温贵兰
- 作品数：212 被引量：411H指数：9
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科学技术基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 从江香猪γ干扰素基因克隆与序列分析被引量：7
- 2018年
- 试验旨在研究从江香猪γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)基因克隆与序列分析。试验提取贵州从江香猪肝脏组织总RNA,反转录生成cDNA,采用2对特异性引物进行巢式PCR扩增从江香猪IFN-γ(CJ-poIFN-γ)基因编码区,将其克隆至pUCm-T载体上,获得重组质粒pUCm-CJpoIFN-γ,并测序鉴定;利用NCBI、SOPMA、SignalP-4.1等在线服务器软件、DNAStar软件对CJ-poIFN-γ进行序列分析。结果表明,CJ-poIFN-γ基因编码区长501bp,编码166个氨基酸;核苷酸序列比对结果显示,CJ-poIFN-γ与梅山猪、剑白猪、藏猪、成华猪、荣昌猪、印度猪、长白猪、内江猪同源性为99.4%~100.0%;进化树分析结果显示,CJ-poIFN-γ与梅山猪、剑白猪、藏猪、成华猪亲缘关系较近;CJ-poIFN-γ基因编码蛋白不存在跨膜结构,为分泌蛋白,前23个氨基酸为信号肽序列;CJ-poIFN-γ基因编码蛋白二级结构主要以α-螺旋(50.60%)和无规则卷曲(33.14%)为主,B细胞表位主要位于62-65、84-87、113-115、144-156和162-166位氨基酸。试验结果为进一步研究IFN-γ的生物活性、加快从江香猪品种资源的有效利用奠定基础。
- 温贵兰温贵兰张升波林汉卿林汉卿王开功王开功文明周碧君赵德刚
- 关键词：从江香猪克隆
- 大鲵致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定与耐药性分析被引量：3
- 2014年
- 为了研究从发病大鲵体内分离到的致病菌的生物特性与耐药性,试验采用细菌分离培养技术分离到1株致病菌,并对其进行了细菌分离鉴定、生化鉴定、药敏试验、动物致病试验。结果表明:该分离菌为嗜水气单胞菌,分离菌对小白鼠具有致病性;对头孢噻吩、庆大霉素、美福仙、左氟沙星、恩诺沙星高度敏感,对阿莫西林、链霉素、先锋霉素Ⅳ、卡那霉素、新霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素、阿奇霉素中度敏感,对青霉素、四环素、洁霉素、红霉素不敏感。
- 吴学祥温贵兰文明龚新勇徐雨
- 关键词：细菌分离鉴定生化鉴定药敏试验耐药性
- 2011-2013年贵州猪瘟流行病学调查
- 引言猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染和致死性传染病,猪是猪瘟病毒的唯一自...
- 冯旭芳王开功周碧君文明程振涛温贵兰尹鑫毛黎红
- 砷制剂对禽白血病肿瘤细胞Warburg效应及Hedgehog信号通路的影响
- 2023年
- 【目的】探究三氧化二砷(ATO)对禽白血病(AL)肿瘤细胞Warburg效应及Hedgehog信号通路的影响,明确ATO缓解AL鸡肝脏肿瘤病变的作用机制,为生产上以ATO治疗AL提供科学依据。【方法】开展急性毒性试验,确定ATO对绿壳蛋鸡的安全性;通过p27抗原检测、PCR扩增鉴定、gp85基因测序等对禽白血病病毒(ALV)进行鉴定,并采集病鸡肿瘤组织制作病理组织切片进行病理性诊断;体外培养AL鸡肿瘤细胞,分别加入0.5、1.0和2.0μmol/L ATO进行处理,培养12、24和48 h后收集细胞,分别检测葡萄糖、乳酸、己糖激酶(HK)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的含量;以ALV人工感染绿壳蛋鸡构建模型组,再用不同剂量(0.5、1.0和2.0 mg/kg·BW)ATO进行治疗,采用ELISA检测鸡肝脏组织中Hedgehog信号通路Gli1和Shh蛋白水平,并以实时荧光定量PCR检测Shh、Gli1、Gli2、Ptch2和Smo基因的表达情况。【结果】ATO对绿壳蛋鸡的半数致死量(LD_(50))为19.501 mg/kg·BW,LD_(50)-95%可信限为19.501±0.213 mg/kg·BW。从疑似患AL的绿壳蛋鸡中鉴定出1株ALV-J株,命名为GZCS01,其感染形成的肿瘤为肾母细胞瘤。以不同剂量(0.5、1.0和2.0μmol/L)ATO作用肾母细胞瘤细胞,培养48 h后发现细胞液中的葡萄糖、乳酸及HK含量均极显著降低(P<0.01,下同),同时能降低肾母细胞瘤细胞内的GLUT1含量,从而减弱肿瘤细胞Warburg效应;高剂量的ATO(2.0 mg/kg·BW)能极显著或显著抑制Shh和Gli1蛋白表达(P<0.05,下同),极显著或显著抑制Shh、Gli1、Gli2和Smo基因表达,同时极显著上调Ptch2基因表达。【结论】ATO能抑制肿瘤细胞对葡萄糖的摄取和乳酸生成,且降低关键酶生成,从而减弱Warburg效应,抑制肿瘤细胞增殖;ATO还可通过下调Hedgehog信号通路关键因子Shh、Gli1、Gli2和Smo的表达及促进Ptch2表达,从而减轻AL的肝脏病变。可见,使用砷制剂(如阿散酸等)治疗AL具有可行性。
- 任涛王建俊杨剑杨剑杨鑫温贵兰温贵兰
- 关键词：肿瘤HEDGEHOG信号通路
- 猪 Siglec-10基因的克隆与生物信息学分析
- 2014年
