王君
- 作品数：12 被引量：32H指数：4
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：军队“十一五”科技攻关课题国家自然科学基金更多>>
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- 异氟醚预处理对大脑中动脉闭塞大鼠胶质细胞中Toll样受体4表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察异氟醚预处理对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠胶质细胞中Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法雄性SD大鼠48只,体重250～300g,随机均分为三组:假手术组(S组)、MCAO模型组(M组)、异氟醚预处理组(I组)。2h后进行再灌注,再灌注24h后进行神经功能评分,检测脑梗死容积,分别测定每个视野内TLR4与星形胶质细胞标记物(GFAP)共存阳性细胞数和TLR4与小胶质细胞标记物(OX42)共存阳性细胞数。结果与M组相比,I组神经功能评分降低,脑梗死容积减少,GFAP和OX42阳性细胞数均减少(P<0.05)。结论异氟醚预处理具有脑保护作用,抑制TLR4的表达及胶质细胞的活化可能是其作用机制之一。
- 肖志彬刘文博吕苗苗王君高昌俊孙绪德
- 关键词：异氟醚预处理缺血-再灌注损伤TOLL样受体4胶质细胞
- 大鼠低氧诱导因子-1α基因克隆和表达载体的构建被引量：4
- 2010年
- 目的:对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因进行克隆及载体构建,为进一步研究HIF-1基因转染骨髓基质细胞移植治疗脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据。方法:制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,提取脊髓组织mRNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PR)合成HIF-1α cDNA,并对其进行PCR扩增,对PCR产物进行纯化及连接T载体、转化感受态和双酶切鉴定,并将HIF-lα克隆入pcDNA3.l载体。结果:PCR扩增的片段长度为2472bp与预期结果一致;利用BamHI和XbaI双酶切能够切出大小约2472bP的目的片段,与PCR产物片段大小相等,经测序证实无碱基改变。结论:成功克隆HIF-lα,并被构建到载体pcDNA3.l中,为进一步研究基因转染奠定了基础。
- 张振王君吕苗苗肖志彬张玉明高昌俊孙绪德
- 关键词：低氧诱导因子-1Α脊髓缺血再灌注损伤基因克隆
- 异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TLR4和MyD88表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的 评价异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4（TLR4）和髓样分化因子88（MyD88）表达的影响.方法 雄性成年SD大鼠54只,体重250～300 g,随机分为3组（n=18）：假手术组（S组）仅分离血管,不留置线栓;脑缺血再灌注组（IR组）采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h;异氟醚预处理（IP组）吸入2%异氟醚,1h/d,连续5 d,处理结束后24 h时制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24 h时进行神经功能缺陷评分,然后每组处死3只大鼠,测定脑梗死体积.分别于再灌注24、48和72 h时,处死5只大鼠,取右侧大脑缺血部位额叶皮质,采用Western blot法测定TLR4、MyD88和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,IR组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,IR组TLR4、MyD88和NF-κB的表达均上调,IP组MyD88和NF-κB的表达上调（P＜0.05）;与IR组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,TLR4、MyD88和NF-κB的表达均下调（P＜0.05）.结论 异氟烷预处理可通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达,减轻炎性反应,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.
