殷志敏
- 作品数：58 被引量：248H指数：8
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京师范大学校科研和教改项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 生物酶法合成L-茶氨酸和聚谷氨酸的高效同步分离纯化被引量：3
- 2011年
- 利用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GGT,EC 2.3.2.2)催化,以谷氨酰胺和乙胺为底物进行酶反应.反应后主要成分为L-茶氨酸和聚谷氨酸(polyγ-glutamic acid,PGA),杂质有氯离子、乙胺以及少量谷氨酰胺和谷氨酸.通过弱酸性阳离子树脂和弱碱性阴离子树脂双柱交换层析,使L-茶氨酸与聚谷氨酸、乙胺和氯离子分离,得到进一步纯化,同时可以得到极有经济价值的副产品聚谷氨酸.本研究结果为重组大肠杆菌γ-GGT应用于工业化生产茶氨酸提供了一定的参考依据.
- 忻寅强鲁昌燕王期浦荷芳殷志敏
- 关键词：聚谷氨酸Γ-谷氨酰转肽酶离子交换
- 乳糖诱导大肠杆菌中重组谷氨酰胺合成酶的表达被引量：6
- 2006年
- 以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶(L-谷氨酸:氨连接酶,G lutam ine Synthetase,GS EC 6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象,借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7 lac启动子控制的重组目的产物蛋白的表达规律进行了优化研究,分别比较了最佳诱导起始生长量、所需乳糖的浓度、诱导持续时间、补加乳糖和氨苄青霉素及不同培养基等参数对重组产物表达的影响.实验结果表明,对于T7 lac启动子控制的重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到很好的诱导表达效果,诱导产物的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近.本研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组大肠杆菌谷氨酰胺合成酶工业化生产提供了一定的参考依据.
- 刘俊红刘顺谊殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶原核表达乳糖IPTG
- 高效转化谷氨酰胺合成L-茶氨酸的大肠杆菌菌株及其应用
- 本发明涉及微生物学领域，具体涉及一种生物转化合成茶氨酸的大肠杆菌菌株及其应用。所说的高效转化L-谷氨酰胺和乙胺的大肠杆菌，是大肠杆菌(Escherichia coli)南师一号CCTCC No.M 209166。该菌株高...
- 殷志敏沈青红吕志祥王正才傅珒张正平
- 文献传递
- 重组人TRAIL胞外片段的原核表达系统选择及蛋白复性研究
- 2006年
- 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段,将之克隆至原核表达载体pET-30a、pQE-30和pJLA503中,上述重组载体经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE鉴定显示pET-30a系统表达效率最高,目的蛋白占菌体总蛋白含量的40%左右;采用透析法或梯度稀释法对TRAIL胞外区片段包涵体进行复性,非还原SDS-PAGE的结果显示梯度稀释法明显好于透析法;纯化后的TRAIL胞外区片段蛋白具有明显的生物学活性,效果与标准品相似;通过添加不同的折叠促进剂对复性效率影响的研究,确立了TRAIL胞外区片段适宜的复性方法,复性效率达75%～80%.
- 吴冬梅金丽娜刘顺谊司马健邰一琳吴一凡乔波殷志敏
- 关键词：TRAIL蛋白表达复性细胞凋亡
- 耐热嗜酸古细菌谷氨酰胺合成酶基因的克隆、诱导表达和活性测定被引量：4
- 2002年
- 采用DEAE Sepharose及SephacrylS 30 0柱分离纯化了耐热嗜酸古细菌Sulfolobusacidocaldarius谷氨酰胺合成酶 (E 6 .3.1.2 ,Sac GS) .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分子质量为 5 3ku的单一条带 .测定其N端氨基酸序列为PGLPKNEHEALEFLKSNNIKWVDLQ ,与其他古细菌谷氨酰胺合成酶的氨基酸序列进行比较后 ,发现均存在ATP结合保守序列TFMPKP (I/L/F) (F/P/Y) (G/R) .采用碱基的简并性设计出一对简并引物 ,以Sulfolobusacidocaldarius的基因组DNA为模板进行PCR扩增 ,获得 780bp的DNA片段 ,经克隆测序后确定为谷氨酰胺合成酶基因片段 ,以地高辛标记的该片段为探针 ,将Sulfolobusacidocaldarius基因组DNA用不同的限制性内切酶分别进行单双酶组合切割 ,然后进行DNA印迹分析 ,选出了 2 4kb的BamHⅠ /HindⅢ双酶切片段 ,并克隆到pBluescriptKS+ 质粒中 ,通过菌落原位杂交获得阳性克隆 ,进行DNA全序列测定后 ,得到完整的1 5kb的谷氨酰胺合成酶全基因序列 ,再将其克隆到 pET3c载体中 ,在大肠杆菌BL2 1中进行诱导表达并进行相应的活性测定 ,其酶活力的最适温度为 90℃ .
