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广东地区猪链球菌宿主多样性调查被引量：1: 2014年; 通过调查广东地区不同宿主(猪肉类、鱼类、禽类、宠物等)体内猪链球菌带菌情况,以期评估猪链球菌的流行风险。分别从不同地区采集不同种类样本,分离培养猪链球菌,经PCR鉴定为阳性后,进一步进行生化试验及药敏试验分析。从采集的848份样本中共分离到31株猪链球菌,其中血清9型11株(占35.5%),血清2型、8型、18型、26型及31型各1株,且所分离的菌株均呈现多重耐药性。猪链球菌在多种不同宿主中均能检测到,特别是血清9型,提示可能带来的猪链球菌流行风险应予以重视。; 李淼谢乐新杨冬霞宋帅岳磊李春玲; 关键词：猪链球菌分子流行病学

副猪嗜血杆菌hhdA基因的克隆与分子特征: 根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌hhdA的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物，从分离的副猪嗜血杆菌中扩增其目的基因，将扩增产物纯化与pMD18-T载体连接并转化DH5α菌株，用凝胶电泳、PCR和BamH Ⅰ、Hin...; 宋帅李春玲李淼杨冬霞; 关键词：副猪嗜血杆菌分子特征; 文献传递

噬菌体展示技术筛选副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的抗原表位被引量：1: 2013年; 为了研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P5的抗原表位,应用噬菌体展示随机12肽库,以抗HPS外膜蛋白P5的单克隆抗体作为固相分子,进行了3轮筛选。对随机挑选出的10个分离间隔良好的噬菌斑进行ELISA和Western blot等检验,最终确定了4个各结果均为阳性的优势短肽。将4个短肽序列与GenBank中HPS外膜蛋白p5的序列进行比对分析,发现这些序列没有同源性或同源性较低,但竞争ELISA结果显示这些短肽与单抗的结合都能够被外膜蛋白P5有效的抑制。以上结果显示,通过噬菌体展示技术成功获得了4个HPS外膜蛋白P5的模拟表位,为后期开展以抗原表位为基础的诊断、表位疫苗等研究提供了依据。; 许达李春玲李淼宋帅杨冬霞陈金顶; 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白噬菌体展示模拟抗原表位

应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因: 引言副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是以多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征的格拉泽氏病(Glasser’s disease)的病原体,也是全球范围内影响养猪业的典型细菌性...; 李淼李春玲宋帅杨冬霞

副猪嗜血杆菌hhdA基因的克隆与分子特征: 根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌hhdA的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从分离的副猪嗜血杆菌中扩增其目的基因,将扩增产物纯化与pMD18-T载体连接并转化DH5α菌株,用凝胶电泳、PCR和BamHⅠ、Hind...; 宋帅李春玲李淼杨冬霞; 关键词：副猪嗜血杆菌分子特征; 文献传递

副猪嗜血杆菌OMP P5间接ELISA抗体检测方法优化被引量：2: 2012年; 利用副猪嗜血杆菌(HPS)OMP P5基因表达并纯化复性后蛋白作为包被蛋白,通过对最佳加样作用时间的确定和最佳酶标二抗反应时间等条件的探索优化,建立针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5(OMPP5)的间接ELISA抗体检测方法,通过对进行和未进行HPS免疫的健康猪血清的检测,证实了建立的间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强、反应快速准确等特点。; 臧莹安黄彩梅李婉雁李淼宋帅李春玲; 关键词：副猪嗜血杆菌酶联免疫吸附试验

表观健康的猪肉携带猪链球菌的调查被引量：3: 2012年; 猪链球菌病（SS）是由猪链球菌引起的人兽共患传染性疾病,给养猪业及公共卫生安全构成了严重的威胁。人和猪感染发病的临床症状相似。以往对猪肉进行食品安全检测的项目多集中在致泻大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌等食源性病原菌,检测过程中,偶尔也能分离到链球菌,但多数是没有致病性的。在经济高度发达的时代,食品安全越来越成为人们关注的焦点,本次通过对广州大型农贸市场销售的屠宰猪肉的随机抽样,初步了解表观健康的猪肉携带猪链球菌的情况和耐药性情况,为防范食源性猪链球菌病感染人及耐药性的传播提供理论依据。; 臧莹安谢乐新李家侨庞木生李淼宋帅李春玲; 关键词：猪链球菌病猪肉健康表观单增李斯特菌

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定被引量：4: 2014年; 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应，同时可以用于特异性的血清学诊断，本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa），P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段，PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定，设计了-套11个部分重叠的短肽，这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链，退火后插入表达载体pGEX-6p-1，与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描，鉴定出其表位位于”。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位，为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础，同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制，以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。; 李淼李春玲岳磊宋帅杨冬霞; 关键词：副猪嗜血杆菌抗原表位

抗原表位研究方法进展被引量：28: 2010年; 抗原表位是抗原分子中的主要功能单位,能有效刺激机体的细胞免疫和体液免疫。随着免疫学和生物信息学技术的不断发展,用于研究T细胞表位和B细胞表位的方法得到了很大的提高。论文中概述了近几年用于研究T细胞表位的预测方法和鉴定方法,以及在B细胞表位研究中所用的表位肽扫描技术、蛋白质"切割"法、噬菌体展示技术、X-衍射与核磁共振、表位预测方法等技术,并对每种研究方法进行了比较,为从事抗原表位研究的人员提供参考,从而更有利于表位肽疫苗的研制和诊断方法的建立。; 宋帅李春玲贾爱卿杨冬霞李淼; 关键词：T细胞表位 B细胞表位

猪链球菌及其血清型的PCR检测被引量：2: 2011年; 从广东省部分地区猪场采集疑似猪链球菌病病猪的扁桃体棉拭病料202份,用PCR方法检测棉拭样本培养物中猪链球菌(Streptococcus suis)及其主要致病血清型(1、2、7和9型).检出阳性样品147份,检出率为72.8%.其中检出S.suis血清2型21份,检出率为12.9%;检出血清9型6份,检出率为3.0%;未检出血清7型和1型.此外,不同地区和不同发育阶段的猪,S.suis检出率和各血清型检出情况也存在较大差异.从而证实广东地区猪群中广泛存在S.suis呈地域性流行,并且是多种血清型共存.; 臧莹安胡波卢頔宋帅李淼李春玲; 关键词：血清型检出率

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