李建伟
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：西南大学生物技术学院家蚕基因组生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕组织蛋白酶基因家族的鉴定及表达特征分析被引量：4
- 2015年
- 家蚕是鳞翅目完全变态昆虫,在其变态过程中伴随着巨大的形态变化,包括旧组织的解离和新组织的形成,在这过程中有多种组织蛋白酶参与。组织蛋白酶是一类细胞内蛋白酶,广泛存在于各个物种中,包括组织蛋白酶B、H、L等几个亚家族。对家蚕组织蛋白酶的研究将有利于阐明家蚕变态发育的详细过程。通过对家蚕基因组数据库进行筛选,共在家蚕中鉴定到13种组织蛋白酶,并对这13种组织蛋白酶的基本信息和表达模式进行了分析。另外,利用家蚕基因芯片数据和荧光定量PCR分析,鉴定编号为BGIBMGA004622的基因为卵巢特异表达的组织蛋白酶L亚家族基因。该基因全长1 209 bp,编码402个氨基酸。经过序列分析,该酶与其他物种的组织蛋白酶L具有较高的同源性,其活性位点高度保守,且与鳞翅目的组织蛋白酶L在进化上聚为一支。同时,对该基因进行克隆并原核表达,结果显示重组蛋白以包涵体的形式表达。定量PCR结果显示,该酶在蛹发育初期表达量逐渐升高,至蛹3 d达到最高值,推测其可能参与卵巢与卵母细胞的发育过程。
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- 关键词：家蚕组织蛋白酶变态发育卵巢
- 家蚕芳基贮藏蛋白新成员BmSP3的基因克隆与表达分析被引量：1
- 2014年
- 贮藏蛋白在家蚕幼虫5龄盛食期的脂肪体中高量表达,为家蚕变态发育提供重要的营养物质,已报道的家蚕贮藏蛋白成员包括BmSP1和BmSP2,其中BmSP2为富含芳香族氨基酸的芳基贮藏蛋白(arylphorin)。从家蚕5龄幼虫脂肪体中鉴定并克隆了一个新的芳基贮藏蛋白基因,命名为BmSP3(GenBank登录号:JQ043182)。该基因ORF全长2 091 bp,编码697个氨基酸,BmSP3与BmSP2具有较高的序列相似性。半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测显示:BmSP3在家蚕5龄第3天幼虫的脂肪体、表皮、生殖腺和头部中均有表达,其中在脂肪体中的表达水平最高,并且同一组织中雌蚕的表达水平明显高于雄蚕;BmSP3在4龄末幼虫的脂肪体中就有表达,5龄中期表达水平开始明显增加,到上蔟前达到最高峰,之后急剧下降。Western blot检测显示:BmSP3在家蚕幼虫阶段主要存在于血淋巴中,化蛹时转运至脂肪体中,在羽化前逐渐被降解。BmSP3基因的转录及蛋白质合成、转运特征与BmSP2极为相似。
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- 关键词：家蚕基因克隆
- 家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂BmCPI40鉴定及时空表达特征被引量：1
- 2015年
- 【目的】鉴定家蚕(Bombyx mori)半胱氨酸蛋白酶抑制剂,并对其表达特征及调控进行分析,为深入研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂在家蚕变态发育中的作用提供数据支持。【方法】根据家蚕基因组数据库和Primer 5.0软件设计BmCPI40去信号肽引物,对家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂BmCPI40进行克隆,利用Clustal X和MEGA4.0软件对BmCPI40进行氨基酸序列和进化关系分析。采用原核表达系统对重组的BmCPI40进行表达、纯化和抗体的制备。运用RT-PCR和q PCR技术在核酸水平分析BmCPI40时空表达特征,利用Western和免疫荧光技术分别对BmCPI40进行蛋白水平检测和组织定位。q PCR方法检测20E诱导条件下BmCPI40在家蚕体壁中的表达量变化。用20E处理细胞,双荧光素酶报告系统对BmCPI40启动子序列活性进行检测,探究BmCPI40调控方式。【结果】鉴定、克隆、表达了家蚕的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,并命名为BmCPI40,其ORF全长366 bp,编码121个氨基酸,其中前18氨基酸构成其信号肽,编码蛋白质大小约为12 249.21 Da,等电点为4.43;进化树分析显示BmCPI40与一些病原微生物半胱氨酸蛋白酶的抑制剂结构域进化关系较近;BmCPI40的原核表达结果表明,重组的BmCPI40以可溶蛋白的形式表达;BmCPI40 5龄第3天各组织Western blot结果显示,其主要存在于家蚕表皮中,头部也有微量存在;时期检测结果表明,BmCPI40幼虫期表达量明显高于蛹期,眠期及变态期表达量下调明显,这与核酸水平的q PCR结果相一致,进一步的体壁免疫荧光定位证实BmCPI40主要存在于体壁的皮细胞周围;q PCR表明,20E诱导5龄第2天家蚕幼虫后,BmCPI40表达量减少;双荧光素酶检测结果显示,20E诱导细胞后,BmCPI40启动子序列荧光素酶活性下降,证实BmCPI40受到了蜕皮激素的抑制作用。【结论】BmCPI40的表达受到蜕皮激素的诱导下调,同时其可能参与了家蚕的蜕皮及变态发育过程。
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- 关键词：家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂蜕皮变态发育
