王期
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学理学更多>>
- hAPOB的克隆、原核表达及抗体效价分析
- 2019年
- 【目的】人载脂蛋白B(hAPOB)是保持人体血脂恒定的重要蛋白,检测hAPOB具有重要的临床价值。【方法】本研究将hAPOB(97-526AA)序列连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-hAPOB(97-526AA)原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的80 kDa的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫湖羊,制备抗hAPOB血清并检测抗体效价。【结果】每次注射0.4 mg的原核表达抗原,湖羊抗血清的产生效果最佳;经间接酶联免疫分析(ID-ELISA)方法检测,原核表达蛋白免疫湖羊得到的hAPOB抗体效价为l︰40000。【结论】本试验获的抗血清能够满足商用标准,为后续拓展其应用奠定了基础。
- 徐志伟王期徐一然陈永霞徐小波于建宁
- 关键词：PGEX-4T-1抗血清抗体效价湖羊
- 利用hAPOA1原核蛋白生产兔多克隆抗体
- 2016年
- 将hAPOA1的阅读框连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成正确的pGEX-4T-1-hAPOA1原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的55.4ku的融合蛋白;将纯化后的包涵体融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗hAPOA1血清并检测抗体效价。结果表明,经间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)及蛋白质免疫印迹(WesternBlot)方法证实,获得的融合蛋白免疫新西兰大白兔得到了特异性的多克隆抗体,抗体效价为1∶40000,经济效益可观。
- 徐志伟赵杰刘伟忠刘照亭王期
- 关键词：原核表达新西兰大白兔多克隆抗体
- 生物酶法合成L-茶氨酸和聚谷氨酸的高效同步分离纯化被引量：3
- 2011年
- 利用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GGT,EC 2.3.2.2)催化,以谷氨酰胺和乙胺为底物进行酶反应.反应后主要成分为L-茶氨酸和聚谷氨酸(polyγ-glutamic acid,PGA),杂质有氯离子、乙胺以及少量谷氨酰胺和谷氨酸.通过弱酸性阳离子树脂和弱碱性阴离子树脂双柱交换层析,使L-茶氨酸与聚谷氨酸、乙胺和氯离子分离,得到进一步纯化,同时可以得到极有经济价值的副产品聚谷氨酸.本研究结果为重组大肠杆菌γ-GGT应用于工业化生产茶氨酸提供了一定的参考依据.
- 忻寅强鲁昌燕王期浦荷芳殷志敏
- 关键词：聚谷氨酸Γ-谷氨酰转肽酶离子交换
- 石蒜碱对内毒素致炎症小鼠体内体外COX-2的影响被引量：2
- 2016年
- 研究石蒜碱对内毒素导致的炎症小鼠体内体外COX-2的影响.通过内毒素诱导的小鼠建立急性肺损伤(ALI)模型,采用内毒素诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,利用Western blot技术检测小鼠肺组织以及RAW264.7巨噬细胞中COX-2蛋白的表达量.结果显示,石蒜碱能够在体内、体外显著抑制内毒素诱导的COX-2的蛋白表达,并加快COX-2蛋白的降解速度.石蒜碱能够有效降低内毒素导致的炎症小鼠体内、体外COX-2的蛋白水平.
- 抗晶晶李桂兰王期殷志敏
- 关键词：石蒜碱内毒素COX-2急性肺损伤RAW264.7巨噬细胞
- 溶氧反馈分批补料高密度培养枯草杆菌谷氨酰胺合成酶工程菌被引量：3
- 2010年
- 为了建立枯草杆菌谷氨酰胺合成酶基因重组工程菌BL21/pET28b-glnA的高密度培养工艺,首先以摇瓶培养为基础,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、pH值、诱导剂浓度及时间等进行优化,再扩大至B IOTECH-5BG（5 L）自动玻璃发酵罐培养,利用溶氧反馈补料策略进行分批补料,并在培养过程中保持20%-50%的溶解氧,7.0-7.5的pH,以及1.0 g/L乳糖诱导12 h,成功地进行了工程菌的高密度培养,最终细菌干重达到48.1 g/L,目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的55%,粗提物酶比活为10.35 U/mg,整个补料过程细菌比生长率稳定的控制在0.1 h-1左右.
