公共文化服务平台

共 7 条记录，以下是 1-7

全选清除导出

排序方式：

新型慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞基因转导中的应用被引量：1: 2011年; 背景:构建一个组成性表达某特定基因同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒载体目前未见报道。目的:观察新型慢病毒载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP在人骨髓间充质干细胞基因转导中的表达。方法:通过PCR在PEDF基因的两端加上attB位点,构建表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP,将表达载体与包装质粒(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞。通过多次感染的方法将慢病毒载体导入人骨髓间充质干细胞,转导后第7天开始使用1～5mg/L嘌呤霉素筛选5d,得到表达PEDF和EGFP的人骨髓间充质干细胞,并进行Western、Elisa的鉴定分析。结果与结论:经PCR和测序证实,慢病毒表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP构建成功;将其成功导入人骨髓间充质干细胞,经过筛选获得纯化的过表达PEDF基因的绿色荧光细胞群。; 卢晓芳杜晶春李磊赖文玉张秀明李伟强杨霞项鹏; 关键词：慢病毒人骨髓间充质干细胞 PEDF EGFP

具有抗血管新生活性的K5突变体GST-K5M5基因的构建、表达及纯化被引量：1: 2013年; 目的构建可溶性的人纤溶酶原Kringle 5(K5)突变体GST-K5M5基因,并在单位体积的原核系统中获得高表达、高纯度、可水溶的融合GST-K5M5蛋白粉针剂。方法 K5M5突变体基因(模板已经对K5N端5个带负电的酸性氨基酸进行中性氨基酸丝氨酸的中性突变),通过PCR从本实验室保存的pET22b(+)/K5mut5 cDNA模板中扩增得到,再克隆到pGEX-4T-1/BL21(DE3)原核表达系统中。用自动诱导培养系统诱导其表达,提高产量。通过GST树脂亲和层析柱分离,双蒸水透析纯化,再制成冻干粉剂保存。结果该重组GST-K5M5蛋白的分子量为37000Mr,通过SDS-PAGE和Western-blot可以检测到其存在。冻干粉复溶的GST-K5M5呈剂量依赖抑制内皮细胞的增殖。结论在以前的研究基础上设计并用自动诱导培养的方法在大肠杆菌中表达纯化出了GST-K5M5融合蛋白,得到的GST-K5M5蛋白产量高、纯度高、可溶性好、生物学效应强,且方法简便、经济,为工业大规模发酵提供了基本参数。; 黄莉钧石丁波姚亚超李磊戴智育张婷高国全杨霞; 关键词：冻干粉

抗新生血管蛋白KBP多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2: 2011年; 目的激肽释放酶结合蛋白(Kallikrein-binding protein,KBP)具有抑制血管新生的高活性,但目前尚无KBP的特异性抗体,限制其进一步研究。本研究拟制备高灵敏度和高特异性的KBP抗体并对其进行初步评估。方法构建含大鼠源性KBP序列的pET-28a重组载体的大肠杆菌BL21(DE3),在此基础上,扩增表达菌,经异丙基B.D一硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得KBP重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot方法对KBP进行鉴定。以纯化产物为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗KBP血清,亲和纯化获得多克隆抗体。应用Elisa和Western-blot方法检测纯化抗体的效价和特异性。结果 KBP融合蛋白得到高表达,且纯度大于85%。用该融合蛋白免疫大白兔后得到的抗KBP抗体,效价达1∶512 000,并特异性识别大鼠和人组织中天然的KBP蛋白。结论以纯化的KBP重组蛋白为抗原,获得KBP多克隆抗体,具有较好的效价和特异性,为KBP功能和作用机制的深入研究提供了必要的工具。; 陈易斐黄莉钧李磊戴智育程锐杨霞高国全; 关键词：多克隆抗体制备

RNA干扰抑制登革病毒复制的研究被引量：2: 2010年; 为了研究RNA干扰(RNAi)对Ⅰ型登革病毒(DENV-1)在白纹伊蚊C6/36细胞内复制的影响,本研究设计并合成针对I型登革病毒Pr M基因的小干扰RNA,以脂质体法转染入C6/36细胞后,用DENV-1感染已转染的细胞,观察细胞病变效应,MTT法检测细胞存活率,荧光定量RT-PCR检测登革病毒RNA含量。结果表明:转染siRNA的C6/36细胞在受登革病毒攻击7天后仍无明显细胞病变效应,细胞存活率比对照组提高2.26倍,细胞内登革病毒RNA拷贝数比对照组降低约97.54%。说明利用RNA干扰技术能有效抑制登革病毒核酸在C6/36细胞内复制,并对细胞具有一定保护作用,为登革热的防治提供了新的思路。; 岳锦亚吴新伟伍业健李向忠蒋力云李巧艳李磊杨霞; 关键词：登革病毒 C6/36细胞 RNA干扰荧光定量PCR

2009-2011年广州环境与临床标本中诺如病毒的分子流行病学特征被引量：4: 2013年; 目的调查2009--2011年广州诺如病毒的分子流行病学特征。方法分别收集广州市2010年1月至2011年5月的环境水样183份、2009年6月至2011年6月的海产品1162份和2009年7月至2010年12月的腹泻患者粪便标本1066份，以实时荧光定量逆转录PCR（qRT—PCR）检测诺如病毒，对扩增阳性标本测序后与GenBank中的诺如病毒参考株比较，绘制系统进化树。结果环境水样中诺如病毒阳性率为19．67％（36／183），海产品中的阳性率为8．26％（96／1162），腹泻患者粪便标本中的阳性率为37．05％（395／1066）；扩增阳性样品中的诺如病毒可分为10株代表株，其中7个代表株（共208份标本）的基因型为G24型，并且水样、海产品和粪便标本同源性很高，相似度达94％～100％。结论广州诺如病毒流行优势株为G24型，同时标本中阳性率较高。; 罗兰吴新伟刘于飞李巧艳谢华萍伍业健李磊蒋力云杨霞; 关键词：诺罗病毒分子流行病学聚合酶链反应

一种抑制I型登革病毒复制的重组慢病毒: 本发明涉及一种抑制I型登革病毒复制的重组慢病毒，该慢病毒含有基于I型登革病毒prM基因保守区序列设计合成的表达shRNA，该shRNA在宿主细胞中经Dicer酶等加工转变成针对prM基因的siRNA，干扰prM蛋白的表达...; 吴新伟李磊蒋力云伍业健杨智聪; 文献传递

表达登革病毒prM基因小干扰RNA的Vero细胞系的建立被引量：1: 2011年; prM蛋白是登革病毒膜蛋白M的前体,膜蛋白M对病毒的组装与成熟有重要作用,针对prM基因设计的小干扰RNA(siRNA)可短期抑制登革病毒复制.为了达到长期抑制登革病毒的效果,本研究构建了插入prM siRNA序列的重组慢病毒,利用流式细胞术分选以及杀稻瘟霉素抗性,筛选出稳定表达prM siRNA的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)系.经逆转录PCR及测序验证siRNA序列表达正确.Vero细胞中prM siRNA的表达率约为97.6%.当受到登革病毒攻击时,表达prMsiRNA的Vero细胞能够明显抑制登革病毒prM基因的表达,并抑制登革病毒在Vero细胞中的复制.建立的Vero细胞系可用于RNA干扰防治登革病毒感染的进一步应用研究.; 李磊吴新伟伍业健罗兰蒋力云杨霞; 关键词：慢病毒登革病毒 RNA干扰 VERO细胞

全选清除导出

共1页<1>

李磊