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端粒酶逆转录酶启动子hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体的肿瘤靶向性分析: 2008年; 目的:体外研究siRNA-EGFP-hTERT/U6-PTZU6+1表达载体在肿瘤细胞中的靶向性.方法:常规培养稳定表达绿色荧光蛋白的肝癌SMMC-7721细胞株(EGFP-7721)和稳定表达绿色荧光蛋白的人正常成纤维细胞株HELF(EGFP-HELF).以PTZU6+1质粒转染EGFP-7721细胞和EGFP-HELF细胞为空白质粒组,siRNA-EGFP-PTZU6+1质粒转染EGFP-7721细胞和EGFP-HELF细胞为实验对照组,将siRNA-EGFP-hTERT/U6-PTZU6+1质粒转染EGFP-7721细胞和EG-FP-HELF细胞作为实验组,用real-time SYBR Green PCR和Western Blot鉴定siRNA-EGFP-hTERT/U6-PTZU6+1对两种细胞株的绿色荧光蛋白表达的影响.结果:正向和反向的重组质粒siRNA-EGFP-hTERT/U6-PTZU6+1转染EGFP-HELF细胞与空白质粒比较,EGFP基因表达无差异(P>0.05),而转染稳定表达绿色荧光蛋白的7721后仅反向的siRNA-EG-FP-hTERT/U6-PTZU6+1重组质粒抑制EGFP基因的表达(P<0.01).siRNA-EGFP-PTZU6+1质粒与空白质粒组比较,在EGFP-7721和EGFP-HELF细胞株间,EGFP基因的表达均具有统计学差异(P<0.01).结论:反向插入的siRNA-EGFP-hTERT/U6-PTZU6+1重组质粒在肿瘤细胞具有一定靶向性,为进一步探讨基因的靶向治疗奠定了基础.; 姜习新张鹏辉涂植光杨毅刘靳波; 关键词：端粒酶逆转录酶启动子 SIRNA表达载体靶向性

RNA干扰MRP2表达逆转结肠癌细胞对长春新碱的耐药性被引量：3: 2008年; 目的构建MRP2基因的真核表达载体pGenSil-1-MRP2-siRNA,并观察其转染人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/V前后MRP2基因和ABCC2蛋白表达变化以及对化疗药物敏感性变化。方法设计MRP2特异性siRNA的序列,克隆至pGenSil-1质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组质粒转染至HCT-8/V细胞中,用定量RT-PCR和Western blot检测MRP2的表达,MTT实验测定pGenSil-1-MRP2-siRNA和长春新碱对HCT-8/V细胞增殖抑制作用。结果在结肠癌耐药细胞HCT-8/V中,RNAi明显抑制了MRP2 mRNA及蛋白的表达,在相同浓度化疗药物的作用下,RNA干扰组细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0.01),表明细胞耐药性显著下降,对药物敏感性显著增高。结论成功构建了MRP2的siR-NA真核表达载体,并且对结肠癌耐药细胞MRP2的表达有明显抑制作用,取得良好的逆转耐药效果。; 杨毅姜习新王继见周洪伟; 关键词：多药耐药 MRP2 RNA干扰质粒

hTERT/U6嵌合启动子对肝癌细胞的靶向作用分析: 目的在课题组前期研究中,我们成功构建了hTERT/ U6嵌合启动子的shRNA表达载体。该启动子的特点是:对端粒酶表达阳性细胞具有靶向作用;并且可通过RNAi定向敲除或抑制靶基因表达。在本研究中,将进一步验证shRNA-...; 张鹏辉姜习新涂植光; 关键词：SHRNA表达载体肝癌靶向性; 文献传递

Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究被引量：1: 2009年; 目的:探讨sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白(albumin,ALB)、甲胎球蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达的影响。方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响。结果:血清饥饿状态下cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖。半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6h后线粒体膜电位较0h时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。AFP mRNA及蛋白分泌水平均明显降低,但对ALB mRNA及蛋白分泌影响不明显。结论:Cyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用。; 刘靳波余晓林文阳安姜习新李朴杨细媚涂植光; 关键词：细胞凋亡 CYCLOPAMINE