- 肖志彬高昌俊唐晓旭张振王君张玉明柴伟孙绪德
- 关键词：异氟醚缺血预处理TOLL样受体4髓样分化因子88
- 大鼠低氧诱导因子-1α基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的:将大鼠低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)基因转染到骨髓间充质干细胞(Bone marrow mes-enchymal stem cells,BMSCs),为后续基因修饰的BMSCs移植治疗脊髓缺血再灌注损伤提供必要的理论依据。方法:采用直接贴壁法分离,传代培养出纯化的大鼠BMSCs;用电穿孔的方法将构建好的大鼠HIF-1α基因表达载体转染入BMSCs中;通过免疫细胞化学法,鉴定HIF-1α能否成功转染进入BMSCs;RT-PCR检测转染前后HIF-1α在细胞中的表达效果。结果:直接贴壁法能有效分离、纯化大鼠BMSCs;免疫细胞化学法显示转染后BMSCs内充满蓝紫色深染颗粒;RT-PCR结果显示,转染后细胞内HIF-1α基因表达量明显增高。结论:大鼠HIF-1α基因通过电穿孔方法可成功转染到符合试验标准的BMSCs中,并且稳定表达,为进一步研究修饰后HIF-1α基因对BMSCs增殖带来的影响以及治疗相关疾病等方面奠定基础。
- 王君张振张玉明吕苗苗肖志斌高昌俊孙绪德
- 关键词：低氧诱导因子-1Α脊髓缺血再灌注损伤骨髓间充质干细胞电转染
- HIF—1α基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤的效果
- 2013年
- 目的评价低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因修饰骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤的效果。方法成年健康雄性SD大鼠135只，2月龄，体重200～300g，采用随机数字表法，将其分为4组：假手术组（S组，n=20）、缺血再灌注组（I／R组，n=20）、BMSCs组（n=20）和HIF-1α基因修饰BMSCs组（HIF-1α—BMSCs组，n=75）。采用阻断腹主动脉45min行再灌注的方法制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型，于术后3h时HIF-1α—BMSCs组鞘内注射HIF-1α修饰的BMSCs1×10^6个／5脚，BMSCs组给予BMSCs 1×10^6个／5脚。分别于治疗后1、3、7、14、28d时进行BBB运动等级评分，然后取k。；脊髓组织，测定HIF—lamRNA及其蛋白表达。结果与S组比较，I／R组治疗后1、3、7、14、28d时BBB运动等级评分降低，BMSCs组和HIF-1α—BMSCs组治疗后1、3、7、14d时BBB运动等级评分降低（P〈0．05）；与I／R组比较，BMSCs组和HIF-1α—BMSCs组治疗后3、7、14、28d时BBB运动等级评分升高，脊髓组织HIF-1αmRNA及其蛋白表达上调（P〈0．05）；与BMSCs组比较，HIF-1α—BMSCs组治疗后3、7、14d时BBB运动等级评分升高，脊髓组织HIF-1αmRNA及其蛋白表达上调（P〈0．05）。结论HIF-1α基因修饰BMSCs移植治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤的效果较好。
- 田丽颖王君吕苗苗张玉明张振吕海港蔡承魁张志培高昌俊柴伟徐礼鲜孙绪德
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基间质干细胞移植脊髓
- HIF-1α与BMSCs治疗SCII的研究现状与展望被引量：1
- 2013年
- 脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia reperfusion injury,SCII)是一种不可逆性脊髓损伤,其临床治疗效果差以及致残率高的特点给人们的工作和生活带来了巨大负担。因缺血而导致的局部组织低氧进而造成细胞受损是发生SCII的主要原因,低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在细胞的低氧应答过程中起到重要调控作用,其功能主要为增强缺氧细胞的代谢,从而对抗低氧对细胞的破坏。另外,采用干细胞移植技术治疗脊髓缺血再灌注损伤在动物实验中取得了可喜的效果,这给截瘫患者带来了康复的希望。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)不仅具有多向分化潜能,还可接受外源性基因并稳定表达基因产物,且其表达具有组织特异性。因此,它在组织工程创伤修复、细胞替代治疗、基因治疗等方面具有很好的临床应用价值和广阔的应用前景。因此,HIF-1α联合BMSCs治疗SCII,有望取得更好的治疗效果。
