王景涛
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：山西大学生物技术研究所更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 八肋游仆虫绿色荧光蛋白（GFP）人工染色体的构建
- 原生动物是区别于原核生物和高等真核生物的一个特定类群。它们作为一类单细胞真核生物，具有许多独特的特征，诸如，密码子使用的特殊性、单基因染色体结构和多核现象等，是分子细胞生物学研究的理想材料和模式生物。八肋游仆虫/(Eup...
- 王景涛
- 关键词：八肋游仆虫GFP基因人工染色体
- 文献传递
- 肽链释放因子和核糖体蛋白L11在八肋游仆虫细胞中的定位
- 2010年
- 原生动物纤毛虫是一类单细胞真核生物,其蛋白质合成终止过程中密码子使用的特殊性使其成为研究蛋白质合成终止机制的一个经典模型。为了能够有效地分析生物大分子在该细胞中的功能作用位点,本研究根据该生物染色体结构的特征,构建了含有红色荧光蛋白基因的大核人工染色体EoMAC_R,并与之前构建的含绿色荧光蛋白基因的大核染色体EoMAC_G一起,对蛋白质合成终止有关的3个重要因子核糖体大亚基蛋白L11、多肽链释放因子eRF1和eRF3在八肋游仆虫细胞中进行了荧光共定位分析。结果显示,在八肋游仆虫细胞中,蛋白质翻译过程主要位于"C"形大核内侧区域。构建的人工染色体能够作为一种有效的工具,对目的蛋白质在八肋游仆虫细胞中进行定位分析。
- 柴宝峰李娜王景涛申泉张志云梁爱华
- 关键词：人工染色体纤毛虫细胞定位肽链释放因子
- 八肋游仆虫含绿色荧光蛋白基因的大核人工染色体的构建被引量：4
- 2009年
- 为研究八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)相关基因的功能,构建了八肋游仆虫大核人工染色体(macronuclear artificial chromosome ofE.octocarinatus,EoMAC-G),其两端为克隆自八肋游仆虫大核β2-微管蛋白基因的5′和3′非编码区和两侧的端粒序列,中间为多克隆位点和密码子优化后的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP-Eo)报道基因.用脂质体转染方法将携带有EoMAC-G的pBTub-Tel载体转入八肋游仆虫大核,分析EGFP-Eo基因在八肋游仆虫细胞中的表达.荧光显微镜观察发现,EGFP-Eo产生的荧光均匀分布于八肋游仆虫细胞质中.在细胞进行有丝分裂的情况下,荧光可持续20 d以上.相比pEGFP-N1质粒转化的游仆虫,人工染色体中的EGFP-Eo基因表达的荧光亮度强、稳定且持续时间长.Western杂交分析进一步证实,外源EGFP-Eo基因在细胞中过量表达.通过细菌喂食法进行纤毛虫RNA干扰实验,抑制了外源EGFP-Eo基因在八肋游仆虫细胞中的表达.利用构建的人工染色体不仅可以在八肋游仆虫细胞内表达外源基因,对目的蛋白质进行活细胞实时动态的定位分析,还可通过RNA干扰的方法调控外源基因在纤毛虫细胞中的表达,便于进一步分析目的蛋白质的功能.
- 李娜柴宝峰王景涛梁爱华
- 关键词：八肋游仆虫绿色荧光蛋白基因表达RNA干扰