- 为了研究猪Siglec-10(pSiglec-10)的分子生物学特征,利用Ensemble网站提供的预测序列(ENSSSCT00000032460)设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,克隆pSiglec-10分子的全长CDS区,经过测序比较鉴定正确后,对该分子的基本特征进行分析;构建截短pSiglec-10的原核表达载体,另将该分子的CDS区全长克隆至真核表达载体pcDNA3.1-3′FLAG,将重组质粒转染至PK-15和Marc-145细胞中分析其表达定位特征。结果克隆的pSiglec-10分子的全长CDS为2 127bp,编码709个氨基酸;pSiglec-10基因序列与猴的同源性最高,同源性达73.6%,与鼠的同源性为66.9%;与人的同源性为62.5%,氨基酸序列的同源性分别为58.9%、69.4%和65.3%;pSiglec-10C端的ITIM区域和磷酸化位点高度保守;pSiglec-10分子具有较好的抗原特性和亲水性;该分子主要表达定位在细胞浆中,在Marc-145细胞中呈不连续的点状分布于细胞浆,细胞核周围荧光强度较强。pSiglec-10分子全长CDS区的克隆和分析将对该分子的功能研究提供一定的理论依据。
- 张毅张晏王晓杜方维焕温贵兰
- 关键词：分子克隆真核表达生物信息学分析
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析被引量：4
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h,可检测到120ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。
- 温贵兰张涵淞扈鸿霞章先张毅王晓杜李肖梁方维焕
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 德菲尔法构建重大动物疫病预警指标体系被引量：8
- 2016年
- [目的 ]构建重大动物疫病暴发流行预警指标体系。[方法 ]以禽流感和口蹄疫为例,采用文献调研法和德菲尔专家咨询法中的专家会议法初拟重大动物疫病预警体系的框架和指标;应用德菲尔专家咨询法评价预警指标的重要性、可操作性;应用组合权重法比较各指标综合影响的大小,并将指标分类。[结果 ]筛选出禽流感和口蹄疫预警预报一级指标6项(易感动物、饲养管理和免疫情况等)以及二级指标14项(免疫效果、环境消毒、温度等),并将指标分为三类(关键指标、重要指标和一般指标)。[结论 ]初步构建了重大动物疫病暴发流行预警指标体系。
- 李沛丽张华李涛周碧君徐秋星程振涛王开功文明温贵兰冯旭芳
- 关键词：重大动物疫病预警体系
- 一例鸭圆环病毒病的诊断
- 2021年
- 为确定贵州省某养殖场花边鸭的发病原因和死亡原因,本试验通过病毒核酸检测进行病原鉴定。结果显示,仅鸭圆环病毒为阳性。试验结果将为鸭圆环病毒病的防治提供一定的参考依据。
- 蒋灵温贵兰张喜懿
- 关键词：圆环病毒病
- 马立克氏病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：2
- 2023年
- 根据马立克氏病病毒PP38基因的一段特异性保守序列设计引物,将MDV的PP38基因构建到19T载体上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,建立了针对马立克氏病病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行了评价。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品在6.53×10^(1)~6.53×10^(8)copies/μL范围内呈良好的线性关系,其线性相关系数R^(2)=0.998 8,标准曲线方程为Y=-3.271X+39.297,熔解曲线呈现单峰,无非特异性扩增。且检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)和鸡传染性贫血病毒(CIAV)时结果均呈阴性,具有良好的特异性。对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%。本研究建立的检测MDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可用于马立克氏病病毒的快速诊断,对马立克氏病的监测具有重要意义。
- 刘蔓蔓温贵兰李涛李波田兴舟胡璇孙芸罗东还赵静徐飞
- 关键词：马立克氏病病毒实时荧光定量PCR
- 禽白血病病毒贵州流行株env基因克隆与序列分析被引量：6
- 2019年
- 为了解禽白血病病毒(ALV)贵州流行株的遗传变异情况及分子特征,本试验基于ALV env基因设计合成引物对禽白血病贵州临床病例进行目的基因扩增、克隆和序列分析。结果显示,从临床病例中筛选获得3份阳性样本,PCR扩增均获得大小约921 bp的目的基因片段,将其命名为:GZ-ALV-1株、GZ-ALV-2株和GZ-ALV-3株。序列分析结果显示,3株ALV贵州流行株之间核苷酸同源性在97.2%~97.6%之间,与国内外ALV-J的同源性相对较高,为93.1%~99.3%;而与A、B、C、D、E、K亚群ALV同源性仅为51.4%~53.2%。系统进化分析显示,3株ALV贵州流行株与ALV-J亚群参考株处于同一分支,表明本试验所检测的ALV毒株均为ALV-J亚群;与A、B、C、D、E、K亚群处于不同进化分支。基因变异分析显示,3株流行株37处相同核苷酸变异导致17处氨基酸发生位点变异,其中9个可变点在高变区hr1和hr2,1个可变点在低变区vr3。结果表明,3株ALV贵州流行株均为ALV-J亚群,env基因存在位点发生了变异,且可变位点位于序列高变区。本研究结果为明确贵州禽白血病流行概况及ALV的防控与净化提供基础数据。
- 何玲杨秋明袁海文杨源杨源程振涛
- 关键词：ENV基因克隆
