李成磊
- 作品数：58 被引量：310H指数：11
- 供职机构：四川农业大学生命科学与理学院更多>>
- 发文基金：四川省科技攻关计划四川省教育厅青年基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 四川道地中药金龙胆草叶片转录组特性研究被引量：10
- 2015年
- 本研究以道地药材金龙胆草叶片为研究对象,利用Illumina Hi Seq 2500高通量测序技术构建了金龙胆草转录组数据库,获得了42 903 527条Reads数据,通过与Nr、GO、COG、KOG、KEGG等数据库比对,最终获得了38 199个具有注释信息的Unigenes。其中以KEGG数据库为参考,依据代谢通路将Unigenes分成117类,包括萜类骨干合成、二萜类合成、黄酮类化合物生物合成及聚糖生物合成等路径,分别有99,23,161及70个Unigenes映射到上述途径,这些Unigenes可能参与金龙胆草主要活性成分三萜皂苷、特征成分苦蒿素、金龙胆草黄酮及金龙胆草多糖的生物合成。金龙胆草转录组测序工作的完成,极大地扩充了金龙胆草的基因资源,为药用功能基因的发掘与利用、遗传改良及有效成分含量的提高等研究奠定基础。
- 孙蓉刘姗唐自钟晋海军李成磊陈惠
- 关键词：金龙胆草代谢途径生物合成
- 一种金龙胆草离体细胞的培养方法
- 本发明公开了一种金龙胆草离体细胞的培养方法，包括以下步骤：外植体的选择与灭菌；金龙胆草叶片单细胞分离；建立金龙胆草悬浮细胞系；稳定继代培养。本发明周期较组织培养更短，同时不需要栽培金龙胆草，不受地理因素限制。
- 陈惠郑天润孙文君詹俊义刘燕汪茂佳刘默洋马招堂王涛唐自钟布同良吴琦李成磊
- 文献传递
- 一种金龙胆草组织培养方法
- 本发明公开了一种金龙胆草组织培养方法，包括以下步骤：外植体的选择与灭菌，外植体的接种与培养，愈伤组织诱导出芽，增殖分化培养，根的诱导，炼苗与移栽。本发明优化了灭菌条件，降低了外植体的污染率和死亡率；调整了激素种类及配比并...
- 陈惠王涛孙蓉郑天润刘默洋李成磊吴琦刘姗唐自钟何周凤
- 苦荞类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及其冷胁迫下的组织表达被引量：5
- 2014年
- 目的克隆苦荞Fagopyrum tataricum类黄酮3′-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3′H)基因全长cDNA序列,对该基因进行序列分析和原核表达,以及冷胁迫条件下该基因表达量和花青素定量测定。方法采用同源克隆和RACE技术从苦荞花蕾中克隆苦荞F3′H(FtF3′H);构建FtF3′H原核表达载体pET-30b(+)-FtF3′H,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达;采用半定量RT-PCR分析FtF3′H基因在冷胁迫下芽期苦荞不同组织的表达量,并采用分光光度计法测量花青素量。结果苦荞FtF3′H基因含有一个1 470 bp的ORF,编码489个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450家族;SDS-PAGE分析表明,目的蛋白相对分子质量54 000;芽期苦荞冷胁迫处理前后子叶和胚轴中FtF3′H表达量以及花青素量的变化分析表明,冷胁迫显著增强了FtF3′H的表达和花青素的积累(P<0.05)。结论成功克隆FtF3′H基因,并实现了FtF3′H基因的异源表达;芽期苦荞在冷胁迫下,可能通过提高FtF3′H基因表达量进而促进花青素的合成,参与其抗逆生理过程。
- 李双江朱冬寅秦东李成磊陈惠吴琦
- 关键词：苦荞基因克隆原核表达冷胁迫花青素
- 金荞麦花青素合酶基因的克隆及其表达与花青素量的相关性研究被引量：16
- 2014年
- 目的获取金荞麦花青素合成途径关键酶花青素合成酶(anthocyanins synthase,ANS)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦ANS基因在各组织中表达水平与花青素量的相关性进行分析。方法利用同源克隆技术获得ANS基因cDNA序列;采用半定量RT-PCR对ANS表达量进行分析;采用分光光度法测量花青素量。结果金荞麦ANS基因cDNA包含一个1 077 bp的ORF,编码358个氨基酸,命名为FdANS。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白与其他植物ANS蛋白氨基酸序列同源率较高。FdANS在花期金荞麦不同组织中的表达量分析表明,其表达量花>叶>茎>根,花青素量为花>叶>茎>根。结论在金荞麦中首次获得ANS基因的cDNA序列,编码蛋白具有ANS同源蛋白的典型特征。FdANS基因在金荞麦根、茎、叶和花中的表达量与花青素量具有相关性。
- 卜星星雒晓鹏白悦辰李成磊陈惠吴琦
- 关键词：金荞麦基因克隆CDNA序列花青素
- 甜荞苯丙氨酸解氨酶基因PAL的克隆及序列分析被引量：8
- 2011年
