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张得玉: 作品数：19 被引量：79H指数：5; 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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猪圆环病毒2型CC株ORF3基因序列分析及真核表达: 2012年; 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)的核酸序列,设计了1对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中扩增出了ORF3基因,将其克隆到高效真核表达载体pEGFP-N2中,筛选出含有ORF3基因的重组质粒,命名为pEGFP-N2-ORF3。对此重组质粒进行测序分析,结果表明,克隆的ORF3基因与其他PCV2的ORF3核苷酸序列相似性为96.2%-99.0%,氨基酸序列同源性为90.5%～98.1%。将重组质粒纯化后转染COS-7细胞,用PCR方法扩增出了特征性的基因片段,并采用特异性单抗进行间接免疫荧光,结果转染pEGFP-N2-ORF3重组蛋白在细胞核和细胞浆中均有表达,尤其在细胞核中表达量较高,且对细胞有一定的毒性。本研究为进一步探讨ORF3的结构和功能提供理论依据。; 黄文明徐廷川张亮权张得玉张民泽张桂红; 关键词：圆环病毒2型 ORF3 真核表达

猪圆环病毒2型感染对小鼠脾脏中IFN-γ基因表达的影响被引量：2: 2009年; 本研究对PCV-2感染对小鼠组织中IFN-γ基因表达的影响进行了分析。分别取各基因RT-PCR扩增的回收产物进行序列稀释（10-1-10-6）,再进行实时荧光定量PCR扩增,扩增完毕后,进行熔解曲线分析,相对定量检测了PCV-2感染小鼠脾脏不同时段IFN-γ基因的表达水平。试验结果表明,得到定量标准曲线,起始模板浓度与Ct值之间呈良好的线性关系,-βactin基因标准曲线为y=-3.32x＋31.57,IFN-γ基因标准曲线为y=3.43x＋45.83,PCV-2感染小鼠后脾脏IFN-γ基因表达水平升高,但第14~28天IFN-γ基因表达水平呈下降趋势。; 何冉娅孙伟罗玉均冯春复何逸民张得玉孔留五张桂红; 关键词：猪圆环病毒2型小鼠脾脏 IFN-Γ基因

猪圆环病毒2型CC株ORF3基因的克隆与原核表达被引量：1: 2012年; 为原核表达猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF3编码蛋白,本研究采用PCR方法以PCV2的CC株的基因组DNA为模板扩增ORF3基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白约为31 ku,并且以包涵体形式存在;western blot分析表明,ORF3重组蛋白能够与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达的ORF3重组蛋白具有良好的反应原性。; 徐廷川张亮权张得玉齐海涛张民泽张桂红; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF3 原核表达

2007-2009年华南地区鸭肝炎病毒分离株流行病学调查及VP1基因变异分析: 为了分析华南地区鸭肝炎病毒（DHV）的遗传进化情况,本试验对2007～2009年华南地区各鸭场发病雏鸭进行DHV的病原学检测以及VP1基因扩增、克隆和测序,并运用生物信息学软件对VP1基因进行了序列分析。结果表明:所分离...; 何冉娅于淼张玉玲张得玉曹宗喜张桂红; 关键词：鸭肝炎病毒 VP1; 文献传递

广东省猪圆环病毒2型全基因组序列的比较和分析: 2011年; 参考GenBank发表的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）全基因组序列,设计引物,通过PCR技术,从广东地区疑似＂高热病＂病猪的组织中,扩增17株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定分析.结果表明,17个PCV2分离株基因组全长为1 767或1 768 bp.相似性比较发现,17个分离株之间的核苷酸相似性为96.7%-99.8%,与GenBank上已发表的国外分离株比较,相似性为95.6%-99.8%;17个分离株ORF2、ORF3的核苷酸相似性分别为89.5%-100%和97.5%-100%;系统发育树显示,17个毒株有2株属于a亚群,10株属于b亚群,5株属于d亚群.; 于俊勇徐廷川张得玉罗玉钧何逸民张桂红; 关键词：猪圆环病毒2型基因克隆

