郑美霞
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- EB病毒潜伏膜蛋白2的B细胞表位免疫原性研究被引量：3
- 2010年
- 目的 分析EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）B淋巴细胞表位的免疫原性.方法 利用生物信息学技术筛选出EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391,将其相应基因片段分别克隆至pET32a（＋）载体并转化至大肠埃希菌BL21（DE3）菌株诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白免疫印迹分析鉴定,通过Ni-NTA离子螯合亲和层析柱纯化.分别以纯化的表位蛋白作为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,设pET32a（＋）蛋白和PBS为对照.分别以3个表位蛋白作包被抗原,ELISA法检测第0、3、6周小鼠血清中相应表位特异性抗体IgG,并于免疫后第6周检测各免疫组小鼠血清抗体识别天然EBV抗原的能力.结果 在原核表达体系中分别获得了表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391融合表达产物.纯化的表位蛋白免疫小鼠,血清中分别能检测到相应的表位特异性抗体IgG,其抗体水平随着免疫次数的增加而呈现逐渐升高的趋势,表位LMP2318-322免疫组第3、6周小鼠血清抗体显著高于pET32a（＋）蛋白对照组（F=493.85、773.99,均P＜0.05）,LMP2381-391免疫组第3、6周抗体水平亦显著高于pET32a（＋）蛋白对照组（F=926.33、309.14,均P＜0.05）,而表位LMP2199 209免疫组至第6周特异性抗体高于pET32a（＋）蛋白对照组（F=87.27,P＜0.05）.3个表位蛋白免疫小鼠血清抗体IgG均能识别EBV天然抗原,以表位LMP2199-209和LMP2381-391免疫组抗EBV-IgG生成水平尤为显著.结论 筛选的EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391通过原核表达体系中制备的表位蛋白,具有较好的免疫原性,可进一步用于EBV感染及其相关肿瘤表位疫苗的研究.
- 李文姝郑美霞欧琴朱珊丽张丽芳
- 关键词：病毒包膜蛋白质类
- EBV潜伏膜蛋白2的结构与功能分析
- 2010年
- 目的:预测和分析EBV潜伏膜蛋白2(LMP2)的结构和功能。方法:采用互联网数据库和生物软件,从SwissProt蛋白质数据库中检索LMP2的氨基酸序列,通过生物软件分析预测其理化性质、二级结构及空间结构。结果:分析显示LMP2由497个氨基酸组成,分子量53 011.4 Da,等电点4.85,为疏水性蛋白;具有12个疏水跨膜区,其N端含有免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)和脯氨酸富集基序(PY基序),前者位于氨基酸序列74～77和85～88处,后者位于56～60和97～101处;含有15个α螺旋结构和7个β片层结构,通过无规则卷曲连接α螺旋和β片层。结论:通过对LMP2生物信息学的分析,获得了此蛋白的理化特性及部分参与调节跨膜信号传导功能区的信息,为进一步研究EBV的感染与致病机制、研制EBV亚单位疫苗等奠定基础。
- 郑美霞刘建晓巩文词朱珊丽李文姝张丽芳
- 关键词：潜伏膜蛋白生物信息学
