周孝伟
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南京农业大学食品科技学院酶工程研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组鱼腥藻脂肪氧合酶基因的克隆表达、分离纯化及活性分析
- 克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因，对该功能基因进行了定点突变研究，确定了ana-LOX的最短功能基因长度，构建原核重组表达载体，对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBan...
- 张充周孝伟吕凤霞别小妹陶婷婷应琦陆兆新
- 关键词：脂肪氧合酶克隆表达定点突变分离纯化活性分析
- 文献传递
- 重组脂肪氧合酶的培养条件优化及其在小麦粉中的应用
- 脂肪氧舍酶广泛存在于植物、微生物中，具有强筋和漂白的作用，能够作为面粉改良剂溴酸钾和过氧化苯甲酰的潜在替代物，因而成为目前绿色食品添加剂研究开发方面的热点。与传统的面粉改良剂相比，脂肪氧合酶作为新型的面粉改良剂具有安全、...
- 周孝伟
- 关键词：酶学性质小麦粉
- 文献传递
- 重组鱼腥藻脂肪氧合酶基因的克隆表达、分离纯化及活性分析被引量：10
- 2012年
- 克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因,对该功能基因进行了定点突变研究,确定了ana-LOX的最短功能基因长度,构建原核重组表达载体,对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LOX基因,通过序列分析和比对,发现LOX功能基因位于双功能酶AOS(单加氧酶)-LOX的C端,通过定点突变研究,证实了ana-LOX活性中心位点为His197、His202、His369、Asn373和Ile455。通过逐步缩短基因长度的策略,获得ana-LOX基因的最短功能基因长度为1 254 bp。构建的表达载体pET-32a/ana-LOX转化入BL21(DE3)宿主内,在低温16℃条件下的诱导表达,重组脂肪氧合酶活力可达6 750 U/mL。表达产物通过Ni-NTA亲和柱进行分离纯化,比活达到11.4×104U/mg蛋白,酶活回收率为60.89%。重组ana-LOX最适反应温度45℃,最适反应pH 6.0,在常温下具有较好的稳定性,金属离子Fe2+、Mg2+、Ca2+对该酶存在明显的激活作用,而Fe3+和Cu2+对该酶有强烈的抑制作用。重组ana-LOX能够改善面团的显微结构。该研究获得了高效表达重组ana-LOX,为实现其在食品加工中的应用提供了参考。
- 张充周孝伟吕凤霞别小妹陶婷婷应琦陆兆新
- 关键词：克隆表达定点突变分离纯化活性分析
