王艳萍
- 作品数：117 被引量：755H指数：14
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学历史地理化学工程更多>>
- 转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?
- 付军科周清华朱文王艳萍刘伦旭陈小禾聂强李定彪李印
- 关键词：L9981GSK-3ΒΒ-连环蛋白
- 高强度聚焦超声对人乳腺癌细胞的生长抑制作用及机理研究被引量：13
- 2004年
- 目的 研究高强度聚焦超声 (HIFU)对人肿瘤细胞的杀伤作用 ,并探索其作用机理。方法 用不同强度HIFU处理人乳腺癌细胞 MCF- 7,用台盼蓝排斥法染色、细胞增殖试验 (MTT法 )、克隆形成实验研究 HIFU对癌细胞的杀伤和生长抑制作用 ;用流式细胞术检测 HIFU对癌细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响。结果 用 HIFU处理后 ,癌细胞死亡率升高 ,增殖活性降低 (P<0 .0 5 ) ,克隆形成下降 (P<0 .0 0 1) ,G0 /G1 期细胞数增加 (P<0 .0 5 ) ,S期细胞数减少 (P<0 .0 1) ,凋亡指数升高 (P<0 .0 1) ,热休克蛋白表达升高 (P<0 .0 5 ) ,P5 3、BCL- 2、FAS表达阳性细胞数与对照组比 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 HIFU对人乳腺癌细胞有明显的杀伤及抑制生长和克隆形成作用 ,其机理与抑制 DNA合成有关 ;HIFU具有诱导癌细胞凋亡作用 ,可能与 P5 3、BCL- 2、FAS的介导和调控无关。
- 王修杰袁淑兰张洁陆燕蓉王艳萍陈晓禾宁其志傅玉瑞刘柏涛曾文富何跃明
- 关键词：乳腺癌凋亡
- 肺癌发生发展和侵袭转移的基础和临床应用研究
- 周清华石应康陈军刘伦旭朱大兴王允车国卫马力覃扬李潞周宏远刘红雨张尚福张鹏王艳萍
- 该课题组应用分子克隆、基因重组、基因芯片和蛋白质组学等先进的分子生物学、细胞生物学方法，分别从mRNA、DNA、蛋白、细胞水平和动物实验，并结合临床研究，系统深入地探讨了肺癌发生发展和侵袭转移的分子机理、信号转导通路及其...
- 关键词：
- 关键词：肺癌信号传导通路预后
- CYP2E1基因多态性与肺癌遗传易感性的关系被引量：12
- 2008年
- 目的研究CYP2E1基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性。方法应用PCR-RFLP技术检测150例中国四川汉族肺癌患者和152例健康人的CYP2E1基因RsaⅠ／PstⅠ和DraⅠ多态性的分布频率，并分析了这两种基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性，以及与吸烟在肺癌易感性中的交互作用。结果①CYP2E1基因RsaⅠ／PstⅠ和DraⅠ多态基因型分布频率在2组间比较无显著性差异（分别为Х^2=3．186，P=0．203和Х^2=1．756，P=0．416）；②按照吸烟因素分层，携带c1／c1基因型的不吸烟个体较携带突变基因型的个体肺癌风险显著增加（OR=2．453，95％CI=1．140～5．276，P=0.022）；③与携带至少1个突变c2基因型的个体比较，携带c1／c1基因型的个体患肺腺癌的风险显著增加（OR=2．440，95％CI=1．235～4．820，P=0．01）；④没有发现DraⅠ多态性与肺癌风险之间的相关性。结论①CYP2E1的c1／c1基因型为中国四川汉族人群肺癌易感基因型；②RsaⅠ／PstⅠ多态性与中国四川汉族人群患肺腺癌的风险显著相关；③DraⅠ多态性与中国四川汉族人群肺癌风险无相关性。
- 李代蓉周清华郭占林袁天柱朱文王艳萍陈晓禾
- 关键词：肺癌多态性遗传易感性代谢酶基因CYP2E1
- M007介导的光动力疗法对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的影响
- 2012年
- 目的观察新型光敏剂M007介导的光动力疗法(PDT)对体外培养人成骨肉瘤MG63细胞增殖能力的影响。方法取1mL含人成骨肉瘤MG63细胞1×106/mL的单细胞悬液加至培养皿中,分为实验组(M007-PDT组)、空白对照组(B组)、光照对照组(L组)和光敏剂对照组(M007组),按分组加入不同浓度M007(0,2,4,8,16μmol/L),分别用多光源红光光照系统或暗反应处理10min。采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色的流式细胞分析法,检测各组的细胞残存率及死亡方式;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验和细胞集落形成实验评估不同组残存细胞的增殖能力。实验组和对照组同步进行,每组重复6次。结果 M007浓度为2～16μmol/L时,其介导的光动力疗法能使超过90%的MG63细胞以晚期凋亡/坏死,或成为裸核的方式被灭活,在4～16μmol/L时,维持残存率小于1%;2～8μmol/L M007-PDT组中的残存细胞生长曲线低平,其光吸收值未随培养时间延长而增加(P>0.05),并且不能形成细胞集落,但2μmol/L M007-PDT组偶见一次16个活细胞。结论 M007浓度大于4μmol/L后,其介导的光动力疗法能完全灭活人成骨肉瘤MG63细胞,该技术应用于肿瘤术野血液回收有着良好的前景。