- 利用RT-PCR技术,首次从甜荞(Fagopyrum esculentum)中克隆得到苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的cDNA ORF序列,命名为FePAL。该序列长2169bp,编码722个氨基酸,与其他植物PAL基因同源性较高,为80%～97%,其推导的氨基酸序列含有PAL酶活性中心特征序列GTITASGDLVPLSYIA和多个脱氨基、催化活性位点。系统发育树表明,甜荞PAL基因与苦荞PAL基因聚类关系最近。
- 李成磊蒙华张晓伟陈惠邵继荣吴琦
- 关键词：甜荞苯丙氨酸解氨酶基因克隆
- 昆虫抗菌肽Gloverins的进化及抗菌差异性的研究被引量：1
- 2015年
- 本研究以抗菌肽Gloverins为研究对象,分析其抗性机理,并根据其编码区序列建立系统发育树,分析Gloverins的进化及结合生物信息学软件分析初步探索抗菌差异性产生的原因。结果表明:Gloverins与细菌或真菌表面的LPS,LTA,PG及昆布多糖相互作用是有效对抗微生物的必要条件。Gloverins的基因序列有一定的保守性,其中,玉米穗虫和棉铃虫同源性最高为98.4%,亲缘关系较近。家蚕中有4个完整的Gloverins基因,其中,Bm Glv1为其他3种同系物的祖先基因。大部分Gloverins对革兰阴性菌具有极强的杀灭作用,而甜菜夜蛾Gloverin(Se Glv)及烟草天蛾Gloverin(Ms Glv)由于其与Toll基因表达的依赖性,与LPS,LTA,PG和昆布多糖的结合位置,α-螺旋比例以及某些关键位点的氨基酸等因素,导致其对革兰氏阳性菌有抗菌活性,而对革兰阴性菌无活性的抗菌特性。
- 刘静刘丽丽李成磊王勤
- 关键词：抗菌肽抗菌活性进化分析
- 苦荞谷胱甘肽转移酶(FtGST)基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2012年
- 采用RACE技术,从苦荞(Fagopyrum tatarium)中克隆得到一个谷胱甘肽转移酶(Glutathione S-transferase protein,FtGST)基因。序列分析表明,FtGST基因全长DNA序列和cDNA序列编码区分别为746 bp和666 bp,DNA序列含有一个长度为80 bp(342-421 bp)的内含子;开放阅读框(ORF)长666 bp,编码221个氨基酸。生物信息学分析表明,FtGST基因推导的蛋白质含有Tau家族典型的底物结合口袋、谷胱甘肽结合位点(G-site)和疏水性底物结合位点(H-site)氨基酸残基,表明FtGST为Tau家族蛋白。
- 赵海霞李双江李成磊陈惠吴琦
- 关键词：苦荞谷胱甘肽转移酶基因克隆
- 金龙胆草鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达被引量：7
- 2016年
- 本研究根据金龙胆草转录组数据库筛选获得了皂苷合成途径的一个关键酶基因——鲨烯环氧酶(SQE)。以筛选获得的基因序列,设计带有限制性内切酶Bam HⅠ和XhoⅠ位点的特异引物,通过RT-PCR方法对SQE基因进行克隆,并利用限制性内切酶和T4连接酶的共同作用,构建p ET30b(+)-SQE原核表达载体,导入大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞中,当OD600达到0.6时加入终浓度为1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,最终以SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测蛋白的表达情况。结果表明本研究成功克隆了金龙胆草鲨烯环氧酶基因(Cb SQE),该基因开放阅读框为1 575 bp,编码525个氨基酸。系统发育树分析显示Cb SQE与毛曼陀罗及绞股蓝SQE基因亲缘关系比较近;酶切及测序结果表明,成功构建了Cb SQE基因原核表达载体;SDS-PAGE显示成功诱导表达了Cb SQE融合蛋白,蛋白分子量为57 k D,与理论预测结果相符合。本研究结果为解析金龙胆草的皂苷合成途径提供了一定的理论依据。
- 孙蓉罗吉刘姗唐自钟范明亮李成磊陈惠
- 关键词：金龙胆草克隆原核表达
- 苦荞糖基转移酶基因的克隆及活性鉴定被引量：2
- 2016年
- 糖基化修饰在调控各种小分子的溶解度、稳定性及生物活性中具有重要的作用。该研究基于苦荞转录组数据,克隆获得2条糖基转移酶基因(FtUFGT4和FtUFGT5),并对其在大肠杆菌中的表达产物进行酶催活性鉴定。结果表明:(1)获得的苦荞糖基转移酶基因cDNA分别为1 434和1 470bp,其编码蛋白同属于拟南芥糖基转移酶E类群,可能参与黄酮类化合物的糖基化。(2)多重序列比对表明,FtUFGT4和FtUFGT5蛋白C端都具有PSPG框,其催化活性位点分别是H17和H16;FtUFGT4和FtUFGT5都是典型的植物糖基转移酶GT-B结构,二者的蛋白模型能与矢车菊素和UDP进行分子对接。(3)FtUFGT4和FtUFGT5在大肠杆菌中获得了可溶性表达,薄层层析实验表明二者均具有催化矢车菊素糖基化为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的活性。
- 李茂菲周婧姚攀锋赵学荣李成磊吴琦
- 关键词：苦荞基因克隆活性鉴定
