司马健
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京师范大学校科研和教改项目教育部基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人TRAIL胞外片段的原核表达系统选择及蛋白复性研究
- 2006年
- 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段,将之克隆至原核表达载体pET-30a、pQE-30和pJLA503中,上述重组载体经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE鉴定显示pET-30a系统表达效率最高,目的蛋白占菌体总蛋白含量的40%左右;采用透析法或梯度稀释法对TRAIL胞外区片段包涵体进行复性,非还原SDS-PAGE的结果显示梯度稀释法明显好于透析法;纯化后的TRAIL胞外区片段蛋白具有明显的生物学活性,效果与标准品相似;通过添加不同的折叠促进剂对复性效率影响的研究,确立了TRAIL胞外区片段适宜的复性方法,复性效率达75%～80%.
- 吴冬梅金丽娜刘顺谊司马健邰一琳吴一凡乔波殷志敏
- 关键词：TRAIL蛋白表达复性细胞凋亡
- （一）hsTRAIL基因的克隆表达、载体选择及蛋白复性研究 （二）谷胱甘肽S-转移酶（GSTp）半胱氨酸的定点突变及其在293细胞中的功能研究
- 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库扩增出编码114-281位氨基酸的TRAIL基因片段/(hsTRAIL/)，将之克隆至原核表达载体pET30a、pET25b和pJLA503中，构建成重组载体pET30a／hsTRAIL...
- 司马健
- 关键词：TRAIL
- 文献传递
- 谷胱甘肽S-转移酶Pi在MAPK途径中的调节作用被引量：5
- 2004年
- 谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是细胞内降解生物异源物质(xenbiotics)的一类酶,GSTπ/GSTpi/GSTp是人体内的一种重要活性亚型;有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径能够调节真核细胞凋亡、增殖、分化和应激。1999年国际上首次报道GSTpi能够在MAPK信号途径中起调节作用,其作用机制如下:在正常生长条件下,GSTpi以单体形式与JNK(c-Jun N-terminal kinase)形成复合物,抑制JNK活性;UV照射或H_2O_2处理细胞后,GSTpi自身形成二聚体/多聚体,导致GSTpi-JNK复合物解离,JNK的抑制被解除,JNK被磷酸化激活后激活转录因子c-Jun,c-Jun的激活能进一步促进GSTpi基因的转录,进而合成新的GSTpi蛋白单体,该单体又能反馈抑制JNK。后续研究发现GSTpi也能够抑制JNK激酶的上游激酶ASK1的活性。上述研究揭示GSTpi酶在细胞内除能通过降低异源物质而改变细胞的ROS平衡外,其蛋白本身还具有特异性地抑制MAPK信号转导途径中JNK激酶和JNK上游激酶的新功能。
- 朱键谈莹何兰司马健殷志敏
- 关键词：谷胱甘肽S-转移酶GSTS细胞MAPK途径蛋白激酶
- 人谷胱甘肽 S-转移酶pi(GSTp)中半胱氨酸对其在细胞氧化应激下功能的影响被引量：4
- 2004年
- 利用PCR定点突变技术构建人GSTp三种半胱氨酸突变体C^(47/101)、C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)。将CSTp 野生型和突变体表达质粒转染293细胞,以CDNB 为底物测定胞内GST 的转移酶活性,结果显示各类突变体均明显抑制了细胞内源性CST 的催化活性,具有显著的负显性(dominant nega-tive)突变体的功能;将CSTp 野生型和突变体与c-Jun、NF-kB 和p53的报告基因载体共转染,通过萤光素酶活性测定发现突变体C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)能明显激活c-Jun 和p21的转录活性;Western印迹分析显示突变体均能上调细胞内p21蛋白的水平,细胞存活率的测定表明GSTp 突变体能增强293细胞对H_2O_2刺激的敏感性;实验结果表明半胱氨酸残基对于维持GSTp 在对抗细胞氧化应激过程中的保护作用至关重要。
- 司马健何兰朱键薛彬邰一琳张双全殷志敏
- 关键词：半胱氨酸定点突变氧化应激
- 耐热嗜酸古细菌Sulfolobus acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的表达调控和性质研究被引量：2
- 2003年
- 古细菌Sulfolobusacidocaldarius细胞内谷氨酰胺合成酶的表达量随着培养条件的改变有较大差异,RNA印迹表明,该差异是在mRNA水平受到调控.经DEAE Sepharose和SephacrylS 30 0两步分离酶蛋白,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和凝胶过滤测定分子质量,表明该酶为 12个相同亚基组成,分子质量为 6 30ku的多聚体.该酶的最佳pH为 7 3;对羟胺、谷氨酰胺、ADP和Mn2 + 的Km 值分别为 3 5mmol/L、1 3mmol/L、0 15mmol/L和 0 2 4mmol/L;其γ 谷氨酰转移酶活性和生物合成酶活性的最佳温度均为 90℃.Arrhenius曲线表明,γ 谷氨酰转移酶的活化能为4 7kJ/(mol·K),生物合成酶的活化能分别为2 9kJ/(mol·K)(4 0～ 75℃)和 10kJ/(mol·K)(5 5～ 90℃).对该酶的抑制剂研究发现,与其他来源的谷氨酰胺合成酶不同,甘氨酸、L 丙氨酸能明显抑制S.acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的活性,而常规的抑制剂如L 色氨酸、L 组氨酸、5′ AMP却没有抑制作用,甘氨酸、L 丙氨酸的抑制作用为竞争性抑制。
- 殷志敏陈群英司马健吴一凡张双全
- 关键词：谷氨酰胺合成酶纯化热稳定性抑制剂
