李杨霞
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基因1b型不同准种株HCV核心蛋白原核表达质粒pTrc-CKS构建及诱导表达
- 2009年
- 目的为研究与不同准种HCV核心蛋白(Core)相互作用的细胞蛋白质组,构建并表达基因1b型的不同准种Core的原核表达质粒pTrc-CKS。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增并获得等长度片段的基因1b型的不同准种株丙型肝炎病毒(HCV)Core基因,氨基酸(aa)长度分别为癌中心株(T):1～172 aa、癌旁株(NT):1～172 aa及C191(HCV-J6):1～172 aa。扩增产物用BamHⅠ及EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达质粒pTrc-CKS中。阳性克隆转化到大肠埃希菌Top 10F’中,异丙基-β-D-S-代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得融合蛋白CKS-Core-His,经Ni2+10F’柱纯化并经Westernblot验证。结果PCR及双酶切验证表明3个基因为1b型的不同准种Core基因成功构建到原核质粒pTrc-CKS中,体外诱导并获得了相应的融合蛋白。结论构建不同准种Core基因的原核表达质粒获得成功,体外诱导表达并纯化获得了CKS-Core-His融合蛋白,为后续研究与Core相互作用的细胞蛋白质组奠定了基础。
- 汪明珊颜学兵周林福侯晓丽李杨霞温晓芳姜云水陈智
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白质粒构建
- 7株不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白的差异研究
- 2012年
- 目的通过比较不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白(CORE)的差异,筛选出能高效表达CORE的原核质粒。方法用PCR扩增并获得CORE基因,扩增产物分别构建到7种不同原核表达质粒中,重组质粒用IPTG诱导表达,聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)初步鉴定表达产物,并经Western blot验证。结果 PCR及双酶切验证表明CORE基因成功构建到7种原核质粒中,SDS-PAGE验证各融合质粒表达目的蛋白存在差异,其中pTrc-CKS-CORE及Pmbp-C-CORE可见相应的融合蛋白表达,以pTrc-CKS-CORE表达量高,表达产物经Western blot验证表达成功。结论成功构建7株不同CORE原核表达质粒,各融合质粒表达CORE存在较大差异,筛选出高表达CORE质粒,为下一步研究奠定基础。
- 汪明珊颜学兵周林福李杨霞
- 关键词：丙型质粒构建