- 田丽颖张振王君张玉明蔡承魁高昌俊张贵和孙绪德
- 关键词：低氧诱导因子-1Α骨髓间充质干细胞脊髓缺血再灌注损伤
- HIF-1α基因转染骨髓间充质干细胞治疗脊髓缺血-再灌注损伤早期超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的变化被引量：2
- 2013年
- 目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在脊髓缺血-再灌注损伤(SCII)中的治疗作用及对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。方法采用腹主动脉肾动脉下方夹闭法造成大鼠SCII模型。55只成年SD大鼠随机分为三组:假手术组(Sham组,n=5)只暴露腹主动脉;SC组(n=25)SCII3h后髓内注射5μl生理盐水;HIF-1α基因修饰的BM-SCs组(HB组,n=25)SCII3h后髓内微量注射5μl含1×106个/ulHIF-1α-BMSCs的悬液。SC组和HB组连续检测治疗后(sham组于假手术后)2、6、12、18、24h脊髓组织内SOD活性和MDA含量的变化。结果与Sham组比较,治疗后2、6、12、18hSC组和HB组SOD活性明显降低(P<0.05);治疗后2、6、12、18、24hSC组和HB组MDA含量明显升高(P<0.05)。与SC组比较,治疗6、12、18hHB组SOD活性明显升高,MDA含量明显降低(P<0.05)。结论 HIF-1α基因联合BMSCs移植治疗SCII,可通过减轻组织缺氧,减少自由基的产生,保护脊髓组织,促进神经功能的恢复。
- 田丽颖吕苗苗张玉明王君吕海港张振蔡承魁高昌俊柴伟孙绪德
- 关键词：超氧化物歧化酶丙二醛
- HIF-1基因转染骨髓间充质干细胞治疗SCII的展望被引量：1
- 2010年
- 脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia-reperfusion injury,SCII)作为原发性脊髓损伤后的继发性损害是造成神经细胞损伤的一个重要因素,目前基因和细胞移植治疗SCII尚处于探索阶段。低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)产生并处于缺氧应答的关键环节,在缺血后细胞凋亡及微循环的重建等方面起关键作用,用其转染骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)进行细胞移植治疗SCII,可有望取得新的突破。
- 王君张玉明张振孙绪德
- 关键词：脊髓低氧诱导因子间充质干细胞
- HIF-1基因转染骨髓间充质干细胞治疗脊髓缺血再灌注损伤的展望
- @@脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord ischemic reperfusion injury，scⅡ)是指一些导致脊髓缺血因素去除后，脊髓恢复血供，神经功能不仅得不到改善，反而在原缺血损伤基础上进一步加重，甚至...
- 王君张玉明张振
- 关键词：骨髓间充质干细胞治疗脊髓缺血再灌注损伤
- 文献传递
- 大鼠骨髓间充质干细胞经低氧诱导因子-1α基因转染后的生物学特性被引量：1
- 2011年
- 目的评价大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）经低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染后的生物学特性。方法将构建好的HIF-la基因表达载体（pcDNA3．1-HIF—1α）运用电穿孔法转染入第3代BMSCs中得到稳定表达HIF-1α的BMSCs（BMSCs-HIF-1α细胞）。以单纯BMSCs和电转染pcDNA3．1的BMSCs（BMSCs-pcDNA3．1细胞）作为对照。采用免疫细胞化学法鉴定HIF-1α基因表达载体是否转染成功；低氧培养后，采用Westernblot法测定HIF-1α表达；流式细胞术对转染后细胞进行周期与凋亡的检测，记录G，期、G2期和S期细胞比例，计算增殖指数（PI）；MTT法绘制细胞生长曲线，记录细胞数目。结果BMSCs-HIF-1α细胞核内充满蓝紫色深染颗粒，其余两种细胞未见深染颗粒。与BMSCs和BMSCs-pcDNA3．1细胞比较，BMSCs—HIF-1α细胞HIF-1α表达上调，细胞凋亡率降低，S期和G2期细胞比例和PI升高，G．期细胞比例降低，细胞数目增多（P〈0．05）。BMSCs和BMSCs—pcDNA3．1细胞上述各指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HIF-1α基因成功转染人大鼠BMSCs。
- 张玉明王君张振吕苗苗肖志斌高昌俊柴伟徐礼鲜孙绪德
- 关键词：间质干细胞缺氧诱导因子1Α亚基生物学特性
