检测,经过三次筛选克隆...; 林燕吴东来刘霓红张维军徐树兰童铁钢徐青元田野马健男周东坡; 关键词：赤羽病病毒单克隆抗体中和活性生物学活性特异性反应; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CTL细胞表位及其应用: 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CTL细胞表位及其应用。本发明将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株M蛋白基因与小鼠泛素基因进行融合并克隆构建DNA疫苗，同时构建了表达M蛋白的WR株牛痘病毒的重组病毒；按照Prim...; 吴东来张维军刘霓红白宇林燕童铁钢王群杨涛; 文献传递

人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备: 从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,...; 林燕童铁钢穆丹梅白宇杨木蕾郑敏吴东来; 关键词：纯化多克隆抗体; 文献传递

人分化抑制因子Id-2基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2009年; 目的在大肠杆菌中表达人Id-2与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-2的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-2基因的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-2融合蛋白,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性,并以此为抗原制备多克隆抗体。结果经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-2基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量40000的GST-Id-2融合蛋白。Western-Blot、ELISA和琼脂双向扩散实验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-2特异性反应。结论Id-2基因在在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-2及其在各种组织中的表达提供了一种检测方法,也为分析Id-2分子结构及抗原表位奠定了基础。; 童铁钢林燕穆丹梅白宇杨木蕾郑敏吴东来; 关键词：基因表达多克隆抗体

西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定: 通过PCR方法扩增西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS...; 马健男吴东来杨涛王群张维军徐青元田野林燕宋红梅步志高; 关键词：西尼罗病毒原核表达融合蛋白; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定被引量：2: 2010年; 为重组表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白,本研究将RT-PCR获得的PRRSV CH-1a株M蛋白基因,克隆于pMD18-T载体中,经测序鉴定正确后,亚克隆至牛痘病毒重组转移质粒pSC11中,构建了转移重组质粒pSC11-PRRSV-M。将pSC11-PRRSV-M在脂质体的介导下转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,在含有X-gal的琼脂培养基上通过蓝斑筛选含有PRRSV M基因的重组病毒rWR-PRRSV-M。Western blot与IFA检测表明,重组病毒成功表达了PRRSV M蛋白,而且所表达的蛋白保持了良好的免疫原性。动物实验表明,rWR-PRRSV-M所表达的PRRSV M蛋白在免疫小鼠体内诱生了抗PRRSV的抗体。rWR-PRRSV-M的构建,为进一步探讨PRRSV M蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。; 张维军田野林燕王群徐青元孙庆歌刘霓红杨涛田志军步志高童光志李文京吴东来; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白

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