- 殷志敏闫淑珍戴谷吴一凡张双全
- 关键词：谷氨酰胺合成酶基因基因克隆活性测定
- 利用酵母下脚料高效表达重组谷氨酰胺合成酶研究被引量：2
- 2008年
- [目的]为了降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。[方法]利用酵母下脚料制得废酵母基来培养BL21(DE3)-pET28b-glnA,用乳糖诱导合成GS,并对诱导生长点、诱导浓度、诱导时间、添加碳源氮源以及所得GS的可溶性和酶活进行研究。[结果]酵母下脚料可以替代LB培养基诱导产生重组GS,其最佳诱导条件为:OD600=0.5,乳糖1 g/L诱导12 h;并不需要补加其他碳氮源,GS可溶性90%以上,催化Glu转化为Gln的转化率为94.5%。[结论]生产用高活性干酵母经过短期发酵后,酵母下脚料中的营养活性物质依然很丰富,可以用来培养大肠杆菌诱导目的蛋白表达,从而降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。
- 张正平徐健红殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶乳糖谷氨酰胺
- 1，6‑二磷酸果糖在制备治疗酒精肝损伤药物中的应用
- 本发明公开了1，6‑二磷酸果糖在制备治疗酒精肝损伤药物中的应用，相对于现有技术，本发明为肝脏疾病的治疗特别是酒精肝的治疗找到了新的有效药物。FDP在酒精肝损伤中的应用，能够有效控制酒精肝损伤，避免其进一步发展。FDP作为...
- 殷志敏吴翼飞罗兰
- 文献传递
- 国产717阴离子树脂对酶法合成L-谷氨酰胺的分离与纯化被引量：2
- 2008年
- 目的:从酶法反应液中分离和纯化谷氨酰胺,并为工业化生产谷氨酰胺提供一定的依据;方法:根据谷氨酸和谷氨酰胺电离常数的差异,采用国产717强碱性阴离子Cl-型拄,经预处理,离交分离,浓缩结晶,75%乙醇洗涤并干燥;结果:反应液中谷氨酰胺总提取收率为60.3%,纯度为97%;结论:此方法能有效地降低纯化的成本,并维持较高得率和纯率。
- 赵宁伟胥俊峰贾晓鹤殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺离子交换纯化
- L-茶氨酸对H_2O_2致L02细胞损伤的保护作用及其机制研究被引量：13
- 2014年
- 研究L-茶氨酸对肝细胞损伤的保护作用及其机制。利用H2O2诱导的L02肝细胞损伤模型,分别用MTT法检测细胞存活率、测定LDH、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测Caspase-3和PARP蛋白表达及Bax/Bcl-2比值的变化,评价L-茶氨酸是否能保护H2O2诱导的肝细胞损伤。结果表明,L-茶氨酸能提高H2O2损伤的L02细胞存活率,减少LDH的渗漏,降低肝细胞凋亡,且L-茶氨酸通过抑制Caspase-3的激活和PARP的切割及Bax/Bcl-2比值的升高而发挥抗凋亡的作用。L-茶氨酸对肝细胞损伤有一定的治疗和保护作用。
- 李桂兰抗晶晶殷志敏
- 关键词：H2O2L02细胞
- 谷胱甘肽S-转移酶Pi在MAPK途径中的调节作用被引量：5
- 2004年
- 谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是细胞内降解生物异源物质(xenbiotics)的一类酶,GSTπ/GSTpi/GSTp是人体内的一种重要活性亚型;有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径能够调节真核细胞凋亡、增殖、分化和应激。1999年国际上首次报道GSTpi能够在MAPK信号途径中起调节作用,其作用机制如下:在正常生长条件下,GSTpi以单体形式与JNK(c-Jun N-terminal kinase)形成复合物,抑制JNK活性;UV照射或H_2O_2处理细胞后,GSTpi自身形成二聚体/多聚体,导致GSTpi-JNK复合物解离,JNK的抑制被解除,JNK被磷酸化激活后激活转录因子c-Jun,c-Jun的激活能进一步促进GSTpi基因的转录,进而合成新的GSTpi蛋白单体,该单体又能反馈抑制JNK。后续研究发现GSTpi也能够抑制JNK激酶的上游激酶ASK1的活性。上述研究揭示GSTpi酶在细胞内除能通过降低异源物质而改变细胞的ROS平衡外,其蛋白本身还具有特异性地抑制MAPK信号转导途径中JNK激酶和JNK上游激酶的新功能。
- 朱键谈莹何兰司马健殷志敏
- 关键词：谷胱甘肽S-转移酶GSTS细胞MAPK途径蛋白激酶
