曹宗喜
- 作品数：55 被引量：144H指数：6
- 供职机构：海南省农业科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 基于DNA-launched的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3
- 2016年
- 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,将PRRSV全基因组分6段克隆,构建获得6个重组质粒,先由A1和A2片段或B1和B2片段连接构成A片段或B片段,然后D、C、B和A片段依次亚克隆入pOKq载体。在基因组5′端和3′端分别加上CMV启动子序列和BGH终止信号肽,全基因组510位核苷酸突变引入遗传标记位点FseⅠ。测序正确的全基因组质粒命名为pOK-A2BCD。再将pOK-A2BCD质粒转染BHK-21细胞,拯救病毒通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,结果表明拯救病毒成功,为进一步研究PRRSV致病性等相关分子机制奠定了基础。
- 曹宗喜焦培荣谭树义叶保国亓文宝张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪瘟免疫失败的原因及防制被引量：2
- 2007年
- （一）机体状况
1．母源抗体存在干扰：如果母猪在配种前或分娩前进行了免疫，可将母源抗体通过初乳传给仔猪，母源抗体对初生仔猪有保护作用，但也会影响仔猪的免疫效果：即母源抗体的双重性。在给仔猪使用高质量的疫苗时，能否起到良好的免疫效果与母源抗体的效价有关。
- 曹宗喜潘全会师志海马明仑
- 关键词：免疫失败母源抗体初生仔猪防制猪瘟
- 7株鹅细小病毒的克隆序列分析与分子特性被引量：4
- 2009年
- 参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPV分离株的3对引物,利用PCR技术扩增7株小鹅瘟病毒的非结构蛋白基因和结构蛋白基因。然后将其克隆到pMD18-T载体上,筛选重组质粒并进行了序列测定及分析,测序结果表明,GPV分离株非结构蛋白基因由1884个核苷酸组成,编码627个氨基酸;结构蛋白由2199个核苷酸组成,编码732个氨基酸。拼接非结构蛋白和结构蛋白的全序列,不同毒株的同源性分别为94.3%～99.2%和92.6%～98.5%。表明目前国内的鹅细小病毒的同源性比较高,但是强弱毒株也存在一定的差别。
- 刘中勇李福伟曹宗喜李惠敏吴玄光张桂红
- 关键词：鹅细小病毒非结构蛋白基因结构蛋白基因
- 五指山猪和杜洛克猪全基因组选择信号差异分析被引量：5
- 2022年
- 旨在探究五指山猪和杜洛克猪免疫和脂质代谢相关基因的选择信号差异。本研究从海南国家级五指山猪保种场采集30头4月龄健康(10公,20母)五指山猪的耳组织进行全基因组重测序(whole genome sequencing,WGS),从NCBI数据库下载29头杜洛克猪全基因组重测序数据(SRA:PRJNA378496);通过生物信息学方法分析59个样本WGS数据的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNPs),进行SNPs过滤,定位SNPs在基因组的位置,分析其结构特征和基因型频率,并注释对应基因的功能;使用XP-CLR方法筛选五指山猪基因组受到强烈选择的区域,分析两个品种相关通路基因的功能差异。结果表明,五指山猪平均每个样本共筛选到36961902个SNPs位点,内含子区域分布最多,平均每个样本16729364个,约占45.26%,编码区(起始、终止密码子)平均有2073个SNPs;五指山猪受选择的基因组区域主要集中在免疫、代谢和神经功能相关通路;免疫反应通路中,9个基因(TGFBR2、IL26、IL15、BMPR2、TNFSF15、TNFSF4、TNFSF8、ACKR4、TNFRSF11B)功能区域SNPs位点在五指山猪中只存在一种突变纯合基因型,而在杜洛克猪大部分个体中存在3种基因型(野生纯合基因型、杂合子、突变纯合基因型),其中野生纯合基因型比例最高;脂类代谢通路中,关键调节基因IRS2、PRKG1、ADCY5的基因型频率与免疫反应基因类似。在五指山猪中突变纯合基因型比例为100%,在杜洛克猪中野生纯合基因型所占比例为48%~93%(14/29-27/29)。本研究筛选出与五指山猪免疫性状相关的候选基因9个、与脂类代谢相关的候选基因3个,发现五指山猪免疫、代谢和神经功能相关基因的受选择程度强于杜洛克猪,为揭示五指山猪特色性状形成的分子机制提供参考。
- 任钰为王峰王成张艳孙瑞萍刘海隆乔传民邢漫萍黄丽丽曹宗喜晁哲
- 关键词：五指山猪脂类代谢
- 靶向Lead sequence的RNAi抑制PRRSV复制
- RNA干扰(RNAi)技术是基因功能研究的有效工具，为了了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)lead序列在病毒复制中的作用，针对lead序列选取小干扰RNA(siRNA)位点，构建相应的短发夹RNA(shRNA)表达...