2007～2009年华南地区鸭肝炎病毒流行病学调查及分离株的VP1基因变异分析被引量：29: 2010年; 为了分析华南地区鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)的遗传进化情况,本试验对2007～2009年华南地区各鸭场发病雏鸭进行DHV的病原学检测以及VP1基因扩增、克隆和测序,并运用生物信息学软件对VP1基因进行了序列分析。结果表明:所分离的R、SS1、ZJ株为DHV-A、VP1 DHV-A参考毒株核苷酸序列相似性分别为93.8%～100%、93.7%～99.6%、91.7%～98.9%,氨基酸序列相似性分别为94.5%～100.0%、94.1%～99.2%、95.0%～99.2%。其余15株DHV-C分离病毒株与台湾新型DHV核苷酸和氨基酸序列相似性均在71.4%～72.0%和78.2%～79.0%之间,与韩国新型DHV相似性在94.0%～95.1%和91.6%～93.3%之间,与国内分离的新型DHV相似性均在97.9%～100.0%和97.5%～100.0%之间。VP1氨基酸序列比对分析表明:VP1的高变区主要分布在46～64、95～149、180～223位,尤其是C′末端,存在点突变或连续变异。在第145～146位,15株新型DHV毒株比3株Ⅰ型DHV多2个氨基酸(G和G)。小RNA病毒科的VP1蛋白中保守的RGD基序,在DHV中分别显示为SGD和QSD。结果表明,危害华南地区鸭场的DHV已经发生变异,且存在两种基因型毒株的流行。; 何冉娅于淼张玉玲张得玉曹宗喜张桂红; 关键词：鸭肝炎病毒

猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5重组杆状病毒疫苗的研究被引量：1: 2010年; 参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5。将外源基因分别插入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2。将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTME.coli感受态细胞中。提取高质量的重组质粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,将重组质粒转染Sf9细胞,获取重组病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2。通过间接免疫荧光检测证实了外源基因正确表达。重组杆状病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2对BALB/c小鼠的免疫试验结果显示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能够刺激小鼠机体产生免疫应答,产生抗体,并能持续较长时间。; 张翔峰何逸民曹宗喜孔留五张得玉秦宏阳张桂红; 关键词：猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒重组杆状病毒

广东地区猪源戊型肝炎病毒的检测和核苷酸序列分析被引量：2: 2011年; 为了检测广东地区部分猪场猪群中的猪源戊型肝炎病毒(HEV)RNA,试验利用反转录巢式聚合酶链式反应(RT-nPCR)并应用生物学软件将经扩增和测序得到的猪源HEV核苷酸序列与GenBank上的各个基因型HEV进行相似性比较分析。结果表明:5个样品中检测到HEV RNA,它们的相似性为85.1%～96.3%,与GenBank上基因Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型HEV序列的相似性分别为76.1%～80.5%、76.5%～79.4%、76.4%～80.2%、82.1%～97.7%。说明广东地区存在的猪源HEV可能属于在国内猪群中流行的基因Ⅳ型。; 刘志刚曹宗喜张得玉秦宏阳张亮权孔维立吴欣伟于俊勇王文华于淼张桂红; 关键词：基因亚型

2型猪圆环病毒感染对小鼠组织中Caspase3、Bak及Bcl-2基因表达的影响被引量：2: 2009年; Caspase3、Bcl-2、Bak是细胞凋亡过程中3种重要的调节蛋白,为研究感染猪圆环2型病毒(PCV2)后体内细胞的凋亡情况,本实验以BALB/c小鼠为实验模型,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测细胞凋亡的方法。结果表明实验组Caspase3的表达在各时间段里与对照组相比均呈上升趋势,提示了PCV2感染可以上调Caspase3水平,从而增加被病毒感染组织的细胞凋亡,而小鼠心、脑、脾等组织Bak基因表达明显上调,Bcl-2基因表达水平也伴随Bak基因而升高。这些结果揭示了PCV2感染BALB/c小鼠后,相关细胞凋亡基因在体内的作用与机制,同时为今后细胞凋亡的检测提供了新的方法。; 秦宏阳罗玉均张得玉冯春复何逸民张桂红; 关键词：PCV-2 CASPASE3 BAK

4株PRRSV GP5蛋白编码序列的序列测定和特性分析被引量：5: 2008年; 针对PRRSV ORF5基因组设计了1对特异性引物,利用RT-PCR的方法,对在南方地区分离的4株PRRSV ORF5基因进行了基因扩增,克隆到pMD18-T载体后测序,获得了4株PRRSV ORF5基因全长603bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对4株PRRSV ORF5基因序列进行了遗传进化分析,结果显示GD1、GD2、GD3、GD4株与美洲型参考株(VR-2332)的核苷酸序列同源性分别为87.1%、87.2%、87.1%和86.9%。利用系统进化树分析表明GD1、GD2、GD3、GD4株均属于美洲型。进一步采用序列分析软件对病毒结构蛋白推导糖基化位点比较,结果表明不同毒株GP5糖基化位点在基序和位置上均有所不同,这可能与毒株的毒力、免疫原性的差异相关,这些为更好地了解PRRSV的分子流行病学特征和抗原变异规律提供依据,同时为研制基因工程疫苗奠定了基础。; 秦宏阳曹宗喜汤国凯张得玉于淼孔维立张桂红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征 GP5蛋白特性分析

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