宋帅
- 作品数：36 被引量：83H指数：5
- 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>
- 发文基金：广东省农业科技重大专项资助项目广东省农业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因被引量：2
- 2012年
- 为了寻找副猪嗜血杆菌可能毒力基因,采用抑制性差减杂交技术,以HPS有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)为研究对象,构建差减杂交文库,利用Southern Blot分析和PCR鉴定进行差异基因片段的筛选。从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段,经同源性分析,其中5个片段分别与噬菌体重组蛋白、糖基转移酶/荚膜多糖磷酸转移酶、磷酸核糖甲酰甘氨脒合酶、核糖体蛋白丙氨酸转移酶和ABC型硝酸盐/磺酸盐/碳酸氢盐转运系统周质蛋白等编码的基因有同源性;2个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关。利用PCR对上述可能与毒力相关的差异基因片段在9种不同血清型HPS中的分布进行了检测,结果表明,7个片段存在于多数的有毒力菌株(血清4,5,12,14,15型)中,而在无毒力菌株(血清3,11型)中均未检测到。利用SSH技术成功构建了HPS有毒力菌株SW124和无毒力菌株H465的差异表达基因差减文库,筛选获得了7个差异基因片段,且上述片段在HPS不同血清型有毒力菌株中分布广泛。
- 李淼李春玲宋帅杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌抑制性差减杂交毒力基因
- 广东地区猪链球菌宿主多样性调查被引量：1
- 2014年
- 通过调查广东地区不同宿主(猪肉类、鱼类、禽类、宠物等)体内猪链球菌带菌情况,以期评估猪链球菌的流行风险。分别从不同地区采集不同种类样本,分离培养猪链球菌,经PCR鉴定为阳性后,进一步进行生化试验及药敏试验分析。从采集的848份样本中共分离到31株猪链球菌,其中血清9型11株(占35.5%),血清2型、8型、18型、26型及31型各1株,且所分离的菌株均呈现多重耐药性。猪链球菌在多种不同宿主中均能检测到,特别是血清9型,提示可能带来的猪链球菌流行风险应予以重视。
- 李淼谢乐新杨冬霞宋帅岳磊李春玲
- 关键词：猪链球菌分子流行病学
- 副猪嗜血杆菌hhdA基因的克隆与分子特征
- 根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌hhdA的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从分离的副猪嗜血杆菌中扩增其目的基因,将扩增产物纯化与pMD18-T载体连接并转化DH5α菌株,用凝胶电泳、PCR和BamHⅠ、Hind...
- 宋帅李春玲李淼杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌分子特征
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌OMP P5间接ELISA抗体检测方法优化被引量：2
- 2012年
- 利用副猪嗜血杆菌(HPS)OMP P5基因表达并纯化复性后蛋白作为包被蛋白,通过对最佳加样作用时间的确定和最佳酶标二抗反应时间等条件的探索优化,建立针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5(OMPP5)的间接ELISA抗体检测方法,通过对进行和未进行HPS免疫的健康猪血清的检测,证实了建立的间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强、反应快速准确等特点。
- 臧莹安黄彩梅李婉雁李淼宋帅李春玲
- 关键词：副猪嗜血杆菌酶联免疫吸附试验
- 表观健康的猪肉携带猪链球菌的调查被引量：3
- 2012年
- 猪链球菌病（SS）是由猪链球菌引起的人兽共患传染性疾病,给养猪业及公共卫生安全构成了严重的威胁。人和猪感染发病的临床症状相似。以往对猪肉进行食品安全检测的项目多集中在致泻大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌等食源性病原菌,检测过程中,偶尔也能分离到链球菌,但多数是没有致病性的。在经济高度发达的时代,食品安全越来越成为人们关注的焦点,本次通过对广州大型农贸市场销售的屠宰猪肉的随机抽样,初步了解表观健康的猪肉携带猪链球菌的情况和耐药性情况,为防范食源性猪链球菌病感染人及耐药性的传播提供理论依据。
- 臧莹安谢乐新李家侨庞木生李淼宋帅李春玲
- 关键词：猪链球菌病猪肉健康表观单增李斯特菌
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定被引量：4
- 2014年
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应，同时可以用于特异性的血清学诊断，本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa），P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段，PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定，设计了-套11个部分重叠的短肽，这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链，退火后插入表达载体pGEX-6p-1，与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描，鉴定出其表位位于”。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位，为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础，同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制，以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。
- 李淼李春玲岳磊宋帅杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌抗原表位
- 检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法以及试剂盒
- 本发明公开了一种检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法以及试剂盒。该间接ELISA方法是将副猪嗜血杆菌OMP P5蛋白作为包被抗原；而且判断标准如下：待测血清的OD<Sub>450</Sub>值＞0.375，且待测血清...
- 李春玲王贵平陈善真宋帅贾爱卿
- 文献传递
- 抗原表位研究方法进展被引量：28
- 2010年
- 抗原表位是抗原分子中的主要功能单位,能有效刺激机体的细胞免疫和体液免疫。随着免疫学和生物信息学技术的不断发展,用于研究T细胞表位和B细胞表位的方法得到了很大的提高。论文中概述了近几年用于研究T细胞表位的预测方法和鉴定方法,以及在B细胞表位研究中所用的表位肽扫描技术、蛋白质"切割"法、噬菌体展示技术、X-衍射与核磁共振、表位预测方法等技术,并对每种研究方法进行了比较,为从事抗原表位研究的人员提供参考,从而更有利于表位肽疫苗的研制和诊断方法的建立。
- 宋帅李春玲贾爱卿杨冬霞李淼
- 关键词：T细胞表位B细胞表位
- 猪链球菌16型的分离鉴定及部分分子生物学特性的研究
- 猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人兽共患病病原,可引起脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎、休克和突然死亡等。该菌按表面多糖抗原差异可分为35血清型(1～34,1/2),其中猪链球菌部分血清...
- 宋帅李春玲杨冬霞李淼
- 文献传递
- 广东部分猪场副猪嗜血杆菌病的流行病学调查被引量：8
- 2012年
- 为了解副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis,HPS)在广东省部分地区的流行情况,通过针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2(OMPP2)的间接ELISA法对广东省部分猪场的376份猪血清样本进行了抽样检测。结果显示,副猪嗜血杆菌的阳性率为23.8%,其中母猪阳性率高达31%;保育仔猪为29%,育肥猪为33.6%,育肥猪阳性率显著高于母猪和保育仔猪;冬季(11～1月)副猪嗜血杆菌抗体阳性检出率最高为31.4%、秋季(8～10月份)的阳性检出率最高为18.7%,冬季比秋季高出12.7%,差异极显著(P<0.01)。
- 臧莹安庞木生黄彩梅李淼宋帅李春玲
- 关键词：副猪嗜血杆菌ELISA流行病学阳性率