- 张锋王期李桂兰徐健红洪素丽岳玲冯志勇殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶重组大肠杆菌分批补料培养
- 生物转化法重组谷氨酸脱羧酶合成γ-氨基丁酸被引量：7
- 2010年
- 成功构建了一个高效表达大肠杆菌谷氨酸脱羧酶GAD来源的重组质粒pET28a-gadA,并转化E.coli BL21(DE3),工程菌株经0.4 mmol/L IPTG或1 g/L的乳糖,37℃诱导表达8 h,粗酶液的酶活达到12 U/mL,大约是出发菌株E.coliK-12的60倍.工程菌1.15 U粗酶液以31 g/L L-谷氨酸钠为底物,37℃、pH4.0条件下反应4 h,γ-氨基丁酸的生成量达到19.57 g/L,L-谷氨酸钠的转化率为93%,从而为γ-氨基丁酸的生产提供了很好的前景.[关键词]谷氨酸脱氢酶(GAD),工程菌,酶法合成,γ-氨基丁酸(GABA)
- 王期抗晶晶忻寅强李桂兰殷志敏
- 关键词：酶法合成
- 生物转化法应用重组谷氨酸脱羧酶合成γ-氨基丁酸
- γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是一种以自由态形式存在的非蛋白质组成氨基酸,是哺乳动物中枢神经系统的抑制性传递物质。GABA具有多种生理功能,如降血压、预防癫痫、改善睡眠、抗抑郁、镇静安神...
- 王期
- 关键词：Γ-氨基丁酸谷氨酸脱羧酶大肠杆菌生物转化法酶法合成
- 酵母乙醇提取物对重组大肠杆菌外源蛋白表达的影响
- 2016年
- 酵母乙醇提取物是利用啤酒干酵母经培养发酵后提取的富含多种活性物质的混合物。初步实验研究发现,该物质对大肠杆菌蛋白表达有明显促进作用。为了进一步研究其对蛋白表达的作用,以E.coli BL21（DE3）/p GEX-4t-1-ggt为主要研究菌,以2 g·L-1乳糖作为诱导剂,研究酵母乙醇提取物对γ-GGT蛋白表达的作用。研究发现,分批添加终浓度10 g·L-1的酵母提纯提取物到2 g·L-1的乳糖为诱导剂的培养基中可以显著提高γ-GGT蛋白的表达及宿主菌的生长,蛋白表达量比1 mmol·L-1 IPTG诱导效果高10%~50%,菌体密度提高1.75~3倍左右。对于其他的重组蛋白及表达宿主有相似的作用。酵母乙醇提取物与乳糖组成的复合制剂可以有效替代有毒性的IPTG作为诱导剂的使用,为大规模诱导蛋白表达奠定了基础。
- 朱岩岩熊爱英桑秀梅王晶王期殷志敏
- 关键词：乳糖蛋白合成
- 一种γ -谷氨酰转肽酶与伴侣蛋白共表达重组质粒构建方法及应用
- 本发明提供了一种重组谷氨酰转肽酶共表达质粒的构建方法和应用、一种高效累积茶氨酸的方法。本发明通过伴侣蛋白与带有GST标签的谷氨酰转肽酶的共表达，成功构建了一株具有极高谷氨酰转肽酶酶活的大肠杆菌基因工程菌BL21/C4，共...
- 殷志敏王期蒋毅兰蕾
- 文献传递
- 利用谷氨酸棒状杆菌高效表达枯草芽孢杆菌的谷氨酰胺合成酶发酵生产L-谷氨酰胺被引量：2
- 2015年
- 谷氨酰胺合成酶(GS)是用于合成L-谷氨酰胺(L-Gln)过程中的关键酶,然而GS的酶活受到多种因素的影响,导致其酶活不强,产物L-Gln偏低.本研究以GS的基因为研究对象,构建谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)的高效表达系统.利用C.glutamicum中的两种强启动子:tac启动子(Ptac)和麦芽糖启动子(Pmal),比较不同启动子的作用下GS的酶活力;其次,为了避免腺苷酰化对C.glutamicum的GS的抑制作用,将GS的腺苷酰化位点突变成苯丙氨酸(Tyr405Phe);同时由于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的GS不受腺苷酰化作用的影响,故将Bacillus subtilis的GS基因导入到C.glutamicum的表达系统中,比较两种基因来源不同GS的酶活高低,以期达到高产L-Gln的目的.本研究第一次应用Bacillus subtilis来源的GS在C.glutamicum的系统中表达.最终的结果表明,在C.glutamicum的表达系统中,Ptac比Pmal的效果更好,来自Bacillus subtilis的GS比来自C.glutamicum的GS酶活力更高.重组菌BJ2有最高的酶活力和产量,L-Gln的最终产量达到32.5 g/L.
- 白婧吴桐思雨王期殷志敏
- 关键词：谷氨酸棒状杆菌谷氨酰胺合成酶
