王树奇
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨被引量：1
- 2012年
- 目的探讨金诺芬对日本血吸虫（Schistosoma japonicum）童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点，测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法用二硫苏糖醇（DTI？）／胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组sjTrx-酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4～6周龄雌性昆明鼠（童虫组10只小鼠，600-800条／只；成虫组10只小鼠，80-100条／只）．灌注法收集童虫（15d）和成虫（35d）。虫体经无菌生理盐水充分洗涤后，转移至预先添加培养基的12孔板中．分别加入金诺芬和吡喹酮至其终浓度为1、5和10μg／ml，显微镜下观察化合物处理2、24、48和72h后虫体的形态改变和死亡情况。CCK．8试剂盒测定金诺芬（5和10Ixg／m1）对3种人源宿主细胞（HepG2、293T和Hela）的毒性。结果10μg／ml金诺芬作用下，40min内重组Si协．1还原胰岛素的总量减少54．5％。5μg／ml金诺芬体外作用24h后．成虫死亡率达75％，而童虫未见死亡；10μg／ml金诺芬作用72h后，童虫和成虫均全部死亡，但童虫死亡时间较成虫延迟。金诺芬和吡喹酮作用后，光镜下观察．虫体均出现颜色变灰暗、挛缩和卷曲等现象：电镜下可见虫体表被膜结构严重破坏。细胞毒性测试结果显示，5μg／ml金诺芬可使细胞相对活力降低85％以上，而10μg／ml时细胞几乎全部死亡。结论sjTrx-是金诺芬作用靶点之一。金诺芬具有较强的细胞毒性作用，对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果存在差异．对成虫的作用效果更显著。
- 刘建胡薇徐斌王吉鹏王树奇王小宁
- 关键词：金诺芬日本血吸虫靶点细胞毒性
- 一种化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用
- 本发明公开了一种结构式（I）化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用。本发明通过对日本血吸虫脂肪酸合成途径的深入分析，认为参与该途径的3-氧化酰基-酰基载体蛋白还原酶（3-Oxoacyl-ACP Reductase，OA...
- 胡薇刘建王吉鹏王树奇杨忠徐斌鞠川
- 文献传递
- 一种化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用
- 本发明公开了一种结构式（I）化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用。本发明通过对日本血吸虫脂肪酸合成途径的深入分析，认为参与该途径的3-氧化酰基-酰基载体蛋白还原酶（3-Oxoacyl-ACP Reductase，OA...
- 胡薇刘建王吉鹏王树奇杨忠徐斌鞠川
- 文献传递
- 日本血吸虫醛糖还原酶基因RNA干扰效应的初步研究被引量：4
- 2014年
- 目的研究siRNA诱导的日本血吸虫醛糖还原酶(SjAR)基因转录本和蛋白水平的RNA干扰(RNAi)效应。方法设计并合成2条针对SjAR基因的siRNA(siRNA-1和siRNA-2)和1条阴性对照siRNA(siRNA-NC)。用日本血吸虫尾蚴感染4~6周龄雌性昆明鼠(800~1 000条/鼠),13 d后灌注小鼠肝门静脉收集童虫,每(120±10)条童虫为一组,分别采用电转法和浸泡法对各组童虫进行RNAi处理。电转处理法:向电击杯中分别加入5μg siRNA-1、siRNA-2、siRNA-NC或等体积的焦碳酸二乙酯(DEPC)水(空白对照),经125 V 20 ms方波脉冲电击童虫1次后,继续培养48 h;浸泡处理法:向童虫培养基中加入siRNA-1、siRNA-2或siRNA-NC溶液至siRNA浓度为200 nmol/L,第3天时更换一半新鲜培养基并补充siRNA,共培养5 d。每处理设3个平行对照组。干扰结束后,采用TRIzol法提取虫体RNA和可溶性总蛋白,将RNA反转录为cDNA,以SjGAPDH基因为内参,实时定量PCR检测SjAR转录本相对表达水平的变化,Western blotting分析SjAR蛋白水平的变化。结果实时定量PCR结果显示,采用siRNA-1、siRNA-2和siRNA-NC电转后,虫体SjAR转录本水平分别为(90.6±16.2)%、(84.2±7.3)%和(105.9±10.3)%,与空白对照组[(100.9±16.8)%]的差异均无统计学意义(P>0.05);使用siRNA-1、siRNA-2浸泡后,SjAR转录本水平为(48.6±8.2)%和(73.4±4.7)%,均较空白对照组[(100.0±3.3%)]显著下降(P<0.01),而阴性对照siRNA-NC浸泡后的虫体SjAR转录本的表达水平为(101.43±14.33)%,与空白对照组比较表达差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting分析和条带定量结果显示,以空白对照组为标准,使用siRNA-1、siRNA-2和siRNA-NC浸泡后,SjAR蛋白水平分别为79.0%、97.8%和103.2%。结论使用浸泡法对日本血吸虫童虫SjAR进行RNAi处理可降低靶基因转录本和蛋白的表达水平。
- 王树奇徐斌刘建王吉鹏胡薇
- 关键词：日本血吸虫醛糖还原酶RNA干扰
