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猪圆环病毒Ⅱ型ORF4基因的转录分析: Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的主要病原,同时与猪群中许多传染病密切相关,严重威胁养猪业的健康发展。PCV2的致病机制目前仍不十分清楚,这与尚未有效筛选出与PCV2病原性相关的遗传致病因...; 董沁芳; 关键词：ORF3基因转录分析; 文献传递

同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒和伪狂犬病毒连接酶检测反应-PCR基因芯片检测方法的建立被引量：3: 2011年; 为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法。首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5-dCTP标记方法的灵敏度。结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记。利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6%～100%。该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台。; 郭瑶汪平董沁芳程菊会徐辉丁先锋郭江峰姜永厚; 关键词：通用芯片猪病毒

猪圆环病毒2型全基因组的克隆及病毒拯救: 2018年; 为构建猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型(PCV2)感染性DNA克隆,以淋巴结病料组织中分离的PCV2细胞培养适应毒株为材料,通过基因序列分析比对,在PCV2基因组序列XbaⅠ酶切位点区设计重叠引物,进行全长扩增并克隆至pMD-18T和pBluescript SK,获得载体pMD-PCV2和pBluescript SK-PCV2。将pMDPCV2重组质粒大量扩增后,用XbaⅠ切出PCV2全基因组,在体外用T4DNA连接酶使其自环化。通过脂质体法将PCV2自环化产物转染至PK15细胞,并且经15次连续传代,分别用PCR、RT-PCR和间接免疫荧光测定(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测到PCV2的复制、转录和蛋白表达。该研究成功构建具有感染性的PCV2全基因组DNA,为PCV2致病机理和基因功能研究奠定基础。; 王紫凝高章照董沁芳全滟平姜永厚; 关键词：猪圆环病毒2型细胞转染病毒拯救

多重实时荧光PCR同时检测五种马铃薯病毒的方法: 本发明公开了一种多重实时荧光PCR同时检测五种马铃薯病毒的方法，包括以下步骤：1)、分别合成马铃薯X病毒--PVX、马铃薯Y病毒--PVY、马铃薯卷叶病毒--PLRV、马铃薯A病毒--PVA和马铃薯S病毒--PVS的所对...; 姜永厚程菊会董沁芳郭江峰丁先锋

猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用: 2012年; 为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。; 董沁芳郭瑶汪平程菊会徐辉丁先锋郭江峰姜永厚; 关键词：猪细小病毒

马铃薯卷叶病毒的RT-LDR-PCR检测: 2011年; 马铃薯卷叶病毒（Potato leaf roll virus,PLRV）属黄症病毒科Luteoviridae黄花病毒属Polerovirus,是目前严重影响马铃薯产量与品质的病毒,其分布局限于寄主植物的韧皮部,且含量非常低,难于提纯,这给PLRV检测带来很大的困难[1]。; 汪平郭瑶程菊会董沁芳商晗武姜永厚; 关键词：马铃薯卷叶病毒 PCR检测马铃薯产量 LEAF 寄主植物 PLRV

改变PCR产物Tm值达到多重荧光PCR的方法和用途: 本发明公开了一种准确、快速改变PCR产物Tm值达到多重荧光PCR的方法；在原有不同扩增片段Tm值的基础上，选择性地挑选至少1种目的片段小的产物，并在所述产物原有上下游引物5’端基于引物设计原则有针对性地添加碱基，当期望产...; 姜永厚程菊会董沁芳郭江峰丁先锋; 文献传递

多重实时荧光PCR同时检测五种马铃薯病毒的方法: 本发明公开了一种多重实时荧光PCR同时检测五种马铃薯病毒的方法，包括以下步骤：1)分别合成马铃薯X病毒--PVX、马铃薯Y病毒--PVY、马铃薯卷叶病毒--PLRV、马铃薯A病毒--PVA和马铃薯S病毒--PVS的所对应...; 姜永厚程菊会董沁芳郭江峰丁先锋; 文献传递

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董沁芳