- 赵孟孟曹宗喜张民泽黄震谢杰熊孙龙张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒CD163受体功能域鉴定被引量：2
- 2016年
- 猪繁殖与呼吸综合征是危害养猪业重要传染病之一,CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染易感细胞受体。研究表明CD163受体的前2个SRCR区域与PRRSV感染无关。为确定PRRSV感染细胞过程中CD163受体关键SRCR区域,构建表达野生型CD163受体和缺失不同个数SRCR区域的CD163受体突变体质粒。将质粒转染BHK-21细胞24 h后,XH-GD株PRRSV感染细胞,进行间接免疫荧光(IFA)观察。结果显示,CD163前4个SRCR重复区缺失不影响PRRSV感染,SRCR5是PRRSV感染细胞所必须。为进一步研究CD163受体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用及与其他受体之间相互关系提供试验基础。
- 曹宗喜焦培荣林哲敏亓文宝张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒MARC-145细胞功能域
- 永生化猪视网膜色素上皮细胞的建立及初步应用
- 2024年
- 【目的】建立永生化猪视网膜色素上皮细胞系,为病毒学研究提供一种新的细胞材料。【方法】合成猪腺病毒3型E1基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo中,构建E1基因真核表达质粒pCI-neo-E1,进行PCR和测序鉴定。提取pCI-neo-E1质粒,转染原代猪视网膜色素上皮细胞,用新霉素G418筛选猪永生化视网膜色素上皮细胞系(RPECs)。检测RPECs的角蛋白18和19,通过细胞计数测定其生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,并对其进行染色体核型分析。分别将猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV77毒株、猪圆环病毒2型(PCV2)DBN-SX07株和猪伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株接种RPECs,同时将PEDV CV77毒株接种绿猴肾细胞(Vero细胞),将PCV2 DBN-SX07株接种猪肾细胞(PK15细胞),将PRV Bartha-K61株接种仓鼠肾成纤维细胞(BHK细胞),观察细胞病变效应(CPE),并采用间接免疫荧光法测定病毒的滴度。【结果】PCR和测序结果显示,真核表达质粒pCI-neo-E1构建成功。将pCI-neo-E1转染原代猪视网膜色素上皮细胞,经G418筛选得到永生化细胞株,该细胞株表达角蛋白18和19,传代50代仍保持上皮样细胞形态,增殖活性良好,细胞周期及染色体核型特征与正常的二倍体细胞一致。PEDV CV77毒株感染猪RPECs 24 h后,CPE明显,滴度为10^(5.25)TCID_(50)/mL,低于其在Vero细胞中的滴度(10^(8.125) TCID_(50)/mL)。PCV2 DBN-SX07毒株感染猪RPECs后可产生明显CPE,病毒滴度为10^(6.125)TCID_(50)/mL,略高于其在PK15细胞上的滴度(106.0 TCID_(50)/mL)。PRV Bartha-K61毒株感染猪RPECs后,CPE明显,病毒滴度为10^(8.75)TCID_(50)/mL,略低于其在BHK上的滴度(108.875 TCID_(50)/mL)。【结论】成功构建了永生化猪视网膜细胞系,可用于猪源病毒的培养,尤其是培养PCV2可产生明显CPE,易于观察,为后续开展疫苗工艺的提升提供了一种新的细胞材料。
- 唐青海刘博谢金文谢金文魏凤高翠翠曹宗喜曹宗喜张艳
- 关键词：永生化猪流行性腹泻病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病毒
- 犬免疫失败的常见原因
- 2006年
- 曹宗喜邢会杰佘利旋陈朝喜
- 关键词：免疫失败传染性疾病疫苗接种疫苗免疫接种免疫预防传染病
- 猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5重组杆状病毒疫苗的研究被引量：1
- 2010年
- 参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5。将外源基因分别插入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2。将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTME.coli感受态细胞中。提取高质量的重组质粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,将重组质粒转染Sf9细胞,获取重组病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2。通过间接免疫荧光检测证实了外源基因正确表达。重组杆状病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2对BALB/c小鼠的免疫试验结果显示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能够刺激小鼠机体产生免疫应答,产生抗体,并能持续较长时间。
- 张翔峰何逸民曹宗喜孔留五张得玉秦宏阳张桂红
- 关键词：猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒重组杆状病毒
- 广东地区猪源戊型肝炎病毒的检测和核苷酸序列分析被引量：2
- 2011年
- 为了检测广东地区部分猪场猪群中的猪源戊型肝炎病毒(HEV)RNA,试验利用反转录巢式聚合酶链式反应(RT-nPCR)并应用生物学软件将经扩增和测序得到的猪源HEV核苷酸序列与GenBank上的各个基因型HEV进行相似性比较分析。结果表明:5个样品中检测到HEV RNA,它们的相似性为85.1%～96.3%,与GenBank上基因Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型HEV序列的相似性分别为76.1%～80.5%、76.5%～79.4%、76.4%～80.2%、82.1%～97.7%。说明广东地区存在的猪源HEV可能属于在国内猪群中流行的基因Ⅳ型。
- 刘志刚曹宗喜张得玉秦宏阳张亮权孔维立吴欣伟于俊勇王文华于淼张桂红
- 关键词：基因亚型