端粒酶逆转录酶启动子hTERT／U6嵌合启动子的siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：1: 2008年; 目的构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应。方法构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-7721),观察细胞荧光的变化及RT-PCR,Western blot筛选出更有效的siRNA-EGFP-PTZU6+1载体。PCR扩增端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase promoter,hTERT)启动子的核心序列,构建针对EGFP基因的hTERT/U6嵌合启动子siRNA表达载体(EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT),正向和反向插入的hTERT启动子各1个,并将其转染至EGFP-7721细胞中,RT-PCR验证其效应。结果RT-PCR,Western blot结果表明两重组质粒siRNA-EGFP-PTZU6+1转染EGFP-7721细胞后EGFP基因的表达无统计学差异,但与对照组比较均显著抑制了EGFP基因(P<0.01)。而且,RT-PCR结果显示,反向插入的重组质粒EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT与对照组相比显著抑制了EGFP基因的表达(P<0.05)。结论构建的含hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体在肝癌细胞中具有功能活性,为探讨基因的靶向治疗奠定了基础。; 姜习新张鹏辉刘北忠涂植光杨毅刘靳波; 关键词：端粒酶逆转录酶启动子 SIRNA表达载体

肿瘤患者外周血活化血小板测定及其临床意义被引量：8: 2008年; 目的:比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法:采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达量,以及服用阿司匹林后的变化。结果:肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于非肿瘤患者(P<0.05),有血栓形成的肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于无血栓形成的肿瘤患者(P<0.05),有血栓的肿瘤患者的活化血小板经过阿司匹林干预治疗后明显下降(P<0.05)。结论:测定活化血小板可以预测肿瘤患者存在高凝状态风险性的大小。同时,服用小剂量肠溶阿司匹林可以降低外周血活化血小板CD62p和CD63的值。; 郭金英陈彦文阳安姜习新刘靳波涂植光; 关键词：血栓

RNA干扰沉默STAT3基因对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721的影响被引量：1: 2008年; 肝细胞癌是常见的危害人类健康的恶性肿瘤之一，其发生、发展过程受诸多因素的影响。近年研究发现，信号转导和转录激活因子（STAT）具有强烈的抑制细胞凋亡，促进细胞增殖的作用，参与了人类恶性肿瘤的发生、发展和演变，其中以STAT3尤为活跃。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术，用短发夹样RNA（shRNA）设计并构建RNAi-DNA质粒，筛选稳定表达小干扰RNA（siRNA）的肝癌HepG2及SMMC-7721细胞株，体外研究siRNA稳定和特异性诱导肝癌STAT3基因转录后沉默并逆转其恶性表型的能力，从而探索肝癌治疗的新方法。; 郭金英文阳安姜习新刘靳波张艳亮涂植光; 关键词：RNA干扰 STAT3

人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆及表达被引量：1: 2007年; 目的扩增人幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)编码基因并构建其重组表达载体,进行核苷酸序列分析,并在E.coli BL21中表达,为疫苗的开发奠定了基础。方法利用PCR技术从Hp基因组DNA中扩增热休克蛋白A(HspA)基因片段,目的基因经SacⅠ和XhoⅠ双酶切、纯化后,插入pET32a(+)载体。以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21并表达。结果经PCR、酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp HspA编码基因,与GenBank报道的相比较,核酸同源性达98%。经SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白分子量约为33 KD,其中目的蛋白的分子量约为13 KD。结论成功地克隆并表达了Hp HspA编码基因,为HspA蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。; 郭金英陈彦刘靳波姜习新陈曼涂植光; 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白A 基因表达

端粒酶逆转录酶启动子hTERT//U6嵌合启动子siRNA表达载体的肿瘤靶向性实验研究: 背景和目的 RNAi技术在肿瘤基因治疗方面的研究已较广泛,但是siRNA不具有靶向恶性肿瘤细胞的能力,造成RNAi效应的不确定性。端粒酶在多种恶性肿瘤细胞中高表达,正常细胞中除生殖细胞和造血细胞等外大多无或低表...; 姜习新; 关键词：SIRNA表达载体 SIRNA 靶向性; 文献传递

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