- 周裕凯吴文知张兰杨春晖王艳萍
- 关键词：光敏剂光动力疗法人成骨肉瘤MG63细胞
- nm23-H1基因在人肺癌细胞L9981恶性表型逆转中的作用被引量：2
- 2005年
- nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因,转染野生型的nm23-H1基因可以逆转肺癌的恶性表型,我们拟建立转染野生型nm23-H1基因的人大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1,并初步探讨nm23-H1基因在逆转L9981细胞株恶性表型中的作用。应用基因克隆技术构建质粒载体pLXSN-nm23-H1-EGFP,并建立L9981-nm23-H1细胞株。同时应用Westernblot检测L9981-nm23-H1细胞中nm23-H1蛋白表达。细胞培养及改良的Boyden小室法分别检测L9981-nm23-H1细胞株的体外生物学行为,动物实验检测L9981-nm23-H1细胞株在裸鼠体内的成瘤性及肺部转移能力。结果成功构建了逆转录病毒载体pLXSN-nm23-H1-EGFP;并建立了人大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1;nm23-H1基因在细胞株L9981-nm23-H1中稳定、高效表达;L9981-nm23-H1细胞体外增殖能力,克隆形成力,体外侵袭力显著降(P<0.01);L9981-nm23-H1裸鼠体内的成瘤性及肺部转移能力显著低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.01);nm23-H1基因的抑瘤率82.56%。本研究资料提示转染野生型nm23-H1基因可以逆转人大细胞肺癌细胞株L9981的恶性表型。
- 车国卫周清华王艳萍刘伦旭覃杨孙芝琳孙泽芳陈晓禾
- 关键词：NM23-H1基因人肺癌L9981恶性表型
- 咖啡因与苯巴比妥联合对顺铂的体外抗癌增效作用被引量：9
- 2001年
- 目的 研究咖啡因 (CAF)对顺铂 (DDP)的抗癌增效作用及苯巴比妥 (PBT)是否抑制咖啡因的抗癌增效作用。方法 以SPC A 1细胞为对象 ,采用MTT法研究甲基黄嘌呤类药物———CAF及其与PBT联合应用对DDP的体外细胞毒作用的影响。结果 12 0 μg/ml的CAF及 10 μg/mlPBT对细胞生长无明显的细胞毒作用。 12 0 μg/ml的CAF可明显增强DDP对SPC A 1细胞的细胞毒作用 (P <0 .0 5 ) ,10 μg/mlPBT对DDP无增效作用 (P >0 .0 5 )。 12 0 μg/mlCAF与 10 μg/mlPBT的混合物也能增强DDP的细胞毒作用 (P <0 .0 1) ,其增效作用与单纯CAF的增效作用比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 咖啡因可明显增强DDP对SPC A 1细胞的体外抗癌效应 ,而苯巴比妥对咖啡因的体外抗癌增效作用无拮抗作用。提示苯巴比妥作为降低咖啡因副反应的成分 ,有可能与咖啡因联合使用作为化疗增效剂用于肺癌治疗。
- 王艳萍袁淑兰陈晓禾杨燕宋毅
- 关键词：咖啡因苯巴比妥顺铂抗癌活性
- nm23-H_1基因对人肺癌细胞中细胞外信号调节激酶活性的影响被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3 H1 对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响。方法 应用特异性识别总ERK1/2 ( p44 /4 2MAPkinase)和双磷酸化ERK1/2( phospho p44 /4 2MAPkinase)的抗体及蛋白印迹法 (Westernblot) ,检测L9981(缺失nm2 3 H1 基因的原代肺癌细胞株 )、L9981 nm 2 3 H1 (转染了nm 2 3 H1 基因的L9981细胞株 )、L9981 PLXSN (转染了空载体的L9981细胞株 )中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2的水平。磷酸化ERK 1/2活性应用非放射性免疫沉淀和Westernblot法以及 p44 /4 2MAPkinase分析试剂盒予以检测。 结果 L9981 nm2 3 H1 细胞株中磷酸化ERK 1/2的水平 ,以及ERK1/2活性均显著低于L9981细胞株和L9981 PLXSN细胞株 (P <0 .0 1) ,L9981和L9981 PLXSN细胞株间磷酸化ERK 1/2水平和ERK 1/2活性比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。三个细胞株间总ERK1/2水平比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 nm2 3 H1 基因可明显靶向地抑制人高转移肺癌细胞株L9981中ERK 1/2的转录表达和ERK 1/2的活性。推测nm2 3 H1 基因的作用机制可能与其抑制了MAPK/ERK信号传导通路有关。
- 李印周清华孙芝琳覃扬朱文王艳萍刘伦旭陈小禾孙泽芳
- 关键词：NM23-H1基因肺癌癌细胞信号传导通路
- 人端粒酶催化亚单位启动子调控自杀基因HSV-TK靶向性表达治疗肺癌的体内外实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究人类单纯疱疹病毒的胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)治疗系统在人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的调控下对肺癌细胞A549的体外靶向性增殖抑制作用和对裸鼠体内A549移植瘤的治疗效果。方法1用已构建的hTERT启动子和SV40启动子调控的TK基因表达质粒pGL3-hTp-TK和pGL3-SV40-TK转染端粒酶阳性的人肺腺癌细胞A549及端粒酶阴性的人胚肺细胞MRC-5,RT-PCR方法检测转染细胞中TK基因的表达情况;2MTT法检测GCV对上述转染细胞体外增殖的抑制作用;并应用流式细胞仪检测GCV对上述转染细胞凋亡的影响;3将A549细胞接种于裸鼠皮下,研究pGL3-hTp-TK/GCV和pGL3-SV40-TK/GCV对移植瘤的体内生长抑制作用。结果1转染pGL3-SV40-TK的A549和MRC-5细胞均有TK mRNA表达,转染pGL3-hTp-TK的A549细胞也有TK mRNA表达,但MRC-5细胞无TK mRNA表达;2GCV对转染pGL3-SV40-TK的A549、MRC-5细胞和转染pGL3-hTp-TK的A549细胞的体外增殖均有明显抑制作用,对转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞无明显抑制作用;转染pGL3-SV40-TK和pGL3-hTp-TK的A549细胞经GCV处理后细胞凋亡指数(分别为21.58%和23.19%)均显著高于转染pGL3-hTp的A549细胞及空白对照,转染pGL3-SV40-TK的MRC-5细胞凋亡指数(9.35%)显著高于对照组,而转染pGL3-hTp-TK的MRC-5细胞凋亡指数(0.88%)无明显升高;3pGL3-SV40-TK/GCV和pGL3-hTp-TK/GCV治疗系统对裸鼠A549移植瘤的生长具有明显抑制作用,抑瘤率分别为46.7%和40.5%,均显著高于各阴性对照组(分别为9.7%,14.3%,7.0%和8.0%)。结论hTERT启动子可以调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向性表达,HSV-TK/GCV治疗系统在hTERT启动子调控下对肺癌细胞A549的体外增殖和裸鼠体内的移植瘤生长均有明显的抑制作用。
- 王艳萍唐小军周清华车国卫陈小禾朱大兴
- 关键词：自杀基因端粒酶催化亚单位靶向性表达
- 丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理被引量：76
- 2002年
- 目的 了解丹参酮对人肺癌细胞 (SPC A 1)的凋亡诱导作用 ,并探讨其可能的分子机理。方法 体外培养的SPC A 1细胞经无毒剂量的丹参酮ⅡA(0 .5mg/L)处理 5天 ,光镜、电镜观察细胞凋亡情况 ,流式细胞仪检测凋亡指数及凋亡相关基因的蛋白表达 ,并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果 SPC A 1细胞经丹参酮ⅡA处理后 ,电镜观察可见多量凋亡细胞。流式细胞仪检测 :丹参酮组凋亡指数显著高于顺铂组及对照组 ,而与维甲酸组比较无显著差异。丹参酮组促凋亡基因 p5 3、Fas、Bax表达水平明显升高 ,而凋亡抑制基因Bcl 2的表达水平则显著降低。结论 丹参酮ⅡA具有诱导肺癌SPC A 1细胞凋亡的作用 ,其分子机理可能是上调p5 3、Bax、Fas及下调Bcl 2的表达。
- 何金涛周清华袁淑兰王艳萍陈晓禾秦建军
- 关键词：丹参酮肺癌细胞凋亡分子机理流式细胞仪体外培养
